一种新型透明质酸酶的酶法制备特定分子量透明质酸的方法、透明质酸酶和应用技术

本发明专利技术属于生物化工技术领域，公开了一株高产透明质酸酶的链霉菌工程菌株，应用链霉菌高拷贝载体pKC1139载体，应用了gapdh启动子驱动透明质酸酶编码基因RS20745的表达，用xlnc信号肽控制成熟透明质酸酶的分泌，以变铅青链霉菌作为底盘细胞。本发明专利技术相较于其他得到特定分子量透明质酸的方法具有操作简便，常温常压下即可发生反应的优势，其次只需要将高分子量透明质酸加入水中进行溶解，不需要任何其他缓冲液，在酶解反应过程中不需要加入任何盐离子及有机试剂，不会对环境造成污染。而且在反应后的产物易于纯化。基于以上分析，该发明专利技术在制备特定分子量透明质酸时具有非常广泛的应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物化工，涉及特定分子量透明质酸制备，尤其是一种新型透明质酸酶的酶法制备特定分子量透明质酸的方法、透明质酸酶和应用。

技术介绍

1、透明质酸(hyaluronic acid)是一种酸性粘多糖，在脊椎动物和一些荚膜细菌中较为常见，因其具有高度粘弹性、持水保湿的作用，可将其运用在医疗、生物、食品、化妆品等生活中常见的领域中。但是不同分子量的透明质酸展现出不同的生物学活性。有研究表明高分子量透明质酸主要用于眼科手术、关节腔内注射等，但是在肿瘤相关运用方面高分子量透明质酸会促进肿瘤细胞向其他脏器的转移，而中低分子量透明质酸很好的抑制了肿瘤的生长。一般称10-50kda的ha为低分子量透明质酸，低分子量透明质酸由于其有较高的保湿性和润滑性，在医疗运用方面发挥很大的作用：中分子量透明质酸可以用在药物缓解方面，广泛用在滴眼液、化妆品、皮肤烧伤愈合及术后防粘连；小分子透明质酸可刺激主动脉及毛细血管血管内皮细胞的增生与迁移达到促进新生血管的生成的作用、低分子量ha能够渗透到真皮层，清除氧自由基，保护肉芽组织免受氧自由基的破坏，同时可促进炎症因子的表达，进而促进本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种新型透明质酸酶编码基因RS20745，其特征在于：所述基因RS20745来源于委内瑞拉链霉菌Streptomyces venezuelaeATCC 10712Sequence ID:CP029197.1，其基因序列为SEQ ID NO.1，其氨基酸序列为SEQ ID NO.2。

2.如权利要求1所述的基因RS20745编码的透明质酸酶。

3.根据权利要求2所述的透明质酸酶，其特征在于：所述透明质酸酶具有32.4kDa的分子量，属于透明质酸裂解酶类。

4.一株高产透明质酸酶的链霉菌工程菌株，其特征在于：所述工程菌株应用链霉菌高拷贝载体pKC113...

【技术特征摘要】

1.一种新型透明质酸酶编码基因rs20745，其特征在于：所述基因rs20745来源于委内瑞拉链霉菌streptomyces venezuelaeatcc 10712sequence id:cp029197.1，其基因序列为seq id no.1，其氨基酸序列为seq id no.2。

2.如权利要求1所述的基因rs20745编码的透明质酸酶。

3.根据权利要求2所述的透明质酸酶，其特征在于：所述透明质酸酶具有32.4kda的分子量，属于透明质酸裂解酶类。

4.一株高产透明质酸酶的链霉菌工程菌株，其特征在于：所述工程菌株应用链霉菌高拷贝载体pkc1139载体，应用了gapdh启动子驱动透明质酸酶编码基因rs20745的表达，用xlnc信号肽控制成熟透明质酸酶的分泌，以变铅青链霉菌(streptomyces lividans tk24)作为底盘细胞；

5.如权利要求4所述的高产透明质酸酶的工程菌株生产制备得到的透明质酸酶。

6.利用如权利要求4所述的链霉菌工程菌株制备透明质酸酶的方法，其特征在于：包括如下步骤：

7.如权利要求5所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘浩，谢周杰，段亚丹，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：