【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物转化，具体为一种柚皮苷-7-o-葡萄糖苷和柚皮素的制备方法。
技术介绍
1、柚皮苷-7-o-葡萄糖苷，又名普鲁宁，是一种具有免疫、抗癌和抗氧化活性的黄酮苷类物质，对组织细胞具有保护作用，可以调节血糖平衡抑制癌细胞，也可作为药物原材料，用来合成各种化学医用药物，如用于合成毛细管扩张的药物等，可以被人体良好的吸收。在食品和药物方面有重要应用价值。但由于在自然界中普鲁宁的含量少且提取率低，难以从生物组织中提取制备。
2、柚皮素，是柚皮苷水解掉一分子葡萄糖和鼠李糖得到的苷元，主要存在于芸香科植物葡萄柚、西红柿、葡萄以及柑橘类水果中。柚皮素在医药、食品行业具有重要的用途。国内外的药理研究表明，柚皮素具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗纤维化、抗病毒、抗癌、抗心律失常、镇咳、预防动脉粥样硬化、保护肝功能等多种药理活性。同时可以作为食品中的香料添加剂，利用柚皮遮盖甜味剂的不良口感，以替代食品行业中大量蔗糖的应用，具有广阔前景。
3、α-l-鼠李糖苷酶是一种水解酶，主要作用于α-1，2、α-1，3、α-1，4、α-1，6以及α1链接的糖苷键，能够水解结合与底物末端非还原性的α-l-鼠李糖糖苷键，同时释放出鼠李糖和相应的配基。β-d-葡萄糖苷酶，又称纤维二糖酶，是纤维素分解酶系中的重要组成成分，能够水解结合于末端非还原性的β-d-葡萄糖键，同时释放出β-d-葡萄糖和相应的配基。
4、目前，柚皮苷-7-o-葡萄糖苷和柚皮素的制备主要采用从天然植物中萃取、酸水解柚皮苷和酶法水解柚皮苷等方法.然而，从天然植物
5、鉴于此，提出了一种柚皮苷-7-o-葡萄糖苷和柚皮素的制备方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种柚皮苷-7-o-葡萄糖苷和柚皮素的制备方法，以柚皮苷为原料，通过α-l-鼠李糖苷酶水解得到柚皮苷-7-o-葡萄糖苷，再通过β-d-葡萄糖苷酶进一步水解即可得到柚皮素，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种柚皮苷-7-o-葡萄糖苷和柚皮素的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
3、步骤s1、将柚皮苷置于反应容器中，加入缓冲液制成底物溶液；
4、步骤s2、加入酶制剂一，进行酶解反应；
5、步骤s3、将步骤s2所得反应液冷却后过滤，即可得柚皮苷-7-o-葡萄糖苷粗品；
6、步骤s4、将步骤s3所得滤饼加入醇搅拌溶解后，加入活性炭进行脱色；
7、步骤s5、将步骤s4所得过滤，滤液浓缩后，放置冷却结晶后过滤干燥；
8、步骤s6、将步骤s1所得溶液中加入酶制剂一和酶制剂二，进行酶解反应，所述酶制剂一为α-l-鼠李糖苷酶，所述酶制剂二为β-d-葡萄糖苷酶。
9、步骤s7、将步骤s6所得反应液冷却后过滤，即可得柚皮素粗品；
10、步骤s8、将步骤s7所得滤饼加入醇搅拌溶解后，加入活性炭进行脱色；
11、步骤s9、将步骤s8所得过滤，滤液浓缩后，放置冷却结晶后过滤干燥。
12、可选的，所述步骤s1中柚皮苷先在缓冲液中充分溶胀，制成底物溶液，且柚皮苷与缓冲液的比例为1:150-250；
13、所述柚皮苷液相含量为≥90％，所述缓冲液为柠檬酸-柠檬酸钠、乙酸-乙酸钠其中的一种或多种混合物，原料柚皮苷来源丰富易得，溶剂仅使用水和醇，原辅料成本低，原料转化率高，操作安全简单，无环境污染。
14、可选的，所述步骤s2中酶为微生物来源的α-l-鼠李糖苷酶，所述s6步骤中酶为微生物来源的α-l-鼠李糖苷酶和β-d-葡萄糖苷酶，所述α-l-鼠李糖苷酶与柚皮苷的质量比为0.2-0.4：1，所述β-d-葡萄糖苷酶与柚皮苷的质量比为0.2-0.5：1，且酶先用少量缓冲液溶解后再加入，使用的α-l-鼠李糖苷酶，β-d-葡萄糖苷酶，酶活稳定，所使用的设备简单，条件温和，步骤简单，产物单一，所得柚皮苷-7-o-葡萄糖苷和柚皮素收率高，纯度可达98％以上，适合工业化生产，可以满足食品和医药行业应用。
15、可选的，所述步骤s2中酶解反应时间为5-8h，ph为4.0-6.0，反应温度为40-60℃；
16、所述补正s6中酶解反应时间为10-18h，ph为4.0-6.0，反应温度为40-60℃。
17、可选的，所述步骤s3和步骤s7中冷却温度均为0-10℃，冷却时间均为2-3h，且所述步骤s3中对过滤后的滤液进行收集。
18、可选的，所述步骤s4和步骤s8中加入醇的量为柚皮苷量的5-20倍，活性炭与柚皮苷的质量比为1-5:10。
19、可选的，所述步骤s4和步骤s8中脱色时间均为40-80min，脱色温度均为60-75℃。
20、可选的，所述步骤s5和步骤s9中的冷却温度均为2-8℃，冷却时间均为4-8h。
21、可选的，所述步骤s5进一步的包括：以柚皮苷为底物，鼠李糖苷酶为催化剂，在缓冲液中进行反应生成柚皮苷-7-o-葡萄糖苷。
22、可选的，所述步骤s9进一步的包括：以柚皮苷为底物，α-l-鼠李糖苷酶和β-d-葡萄糖苷酶为催化剂，在缓冲液中进行反应生成柚皮苷-7-o-葡萄糖苷。
