【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药物纯化，涉及一种索玛鲁肽的分离纯化方法。
技术介绍
1、索玛鲁肽的英文名叫做semaglutide，别名司美格鲁肽，cas号为910463-68-2，分子式为c187h291n45059，分子量为4113.64g/mol。
2、肽序列为：
3、h-his-aib-glu-gly-thr-phe-thr-ser-asp-val-ser-ser-tyr-leu-glu-gly-gln-ala-ala-lys(aeeac-aeeac-γ-glu-17-carboxyheptadecanoyl)-glu-phe-ile-ala-trp-leu-val-arg-gly-arg-gly-oh。
4、索玛鲁肽是由丹麦诺和诺德公司开发的新型长效glp-1类似物，索玛鲁肽的肽链比较长，结构也比较复杂，在合成的过程中产生的杂质很多，因此要对索玛鲁肽粗品进行纯化。
5、与利拉鲁肽相比，索玛鲁肽亲水性更强，能够抑制dpp-4酶的水解，延长生物半衰期，促进胰岛细胞的再生，是更长效的降低血糖，因此索玛鲁肽的应用前景非常广泛。
6、糖尿病是一种全球性的高发疾病，世界各国的糖尿病患者都急剧增加，近五十年内ⅱ型糖尿病急剧增加的趋势仍难以缓解。糖尿病涉及全身各个系统，严重影响人们的劳动能力，而且威胁人们的生命安全。因此，研发索玛鲁肽的纯化方法具有重要意义。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种索玛鲁肽的分离纯化方
2、为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、一种索玛鲁肽的分离纯化方法，包括如下步骤：
4、1)将索玛鲁肽粗品进行溶解、过滤，得到索玛鲁肽溶液；
5、2)将步骤1)得到的索玛鲁肽溶液上样到装有unisil硅胶微球或者uni ps填料的层析柱中进行层析，采用酸性的水溶液和有机溶剂作为流动相对索玛鲁肽溶液进行洗脱；
6、3)分段收集经步骤2)层析、洗脱后的目的峰值的索玛鲁肽溶液，对符合要求的组份液进行汇总，得到纯化的索玛鲁肽。
7、其中，步骤2)中所述unisil硅胶微球的型号是unisilc18微球，即含有十八烷基键合的硅胶基质的填料，其粒径为8微米、10微米、15微米、20微米、30微米其中的一种；所述聚合物填料是uni ps填料，即聚苯乙烯/二乙烯基苯基质的聚合物填料，其粒径为8微米、10微米、15微米、20微米、30微米其中的一种；所述聚合物填料也可以是uni psn填料，即聚乙烯吡咯烷酮/二乙烯基苯基质的聚合物填料，其粒径为8微米、10微米、15微米、20微米、30微米其中的一种。所述unisil硅胶微球的型号是unisil c18微球，它具有严格控制的粒径大小和孔径结构，为单分散的、具有孔道结构的微球，作为色谱填料时具有很好的针对性。本专利技术采用单分散的unisil c18或者unips微球作为固定相，仅需一步层析即可使索玛鲁肽纯度高于99.7％，收率可达72％。
8、优选的，步骤1)中，所述索玛鲁肽粗品的纯度为60-80％，例如纯度为65％、72％、77％、80％等；所述索玛鲁肽溶液的浓度为20mg/ml。
9、优选的，步骤2)中，所述有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈中的一种。
10、优选的，步骤2)中，所述流动相中，酸性的水溶液为含有乙酸、甲酸或者三氟乙酸的水溶液。
11、优选的，步骤2)中，所述具体洗脱过程为：采用酸性的水溶液和有机溶剂的流动相进行洗脱，在20个柱体积内，有机相从40％洗到60％，流速为0.5ml/min。
12、优选的，步骤2)中，上样洗脱前还要对层析柱进行柱前处理，其具体过程为：采用有机溶剂对层析柱进行除杂，再采用有机相比例为40％的流动相对除杂后的层析柱进行平衡。
13、优选的，步骤1)中，所述过滤采用孔径为0.3-0.5μm的滤膜进行过滤，例如滤膜的孔径为0.3μm、0.35μm、0.4μm、0.45μm或0.5μm等。
14、步骤1)中，所述索玛鲁肽粗品的纯度为60-80％。
15、优选的，所述步骤2)还可以进一步采用两步纯化，即，先将索玛鲁肽溶液上样到装有unisil硅胶微球或者uni ps填料的层析柱中进行层析，再用unisilc18硅胶填料进行层析，采用酸性的水溶液和有机溶剂作为流动相对索玛鲁肽溶液进行洗脱。这样两步纯化的方法，可以得到更高纯度的索玛鲁肽，并大幅度提升样品的上样量，载量大大提高，从而提升产能。
16、作为本专利技术的优选方案，所述索玛鲁肽的分离纯化方法包括如下步骤：
17、1)将纯度为60-80％的索玛鲁肽粗品用稀氨水进行溶解，采用孔径为0.3-0.5μm的滤膜进行过滤，得到浓度为20mg/ml的索玛鲁肽溶液；
