【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学，涉及一种能够募集树突状细胞的重组蛋白及其在免疫治疗方面的应用。
技术介绍
1、dc细胞是抗原呈递细胞(apc)，在免疫治疗中具有巨大潜力，能摄取、处理抗原并将其呈递给t细胞以激活免疫应答，从而产生更大的免疫反应。自然激活的树突状细胞成熟并迁移到引流淋巴结，刺激t辅助性细胞(cd4+)和t细胞毒性细胞(cd8+)的产生，激活应性免疫反应，并可能在未来遇到肿瘤抗原时产生记忆反应，避免复发的机会。然而，dc少量分布于血液、与外界接触的皮肤、黏膜等部位，其分散状态极大地限制了与抗原接触的机会。游离抗原在代谢过程中会迅速清除，dc细胞将无法捕获足够的抗原(药物)进行加工提呈，免疫监测效能有限。在这种情况下，dc细胞不太可能被激活到足以向t细胞提供足够的共刺激信号。因此，增加对抗原的利用并改善呈递效率，将有望进一步提高所载肿瘤疫苗的转化潜能，对临床免疫治疗具有重要意义。
2、近年来，基于调节免疫治疗的天然蛋白类材料越来越受到人们的关注和青睐。人发角蛋白作为一种天然生物材料，具有良好的生物相容性和可降解性，已被广泛用于生物医学工程领域。除了在止血、促成纤维细胞增殖和迁移以及胶原蛋白合成等方面显示出了出色的能力外，角蛋白对巨噬细胞表型也表现出特殊的免疫调节能力。因此，人发角蛋白在免疫调节中具有较大潜力。如何在免疫治疗中增加先天免疫反应敏感的同时最大限度地减少不良事件，是角蛋白类生物材料调控免疫微环境和临床精准化治疗的新需求及目标。然而，角蛋白的构效关系目前尚未明确，极大地限制了在分子水平上进行免疫调节的能力，
3、因此，有必要挖掘角蛋白中具有募集dc细胞等调节免疫功能的关键结构域，并提供该结构域蛋白制备为凝胶、微针的方法，提高抗原呈递效率，以期改善肿瘤疫苗在免疫治疗的临床试验/研究效果。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种能够募集树突状细胞的重组蛋白；本专利技术的目的之二在于提供一种能够募集树突状细胞的重组蛋白的制备方法；本专利技术的目的之三在于提供一种能够募集树突状细胞的重组蛋白在制备蛋白微针或蛋白凝胶方面的应用；本专利技术的目的之四在于提供一种蛋白微针；本专利技术的目的之五在于提供一种蛋白微针的制备方法；本专利技术的目的之六在于提供一种蛋白凝胶；本专利技术的目的之七在于提供一种蛋白凝胶的制备方法；本专利技术的目的之八在于提供一种蛋白凝胶或蛋白微针在免疫细胞调节方面的应用。
2、为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、1.一种能够募集树突状细胞的重组蛋白，所述重组蛋白的氨基酸序列包括seq idno：1、seq id no：2、seq id no：3、seq id no：4、seq id no：5或seq id no：6中的任意一种。
4、2.上述重组蛋白的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
5、(1)重组质粒的构建和蛋白表达：将上述重组蛋白翻译为对应的基因序列以构建重组质粒，转于大肠杆菌bl21(de3)感受态细胞中，再将其接种于含有50μg/ml氨苄青霉素的无菌液体lb培养基中，170rpm的转速下在37℃的摇床中培养8～10h，当od值达到0.8～1.0时将温度降至25℃，使用终浓度为1mm的异丙基硫代半乳糖苷(iptg)进行诱导8h后，在4℃下以8000rpm的转速离心5min后保留沉淀(即大肠杆菌)；
6、(2)蛋白的纯化：a、将步骤(1)中得到的沉淀进行超声破碎后进行离心，得到含目的蛋白的沉淀，按照1:5，mg:ml的质量体积比向所述含目的蛋白的沉淀中加入洗涤液ⅰ进行重悬，800～1000bar均质破碎后在4℃下以12000rpm的转速离心1h，弃上清得到菌体沉淀，b、然后按照1:10，mg:ml的质量体积比向所述菌体沉淀中加入洗涤液ⅱ进行重悬沉淀，弃上清得到沉淀ⅲ，c、再按照1:10，mg:ml的质量体积比向所述沉淀ⅲ中加入洗涤液ⅲ进行重悬沉淀，弃上清得到沉淀ⅳ，d、将所述沉淀ⅳ用纯净水洗涤2次后重悬，置于-80℃下进行冷冻干燥即可；
7、所述洗涤液ⅰ为ph＝8.0且含有50mm tris-hcl、5mm edta和20mmβ-巯基乙醇的水溶液；
8、所述洗涤液ⅱ为ph＝8.0且含有50mm tris-hcl、5mm edta、20mmβ-巯基乙醇、1m尿素、5ml/l tritonx-100的水溶液；
9、所述洗涤液ⅲ为ph＝8.0且含有50mm tris-hcl、5mm edta,20mmβ-巯基乙醇的水溶液。
