【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及天然化合物提取和分离，具体涉及一种从百合中同时分离纯化10种王百合苷类化合物的方法。
技术介绍
1、百合是重要的观赏植物，王百合苷（regaloside）是百合中特有的一类重要活性成分，为苯丙烯酰基甘油葡萄糖苷类物质的统称（zhou et al., 2021），目前研究者先后从百合属植物中检测到13种王百合苷。研究表明，王百合苷具抗氧化、抑菌、抗炎，以及延缓ii型糖尿病、保护心肌细胞等功能（luo et al., 2012; murray et al., 2019; kim et al.,2020）。
2、现有技术文献均为王百合苷类成分检测相关报道。专利“一种百合药材中王百合苷b的提取及测定方法（cn 109632997 a）”提到了一种用稀乙醇提取王百合苷b的方法，并建立了测定王百合苷b的方法，但该方法中并没有纯化出王百合苷b单体，也应属于王百合苷b的检测方法。因此，目前还没有文献记载如何有效制备、纯化多种王百合苷类成分的方法，更没有一次性制备多种王百合苷类成分的方法。
技术实现思路
1、针对现有技术中的上述不足，本专利技术的目的在于提供一种从百合中同时分离纯化10种王百合苷类化合物的方法。
2、为了达到上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案为：
3、提供一种从百合中同时分离纯化10种王百合苷类化合物的方法，其包括以下步骤：
4、渗漉提取百合干片，采用溶剂萃取法获得乙酸乙酯相萃取物；利用200 ~ 300目硅胶拌样
5、进一步地，具体包括以下子步骤：
6、1）将百合属植物粉碎、渗漉提取、减压浓缩，得浓缩液；
7、2）将浓缩液用等体积乙酸乙酯萃取多次，分别得乙酸乙酯相和水相；
8、3）分别于50℃对乙酸乙酯相和水相浓缩后，用60 ~ 80目硅胶拌样，于45℃鼓风干燥；
9、4）以200 ~ 300目硅胶为填料，石油醚-乙酸乙酯为流动相，石油醚：乙酸乙酯 =50：1 ~ 0：1，上样洗脱分段；
10、5）分段洗脱液用石油醚-乙酸乙酯为展开剂点板展开后，10%硫酸乙醇显色，得10段粗提物，经hplc分析，与王百合苷a和王百合苷b标准品保留时间附近峰图比对后取段6 ~10为粗制备物；
11、6）对制备的粗提物用c18柱，甲醇：0.1% 磷酸水=40：60为流动相洗脱，于310 nm检测，将粗分又细分为10段fr1~fr10，后用乙腈：0.1% 磷酸水=10：90 ~ 20：80进一步制备，冲柱段乙腈：0.1% 磷酸水=35：65；
12、7）用乙腈-0.1% 磷酸水或四氢呋喃-0.1% 磷酸水重复制备纯化，减压蒸发后得不同单体。
13、进一步地，步骤1）的方法具体为：将百合属植物粉碎后投入低压层析柱中，用70%甲醇渗漉提取4次，每次24 h，合并后经抽滤得提取液，将滤液于60℃减压浓缩至无醇，得浓缩液。
14、进一步地，单体为王百合苷a、王百合苷b、王百合苷c、王百合苷e、王百合苷f、王百合苷h、王百合苷k、甲基王百合苷a、顺式王百合苷a和顺式王百合苷h。
15、进一步地，步骤6）和步骤7）中，fr1经制备hplc，乙腈：0.1%磷酸水=10：90，21’得王百合苷k（97.00%）；fr2经制备hplc，乙腈：0.1%磷酸水=13：87，得fr2-1，再经四氢呋喃：0.1%磷酸水（）制备，9.8’时得王百合苷c（99.71%）；fr3经制备hplc，乙腈：0.1%磷酸水=15：85，得fr3-2，再经四氢呋喃：0.1%磷酸水（）制备，8.7’时得王百合苷h（98.29%）；fr4经制备hplc，甲醇：0.1%磷酸水=38：62，得fr4-1，再经乙腈：0.1%磷酸水=17：83制备，8.15’时得王百合苷a（98.83%）；fr5经制备hplc，甲醇：0.1%磷酸水=40：60后，再经四氢呋喃：0.1%磷酸水（）制备，9.6’时得王百合苷f（94.93%）；fr4经制备hplc，乙腈：0.1%磷酸水=18：82，8.15’时得王百合苷e（98.73%）；fr8经制备hplc，乙腈：0.1%磷酸水=20：80分离后，再经四氢呋喃：0.1%磷酸水（）制备，后再经乙腈：0.1%磷酸水=20：80制备，9.3’时得王百合苷b（99.02%）；fr10经制备hplc，乙腈：0.1%磷酸水=35：65分离后，再经乙腈：0.1%磷酸水=25：75分离，最后经四氢呋喃：0.1%磷酸水（）制备， 