一种提高曲酸产量的方法及应用技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域，公开了一种提高曲酸产量的方法，利用产曲酸菌株黑曲霉工程菌实现提高曲酸产量，该方法在黑曲霉菌株中同时过表达多个拷贝数的KojA蛋白和VHb蛋白；过表达KojA蛋白和VHb蛋白的产曲酸菌株黑曲霉工程菌在发酵中能够生产曲酸，且曲酸产量达到40g/L至100g/L。本发明专利技术通过分子克隆技术和基因工程技术kojA基因在黑曲霉中过表达并多拷贝至菌株中，并且在此基础上过表达可以改善菌株生长、促进蛋白质合成以及提高代谢产物产量的外源基因vgb基因。最终使重组菌株高产曲酸。最终可使重组菌株的曲酸产量达到40～100g/L。该发明专利技术可用于曲酸工业生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程，尤其是一种提高曲酸产量的方法及应用。

技术介绍

1、曲酸是重要的工业原料，在食品与农药上可作为防腐剂，脂肪和油的氧化剂，抗菌剂。化妆品行业可作为肥皂、面霜等产品中的亮肤剂、紫外线防护剂，有着美白、抗衰老效果。化学品的生产与制备中，作为金属和有机材料之间的粘合剂，金属吸附剂。制药方面则是抗真菌药物或作为有效杀菌剂的成分。现阶段曲酸主要有米曲霉进行发酵生产，但是目前所采用的米曲霉发酵菌株及其发酵性能很难获得进一步提升和优化，其产量普遍维持在30g/l左右，以葡萄糖为底物得率不超过0.3g/g。随着各行各业对曲酸的需求日益增加，对更廉价、便捷且成本低的曲酸生产方式有着更为迫切的需求。采用生物工程，代谢工程和合成生物学方法获得高产曲酸的工程菌株是个潜在方向。

2、鉴于曲酸生物合成途径并未解析清楚，鲜有在其他不能自然合成曲酸的菌株中实现曲酸异源合成的报道。

技术实现思路

1、本专利技术的目的在于克服现有技术中的不足之处，提供一种提高曲酸产量的方法及应用。

<p>2、本专利技术解本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种提高曲酸产量的方法，其特征在于：所述方法利用产曲酸菌株实现提高曲酸产量，所述方法在产曲酸菌株中过表达KojA蛋白和VHb蛋白；过表达KojA蛋白和VHb蛋白的产曲酸工程菌株在发酵中能够生产曲酸，且曲酸产量达到40g/L至100g/L。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述产曲酸菌株为黑曲霉。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述过表达KojA蛋白的方法是工程菌株中编码KojA蛋白的基因kojA的拷贝数为2到5个。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：实现KojA蛋白过表达和实现拷贝数为2到5个kojA基因过表达的方法，...

【技术特征摘要】

1.一种提高曲酸产量的方法，其特征在于：所述方法利用产曲酸菌株实现提高曲酸产量，所述方法在产曲酸菌株中过表达koja蛋白和vhb蛋白；过表达koja蛋白和vhb蛋白的产曲酸工程菌株在发酵中能够生产曲酸，且曲酸产量达到40g/l至100g/l。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述产曲酸菌株为黑曲霉。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述过表达koja蛋白的方法是工程菌株中编码koja蛋白的基因koja的拷贝数为2到5个。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：实现koja蛋白过表达和实现拷贝数为2到5个koja基因过表达的方法，具体为：通过人工合成koja基因核苷酸序列，并连接到质粒plh454上，获得koja基因过表达质粒plh1081；并用农杆菌介导的方法将plh1081转入产曲酸菌株中，获得koja基因过表达工程菌，然后将工程菌中潮霉素抗性筛选标记hph丢失后，进入下一轮农杆菌介导的plh1081转入上一轮中获得的潮霉素抗性筛选标记hp...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘浩，黄小洁，梁兴英，刘蛟，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：