一种在毕赤酵母中高效分泌表达全链长胶原蛋白的方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种在毕赤酵母中高效分泌表达全链长胶原蛋白的方法及其应用。包括以下过程：扩增III型胶原片段col3a1及载体片段pPIC9k，以无缝克隆的方式连接，获得载体pPIC9k‑col3a1，筛选毕赤酵母中超过100kDa分子量的分泌蛋白，将其信号肽序列与酿酒酵母α‑杂交因子前导肽融合，筛选出载体pPIC9K‑SigG‑col3a1，筛选分子伴侣表达载体pPICZaA‑SH1，将其导入GS115/pPIC9k‑SigG‑col3a1感受态细胞。本发明专利技术可用于全链长胶原蛋白的分泌表达，解决了大分子蛋白，尤其是含端肽胶原蛋白在毕赤酵母中难以分泌或者分泌量低的问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程，具体涉及一种在毕赤酵母中高效分泌表达全链长胶原蛋白的方法及其应用。

技术介绍

1、越来越多的研究表明，细胞外基质在器官发育以及维持组织正常生理状态过程中发挥了重要的作用。据统计，在发达国家约有45％的死亡病例与细胞外基质失调相关，如硬皮病、动脉粥样硬化、酒精肝等(biochemistry of collagens,laminins and elastin,academicpress,2016)。其中，胶原蛋白作为细胞外基质主要成分，更是发挥了举足轻重的作用。

2、迄今为止，已被发现的胶原有28种型号之多，按其结构可以分为纤维形成胶原、纤维形成辅助胶原、网状胶原，以及膜胶原。无论哪种胶原，都离不开三螺旋结构。与此同时，近年来非螺旋结构区域也引发了越来越多人的关注。天然胶原蛋白三股螺旋结构的形成的最初动力来自于端肽富含的半胱氨酸残基，半胱氨酸残基通过二硫键在胶原分子链束两端形成“扎口”，然后在分子间氢键作用力下，形成了类似麻花的三螺旋结构。

3、目前商品化的重组人源化胶原蛋白以片段或片段组合为主，大小从几kda至本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种在毕赤酵母中高效分泌表达全链长胶原蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述在毕赤酵母中高效分泌表达的全链长胶原蛋白为包含成熟链前后的端肽。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述包含成熟链前后的端肽包括I型、II型、IV型、V型、VI型、VII型、VIII型、IX型、X型、XI型、XII型、XIII型、XIV型、XV型、XVI型、XVII型、XVIII型、XIV型、XX型、XXI型、XXII型、XXIII型、XXIV型、XXV型、XXVI型、XXVII型。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于...

【技术特征摘要】

1.一种在毕赤酵母中高效分泌表达全链长胶原蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述在毕赤酵母中高效分泌表达的全链长胶原蛋白为包含成熟链前后的端肽。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述包含成熟链前后的端肽包括i型、ii型、iv型、v型、vi型、vii型、viii型、ix型、x型、xi型、xii型、xiii型、xiv型、xv型、xvi型、xvii型、xviii型、xiv型、xx型、xxi型、xxii型、xxiii型、xxiv型、xxv型、xxvi型、xxvii型。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步...

【专利技术属性】
技术研发人员：张齐，梁清莲，吴旭伟，梁凤婷，
申请(专利权)人：肽源广州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：