10.1’时得甲基王百合苷a（96.50%）；fr4经制备hplc，甲醇：0.1%磷酸水=38：62，得fr4-2，经乙腈：0.1%磷酸水=17：83制备，再经四氢呋喃：0.1%磷酸水（）制备，8.8’时得顺式王百合苷a（98.72%）；fr3经制备hplc，乙腈：0.1%磷酸水=15：85，得fr3-3，8.7’时得顺式王百合苷h（94.70%）。
16、进一步地，步骤6）和步骤7）中检测波长为310 nm。
17、本专利技术的有益效果为：
18、本专利技术可通过一次性提取，制备10种高纯度王百合苷类化合物，与单一王百合苷制备相比工艺简单，节省原料和成本，为王百合苷的工业化制备的首选方法。
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1.一种从百合中同时分离纯化10种王百合苷类化合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的从百合中同时分离纯化10种王百合苷类化合物的方法，其特征在于，具体包括以下子步骤：
3.根据权利要求2所述的从百合中同时分离纯化10种王百合苷类化合物的方法，其特征在于，步骤1）的方法具体为：将百合属植物粉碎后投入低压层析柱中，用70%甲醇渗漉提取4次，每次24 h，合并后经抽滤得提取液，将滤液于60℃减压浓缩至无醇，得浓缩液。
4.根据权利要求1-3任一所述的从百合中同时分离纯化10种王百合苷类化合物的方法，其特征在于，所述单体为王百合苷A、王百合苷B、王百合苷C、王百合苷E、王百合苷F、王百合苷H、王百合苷K、甲基王百合苷A、顺式王百合苷A和顺式王百合苷H。
5.根据权利要求4所述的从百合中同时分离纯化10种王百合苷类化合物的方法，其特征在于，步骤6）和步骤7）中，Fr1经制备HPLC，乙腈：0.1%磷酸水=10：90，21’得王百合苷K；Fr2经制备HPLC，乙腈：0.1%磷酸水=13：87，得Fr2-1，再经四氢呋喃
6.根据权利要求5所述的从百合中同时分离纯化10种王百合苷类化合物的方法，其特征在于，步骤6）和步骤7）中检测波长为310 nm。
...【技术特征摘要】
1.一种从百合中同时分离纯化10种王百合苷类化合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的从百合中同时分离纯化10种王百合苷类化合物的方法，其特征在于，具体包括以下子步骤：
3.根据权利要求2所述的从百合中同时分离纯化10种王百合苷类化合物的方法，其特征在于，步骤1）的方法具体为：将百合属植物粉碎后投入低压层析柱中，用70%甲醇渗漉提取4次，每次24 h，合并后经抽滤得提取液，将滤液于60℃减压浓缩至无醇，得浓缩液。
4.根据权利要求1-3任一所述的从百合中同时分离纯化10种王百合苷类化合物的方法，其特征在于，所述单体为王百合苷a、王百合苷b、王百合苷c、王百合苷e、王百合苷f、王百合苷h、王百合苷k、甲基王百合苷a、顺式王百合苷a和顺式王百合苷h。
5.根据权利要求4所述的从百合中同时分离纯化10种王百合苷类化合物的方法，其特征在于，步骤6）和步骤7）中，fr1经制备hplc，乙腈：0.1%磷酸水=10：90，21’得王百合苷k；fr2经制备hplc，乙腈：0.1%磷酸水=13：87，得fr2-1，再经四氢呋喃：0.1%磷酸水制备，9.8’时得王百合苷c；fr3经制备hplc，乙腈：0.1%磷酸水=15：85，得fr3-2，再经四氢呋喃：0....
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