23、与现有技术相比，本专利技术提供了一种柚皮苷-7-o-葡萄糖苷和柚皮素的制备方法，具备以下有益效果：
24、1、该柚皮苷-7-o-葡萄糖苷和柚皮素的制备方法，使用的α-l-鼠李糖苷酶，β-d-葡萄糖苷酶，酶活稳定，所使用的设备简单，条件温和，步骤简单，产物单一，所得柚皮苷-7-o-葡萄糖苷和柚皮素收率高，纯度可达98％以上，适合工业化生产，可以满足食品和医药行业应用。
25、2、该柚皮苷-7-o-葡萄糖苷和柚皮素的制备方法，柚皮苷经α-l-鼠李糖苷酶水解后可制得柚皮苷-7-o-葡萄糖苷，经α-l-鼠李糖苷酶和β-d-葡萄糖苷酶水解后可制得柚皮素。因此采用本方法，可同时制得柚皮苷-7-o-葡萄糖苷和柚皮素。
26、3、该柚皮苷-7-o-葡萄糖苷和柚皮素的制备方法，原料柚皮苷来源丰富易得，溶剂仅使用水和醇，原辅料成本低，原料转化率高，操作安全简单，无环境污染。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种柚皮苷-7-O-葡萄糖苷和柚皮素的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种柚皮苷-7-O-葡萄糖苷和柚皮素的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中柚皮苷先在缓冲液中充分溶胀，制成底物溶液，且柚皮苷与缓冲液的比例为1:150-250；
3.根据权利要求1所述的一种柚皮苷-7-O-葡萄糖苷和柚皮素的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中酶为微生物来源的α-L-鼠李糖苷酶，所述S6步骤中酶为微生物来源的α-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡萄糖苷酶，所述α-L-鼠李糖苷酶与柚皮苷的质量比为0.2-0.4：1，所述β-D-葡萄糖苷酶与柚皮苷的质量比为0.2-0.5：1，且酶先用少量缓冲液溶解后再加入。
4.根据权利要求1所述的一种柚皮苷-7-O-葡萄糖苷和柚皮素的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中酶解反应时间为5-8h，pH为4.0-6.0，反应温度为40-60℃；
5.根据权利要求1所述的一种柚皮苷-7-O-葡萄糖苷和柚皮素的制备方法，其特征在于：所述步骤S3和步骤S7中冷却温度均为0-10℃，冷却时间
6.根据权利要求1所述的一种柚皮苷-7-O-葡萄糖苷和柚皮素的制备方法，其特征在于：所述步骤S4和步骤S8中加入醇的量为柚皮苷量的5-20倍，活性炭与柚皮苷的质量比为1-5:10。
7.根据权利要求1所述的一种柚皮苷-7-O-葡萄糖苷和柚皮素的制备方法，其特征在于：所述步骤S4和步骤S8中脱色时间均为40-80min，脱色温度均为60-75℃。
8.根据权利要求1所述的一种柚皮苷-7-O-葡萄糖苷和柚皮素的制备方法，其特征在于：所述步骤S5和步骤S9中的冷却温度均为2-8℃，冷却时间均为4-8h。
9.根据权利要求1所述的一种柚皮苷-7-O-葡萄糖苷和柚皮素的制备方法，其特征在于：所述步骤S5进一步的包括：以柚皮苷为底物，鼠李糖苷酶为催化剂，在缓冲液中进行反应生成柚皮苷-7-O-葡萄糖苷。
10.根据权利要求1所述的一种柚皮苷-7-O-葡萄糖苷和柚皮素的制备方法，其特征在于：所述步骤S9进一步的包括：以柚皮苷为底物，α-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡萄糖苷酶为催化剂，在缓冲液中进行反应生成柚皮苷-7-O-葡萄糖苷。
...【技术特征摘要】
1.一种柚皮苷-7-o-葡萄糖苷和柚皮素的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种柚皮苷-7-o-葡萄糖苷和柚皮素的制备方法，其特征在于：所述步骤s1中柚皮苷先在缓冲液中充分溶胀，制成底物溶液，且柚皮苷与缓冲液的比例为1:150-250；
3.根据权利要求1所述的一种柚皮苷-7-o-葡萄糖苷和柚皮素的制备方法，其特征在于：所述步骤s2中酶为微生物来源的α-l-鼠李糖苷酶，所述s6步骤中酶为微生物来源的α-l-鼠李糖苷酶和β-d-葡萄糖苷酶，所述α-l-鼠李糖苷酶与柚皮苷的质量比为0.2-0.4：1，所述β-d-葡萄糖苷酶与柚皮苷的质量比为0.2-0.5：1，且酶先用少量缓冲液溶解后再加入。
4.根据权利要求1所述的一种柚皮苷-7-o-葡萄糖苷和柚皮素的制备方法，其特征在于：所述步骤s2中酶解反应时间为5-8h，ph为4.0-6.0，反应温度为40-60℃；
5.根据权利要求1所述的一种柚皮苷-7-o-葡萄糖苷和柚皮素的制备方法，其特征在于：所述步骤s3和步骤s7中冷却温度均为0-10℃，冷却时间均为2-3h，且所述步骤...
【专利技术属性】
技术研发人员：李言威，王蕊，
申请(专利权)人：西安全奥生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。