10、优选的，所述重悬沉淀具体为：超声3min以上以8000～12000rpm离心10～20min；
11、所述冷冻干燥在冻干机中进行。
12、3.上述重组蛋白在制备蛋白微针或蛋白凝胶方面的应用。
13、4.一种蛋白微针，所述蛋白微针包括微针和固定在所述微针表面的上述重组蛋白。
14、5.上述蛋白微针的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
15、(1)重组角蛋白复合凝胶的制备：将上述重组蛋白溶解于羧甲基纤维素(cmc)和聚乙烯吡咯烷酮(pvp)的混合液中使所述重组蛋白的质量分数为15％，加入葡萄糖氧化酶，在37℃磁搅拌24小时后形成复合凝胶；
16、(2)蛋白微针的制备：将步骤(1)制备的复合凝胶浇注于含有微孔阵列的聚二甲基硅氧烷(pdms)模具中，在针腔中沉积重组蛋白/羧甲基纤维素(cmc)聚乙烯吡咯烷酮(pvp)混合凝胶，置于真空度为0.09～0.1mpa的真空干燥箱真空脱泡10min，重复真空脱泡三次，脱除气泡使混合溶液充分进入模具微孔，然后，在模具上用羧甲基纤维素(cmc)聚乙烯吡咯烷酮(pvp)凝胶制备背衬层，置于真空度为0.09～0.1mpa的真空干燥箱5min，除去多余溶液；
17、(3)蛋白微针成型：将经过步骤(2)中方法处理后的微针模具置于4℃的恒温环境中干燥平衡12h；
18、(4)脱模：从模具中取出微针，即得到蛋白微针。
19、优选的，所述混合溶液中羧甲基纤维素(cmc)和聚乙烯吡咯烷酮(pvp)的重量比为1:2；
20、所述葡萄糖氧化酶加入溶液中葡萄糖氧化酶的浓度为0.8mg/ml。
21、6.一种蛋白凝胶，所述蛋白凝胶为上述重组蛋白溶于水中形成的重组蛋白水溶液。
22、7.上述蛋白凝胶的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：将上述重组蛋白溶解于水中得到上述重组蛋白的质量分数为5～45％，在25～37℃磁搅拌24h后形成蛋白凝胶。
23、8.上述蛋白微针或蛋白凝胶在免疫细胞调节方面的应用。
24、本专利技术的有益效果在于：本专利技术公开了一种能够募集树突状细胞的重组蛋白，其氨基酸序列包括seq id no：1、seq id no：2、seq id no：3、seq id no：4、seq id no：5或seq id no：6中的任意一本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种能够募集树突状细胞的重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6中的任意一种。
2.权利要求1所述的重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述重悬沉淀具体为：超声3min以上以8000～12000rpm离心10～20min；
4.权利要求1所述重组蛋白在制备蛋白微针或蛋白凝胶方面的应用。
5.一种蛋白微针，其特征在于，所述蛋白微针包括微针和固定在所述微针表面的权利要求1所述重组蛋白。
6.权利要求5所述蛋白微针的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述混合溶液中羧甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮的重量比为1:2；
8.一种蛋白凝胶，其特征在于，所述蛋白凝胶为权利要求1所述重组蛋白溶于水中形成的重组蛋白水溶液。
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10.权利要求5中所述蛋白微针或权利要求8中所述蛋白凝胶在免疫细胞调节方面的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种能够募集树突状细胞的重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白的氨基酸序列包括seq id no：1、seq id no：2、seq id no：3、seq id no：4、seq id no：5或seq id no：6中的任意一种。
2.权利要求1所述的重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述重悬沉淀具体为：超声3min以上以8000～12000rpm离心10～20min；
4.权利要求1所述重组蛋白在制备蛋白微针或蛋白凝胶方面的应用。
5.一种蛋白微针，其特征在于，所述蛋白微针包括微针和固定在所述微针表面的权利要...
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