18、2)采用高浓度有机相对装有unisil c18或者unips微球的层析柱进行除杂，再采用有机溶剂含量百分比为40％的流动相对除杂后的层析柱进行平衡，将步骤1)得到的索玛鲁肽溶液上样到经平衡处理的层析柱中进行层析，采用酸性的水溶液和有机溶剂对索玛鲁肽溶液进行洗脱，所述洗脱的时间为120-150min，所述流动相的流速为0.5ml/min；其中，将索玛鲁肽溶液用层析柱进行层析优选为两步，即先用装有unisil硅胶微球或者uni ps填料的层析柱进行层析，再用unisilc18硅胶填料进行层析；两步层析的流动相相同；
19、3)分段收集经步骤2)层析、洗脱后的目的峰值的索玛鲁肽溶液，对符合要求的组份液进行汇总，得到纯化的索玛鲁肽纯化液。
20、本专利技术的目的之二在于提供一种目的之一所述的分离纯化方法得到的索玛鲁肽。
21、与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
22、本专利技术的索玛鲁肽的分离纯化方法，仅需一步层析分离纯化索玛鲁肽，不仅纯度高、收率高且稳定，不管是合成还是发酵工艺的索玛鲁肽粗品均可实现，而且操作简单方便，所用固定相可重复利用，所用流动相量少节约，大大降低了成本。具体的，仅需一步层析纯化即可满足纯度>99.7％、最大单杂<0.1％的要求，纯化收率>70％。
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1.一种索玛鲁肽的分离纯化方法，其特征在于，所述分离纯化方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤2)中，所述UniSil硅胶微球的型号是UniSilC18微球；所述聚合物填料是Uni PS填料，即聚苯乙烯/二乙烯基苯基质的聚合物填料；所述聚合物填料也可以是Uni PSN填料，即聚乙烯吡咯烷酮/二乙烯基苯基质的聚合物填料。
3.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤2)中，所述流动相中，有机溶剂为甲醇、乙醇和乙腈中的一种。
4.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤2)中，所述流动相中，酸性的水溶液为含有乙酸、甲酸或者三氟乙酸的水溶液。
5.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤2)中，所述洗脱的具体过程为：采用酸性的水溶液和有机溶剂的流动相进行洗脱，在20个柱体积内有机相从40％洗到60％，流速为0.5ml/min。
6.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，在步骤2)中，洗脱前还要对层析柱进行柱前处理，其具体过程为：采用有机溶剂对层析柱进行除
7.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤1)中，所述过滤采用孔径为0.3-0.5μm的滤膜进行过滤。
8.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤1)中，所述索玛鲁肽粗品的纯度为60-80％。
9.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤2)还可以采用两步纯化，即，先将索玛鲁肽溶液上样到装有UniSil硅胶微球或者Uni PS填料的层析柱中进行层析，再用UniSilC18硅胶填料进行层析。
10.所述权利要求9所述的分离纯化方法，其特征在于，所述两步纯化中所用的流动相与所述权利要求3和4中所述的流动相一致。
...【技术特征摘要】
1.一种索玛鲁肽的分离纯化方法，其特征在于，所述分离纯化方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤2)中，所述unisil硅胶微球的型号是unisilc18微球；所述聚合物填料是uni ps填料，即聚苯乙烯/二乙烯基苯基质的聚合物填料；所述聚合物填料也可以是uni psn填料，即聚乙烯吡咯烷酮/二乙烯基苯基质的聚合物填料。
3.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤2)中，所述流动相中，有机溶剂为甲醇、乙醇和乙腈中的一种。
4.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤2)中，所述流动相中，酸性的水溶液为含有乙酸、甲酸或者三氟乙酸的水溶液。
5.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤2)中，所述洗脱的具体过程为：采用酸性的水溶液和有机溶剂的流动相进行洗脱，在20个柱体积内有机相从40％洗到60％，流速为0....
【专利技术属性】
技术研发人员：王希，陈可凡，陈鼎诚，朱峰，米建秋，陈豪，沈磊，
申请(专利权)人：常熟纳微生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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