一种ITGB5条件性基因敲除小鼠模型、构建方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种ITGB5条件性基因敲除小鼠模型、构建方法及其应用，属于基因工程技术领域。本发明专利技术通过将Cas9 mRNA、gRNA和同源重组载体显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，并将该受精卵移植至假孕小鼠，获得F0代小鼠；将含有打靶序列的F0代小鼠与野生型小鼠杂交，得到含有打靶序列的杂合性小鼠；将得到的含有打靶序列的杂合性小鼠与Vil‑Cre阳性小鼠杂交，得到肠道ITGB5基因敲除动物模型。本发明专利技术获得条件性基因敲除(Conditional Knockout，CKO)小鼠，为研究ITGB5基因影响肠道对ETEC F4ac型细菌的抗性提供了便捷、可靠、经济的动物模型。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程，具体涉及一种itgb5条件性基因敲除小鼠模型、构建方法及其应用。

技术介绍

1、f4ac菌毛的产肠毒素性大肠杆菌(etec)是引起新生仔猪细菌性腹泻的主要病原微生物，研究报告表明etec需要通过菌毛黏附至宿主细胞，附着后通过分泌的蛋白质来破坏宿主细胞，操纵宿主细胞的信号传导途径，避免宿主细胞产生免疫反应并成功定植，释放毒素，导致肠道内电解质平衡紊乱，最终导致腹泻。

2、仔猪对etec f4ac的易感性由小肠上皮表面的特异性受体决定。本课题组前期选取4对etec f4ac抗性和易感的全同胞仔猪为试验对象，采用itraq蛋白质组定量技术鉴定其小肠蛋白表达差异，结果富集到唯一的整合素信号通路(integrin signallingpatinway：po0034)，说明该通路对etec f4acr感染仔猪小肠黏膜进而引起仔猪腹泻具有重要作用，从基因位于染色体上的位置、基因的分子功能、基因的蛋白质分子量大小角度对候选基因进行分化，发现itgb5最有可能为etec f4acr的候选基因。itgb5属于整合素家族成员，整合蛋白是参与细本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种ITGB5条件性基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述ITGB5条件性基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，flox区域序列如SEQ ID No.3所示。

3.根据权利要求1所述ITGB5条件性基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，5’同源臂序列和3’同源臂序列分别如SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示。

4.根据权利要求1所述ITGB5条件性基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤(3)中，对产出F0代小鼠进行PCR鉴定，其中，>

5.根据权利...

【技术特征摘要】

1.一种itgb5条件性基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述itgb5条件性基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，flox区域序列如seq id no.3所示。

3.根据权利要求1所述itgb5条件性基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，5’同源臂序列和3’同源臂序列分别如seq id no.4和seq id no.5所示。

4.根据权利要求1所述itgb5条件性基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤(3)中，对产出f0代小鼠进行pcr鉴定，其中，

5.根据权利要求1所述itgb5条件性基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤(4)中，对f1代小鼠进行flox位点pcr鉴定，鉴定所用引物对序列为seq id no.10和seq idno.11。

6.根据权利要求1所述itgb5条件性基因敲除...

【专利技术属性】
技术研发人员：王文文，李晓敏，唐辉，张勤，曾勇庆，范庆花，马晓云，李明辉，冯玉莲，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：