【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测，尤其是利用数字pcr技术对sts基因拷贝数进行检测，用于x-性连锁鱼鳞病的检测及相关基因携带人群的筛查。
技术介绍
1、x-连锁鱼鳞病为x染色体连锁隐性遗传性鱼鳞病的重要类型，又称隐形遗传x-连锁鱼鳞病(recessive x-linked ichthyosis，xli)、类固醇硫酸酯酶缺乏症(steroidsulfatase deficiency)、黑鱼鳞病，该病主要发生于男性，仅由异性合子的母亲传给男性胎儿，女性仅属携带者发病极少。全球范围男性新生儿发病率约1/2 000～1/9 500。常于出生时或出生后不久发病，表现为全身皮肤干燥、粗糙、黑褐色鳞屑，主要累及肢体伸侧和躯干侧面，颈部、面及耳部。
2、目前对x-连锁鱼鳞病的发病机制有较深入的研究，是由编码类固醇硫酸盐的类固醇硫酸酯酶基因(sts)的缺失或突变引起的遗传病，该基因位于xp22.31，共有10个外显子，编码类固醇硫酸酯酶(steroid sulfatase，sts)。sts广泛分布于包括胎盘、皮肤、阴道、乳腺、血液、肝脏、脑等人体各组织器官，并被证实与xli的发病机制相关。
技术实现思路
1、本专利技术在于提供一种基于微滴数字pcr(ddpcr)的引物探针组合及试剂盒，用于sts基因拷贝数检测。为x-连锁鱼鳞病的检测或sts拷贝数变异携带者的筛查的提供一种灵敏度高、特异性强、检测通量高、检测流程快速便捷的检测方法。
2、一方面，本专利技术提供了一组引物探针组合，所述的
3、表一sts基因外显子检测引物探针组合及序列表
4、
5、
6、在一些实施例中，根据不同型号数字pcr仪的荧光通道数，可以从上述10组外显子检测引物探针组合中任意选择1种，或2种，或3种，或4种，或5种外显子扩增检测引物探针组合。
7、另一方面，本专利技术还提供了用于人内参基因rpp40的扩增和检测，包括：pcr_rpp40_f(seq id no:31)、pcr_rpp40_r(seq id no:32)和probe_rpp40(seq id no:33)，具体序列如下表二所示。以rpp40的检出数量作为参考对象可以计算出sts基因外显子的拷贝数。
8、表二rpp40基因外显子检测引物探针组合及序列表
9、 序列编号 序列名称 核苷酸序列 seq id no:31 pcr_rpp40_f cagcgtaatctgcctaaa seq id no:32 pcr_rpp40_r gcttcctatcctccaaaa seq id no:33 probe_rpp40 acaccataattcctgatgacttgatcc
10、另一方面，本专利技术提供了一种试剂或试剂组合，其包含前述
技术实现思路
中的引物探针和/或其组合。
11、另一方面，本专利技术提供了一种用于sts基因的拷贝数检测的试剂盒，其包含前述试剂或试剂组合及数字pcr反应预混液。
12、在一些优选的实施例中，所述数字pcr反应预混液，包括：buffer、mg2+、dntps、热启动taq酶中的一种或多种。
13、另一方面，本专利技术提供了一种x连锁鱼鳞病或其携带人群的筛查方法：首先，使用核酸抽提试剂对样本进行dna抽提；其次用前述专利技术方案中的检测试剂或试剂盒对sts基因外显子以及内参基因进行数字pcr检测；然后根据ts基因外显子以及内参基因的比值确定sts基因的拷贝数，进而对x连锁鱼鳞病或其携带人群进行风行评估。
14、相较于现有技术，本技术方案具有以下特点和有益效果：
15、1、sts基因全长约136kb，基因片段长度长，外显子数量多，少量患者仅存在部分基因缺失。本专利技术采用微滴数字pcr方法检测sts基因外显子以及内参基因，通过多通道的荧光探针标记实现了对3到5个sts基因外显子及1个内参基因点的同时检测，兼顾了检测对象覆盖的全面性和检测结本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种X连锁鱼鳞病相关STS基因的拷贝数检测引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合用于STS基因第一外显子到第十外显子的扩增和检测，包括：
2.如权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合还包括用于人内参基因rpp40的扩增和检测，包括：PCR_rpp40_F(SEQ ID NO:31)、PCR_rpp40_R(SEQ ID NO:32)和Probe_rpp40(SEQ ID NO:33)。
3.一种X连锁鱼鳞病相关STS基因的拷贝数检测的方法，其特征在于，包含以下步骤：
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，样本类型是全血、血斑、唾液、口腔拭子中的一种或多种。
5.一种用于STS基因的拷贝数检测的试剂或试剂盒，其特征在于，包含权利要求1到2任一项所述的引物探针组合。
6.如权利要求5所述的试剂或试剂盒，其特征在于，还包含样本保存试剂、样本DNA提取试剂、数字PCR扩增试剂中的一种或多种。
7.如权利要求1到2所述的引物探针组合在制备用于X连锁鱼鳞病辅助诊断或STS拷贝数变异携带者筛查
8.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述X连锁鱼鳞病辅助诊断或STS拷贝数变异携带者筛查包含以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种x连锁鱼鳞病相关sts基因的拷贝数检测引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合用于sts基因第一外显子到第十外显子的扩增和检测，包括：
2.如权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合还包括用于人内参基因rpp40的扩增和检测，包括：pcr_rpp40_f(seq id no:31)、pcr_rpp40_r(seq id no:32)和probe_rpp40(seq id no:33)。
3.一种x连锁鱼鳞病相关sts基因的拷贝数检测的方法，其特征在于，包含以下步骤：
4.如权利要求3所述的方法，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：沈袁恒，赵霞，丁杰，郑英霞，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属新华医院，
类型：发明
国别省市：
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