【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医学，具体为一种识别牛结节性皮肤病病毒orf29蛋白的b细胞连续性线性及构象型抗原表位、抗原表位关键性氨基酸位点及其应用。
技术介绍
1、牛结节性皮肤病(lumpy skin disease,lsd)是由牛结节性皮肤病病毒(lumpyskin disease virus,lsdv)感染后引起的一种急性、亚急性接触性的传染病。lsdv主要引起牛的发热、丘疹或皮肤结节，如头、颈、肩和乳房等处，严重时呈现脓疱状损伤和组织坏死性结痂。牛结节性皮肤病(lsd)是我国近年来新发的一种重要境外输入性动物疫病，对养牛业造成了重大的经济损失，严重影响了我国养牛产业的健康发展。lsd于1929年首次被发现于赞比亚共和国，随后该病迅速向中东、东欧和中亚等地区蔓延扩散。然而，由于缺少针对该疫病有效的治疗方法和特异性疫苗，自2019年以来，lsd在全国14个省、市和自治区都有确诊发生，并呈现逐渐蔓延的趋势，防控形势日益严峻。
2、lsdv与牛痘病毒(cowpox virus，cpxv)差异很大，而与绵羊痘病毒(sheep poxvirus，sppv)和山羊痘病毒(goatpox virus，gtpv)相似，同属于羊痘病毒属(capv)。目前，我们对痘病毒基因组的理解大部分来自对痘苗病毒(vacciniavirus,vacv)的相关研究，特异性针对lsdv病毒基因组功能性的研究极其匮乏。目前，特异性针对lsdv编码蛋白生物学功能的研究极少。orf29蛋白是lsdv重要的结构蛋白，其具体功能尚未有明确的报道。因此，深入阐述lsd
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种识别牛结节性皮肤病病毒orf29蛋白b细胞连续性线性及构象型抗原表位、关键性氨基酸位点及其应用，解决了
技术介绍
中提出的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、一种识别牛结节性皮肤病病毒orf29蛋白的b细胞连续性线性抗原表位，该线性抗原表位序列为innpiggvf。
4、一种识别牛结节性皮肤病病毒orf29蛋白的b细胞连续性线性表位关键性氨基酸位点，该线性抗原表位关键性氨基酸位点为199i、200g、201g、202v和203v。
5、一种识别牛结节性皮肤病病毒orf29蛋白的b细胞连续性构象型抗原表位，该构象型抗原表位序列为innpiggvf。
6、一种识别牛结节性皮肤病病毒orf29蛋白的b细胞连续性构象型表位关键性氨基酸位点，该构象型抗原表位关键性氨基酸位点为199i、200g、201g和203v。
7、一种识别牛结节性皮肤病病毒orf29蛋白的b细胞连续性线性及构象型抗原表位在临床诊断及制备抑制牛结节性皮肤病病毒试剂或药物中的应用。
8、抗原决定簇(antigenic determinant)是指抗原分子能够与抗体发生特异性结合的位点，能与其相应抗体或致敏淋巴细胞发生特异性结合的结构，具有一定组成和结构的特殊化学基团。结构已经确定的抗原决定簇称为抗原表位(epitope)，可分为线性表位(liner epitope)和构象型表位(conformational epitope)。
9、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
10、1、本专利技术中，针对lsdv orf29蛋白主要采用是肽扫描技术手段，确定其b细胞连续性线性及构象型抗原表位为195innpiggvf203。同时，采取截短、缺失及回补等措施，确定了lsdv orf29蛋白的b细胞线性及构象型抗原表位，该抗原表位在lsdv、gtpv、sppv具有保守性。
11、2、本专利技术采用定点突变技术将鉴定出的抗原表位(195innpiggvf203)每个氨基酸突变为对蛋白质结构影响较小的丙氨酸(alanine,a)。确定了199i、200g、201g、202v和203f为lsdv orf29蛋白连续性线性表位的关键性氨基酸位点；利用间接免疫荧光实验确定了199i、200g、201g和203f为lsdv orf29蛋白连续性构象表位的关键性氨基酸位点。
12、3、利用红色荧光标记的lsdv毒株(rfp-lsdv)和绿色荧光标记的lsdv毒株(egfp-lsdv)证明orf29单克隆抗体具有中和病毒活性，发挥中和作用。
13、4、本专利技术鉴定得到一种lsdv orf29蛋白b细胞连续性线性和构象型表位。该羊痘病毒属中(gtpv、sppv和lsdv)较保守的b细胞表位，丰富了orf29蛋白的免疫学和结构生物学功能，为后续研究羊痘病毒属相关蛋白的抗原特性提供了参考。同时，该单克隆抗体(3c4-2e9)具有中和活性，可应用于临床诊断试剂、抗病毒药物及抗原表位疫苗等的研制。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种识别牛结节性皮肤病病毒ORF29蛋白的B细胞连续性线性抗原表位，该线性抗原表位序列为INNPIGGVF。
2.一种识别牛结节性皮肤病病毒ORF29蛋白的B细胞连续性线性抗原表位关键性氨基酸位点，该线性抗原表位关键性氨基酸位点为199I、200G、201G、202V和203V。
3.一种识别牛结节性皮肤病病毒ORF29蛋白的B细胞连续性构象型抗原表位，该构象型抗原表位序列为INNPIGGVF。
4.一种识别牛结节性皮肤病病毒ORF29蛋白的B细胞连续性构象型抗原表位关键性氨基酸位点，该构象型抗原表位关键性氨基酸位点为199I、200G、201G和203V。
5.一种识别牛结节性皮肤病病毒ORF29蛋白的B细胞连续性线性及构象型抗原表位在临床诊断及制备抑制牛结节性皮肤病病毒试剂或药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种识别牛结节性皮肤病病毒orf29蛋白的b细胞连续性线性抗原表位，该线性抗原表位序列为innpiggvf。
2.一种识别牛结节性皮肤病病毒orf29蛋白的b细胞连续性线性抗原表位关键性氨基酸位点，该线性抗原表位关键性氨基酸位点为199i、200g、201g、202v和203v。
3.一种识别牛结节性皮肤病病毒orf29蛋白的b细胞连续性构象型抗原...
【专利技术属性】
技术研发人员：任善会，孙跃峰，殷相平，陈豪泰，郜晓虹，王相伟，高小龙，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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