【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及肿瘤生物学领域，尤其涉及一种人的egfr基因l858r和v834l双位点突变非小细胞肺癌细胞株hc5720，同时涉及该非小细胞肺癌细胞株hc5720的应用。
技术介绍
1、肺癌是严重危害人类生命和健康的常见恶性肿瘤。肺癌分为小细胞肺癌(sclc)和非小细胞肺癌(nsclc)，其中80％～85％为非小细胞肺癌，约2/3非小细胞肺癌存在基因改变，约1/2患者可获得靶向治疗机会。对靶向治疗有显著反应的nsclc基因型包括表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，egfr)突变、alk基因重排、ros原癌基因重排等。为了促进和满足对人非小细胞肺癌的研究，需要越来越多的各种人体来源的存在特殊基因改变的肺癌细胞株。为此我们建立了一种人的非小细胞肺癌细胞株hc5720，该细胞株有egfr基因l858r和v834l两个位点的突变。查阅最新文献，目前世界上还未见有egfr基因l858r和v834l两个位点的突变细胞株的报道。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种人的egfr基因l858r和v834l双位点突变非小细胞肺癌细胞株及其应用。该细胞株可用于构建人的有egfr基因l858r和v834l双位点突变非小细胞肺癌体内外肿瘤的动物和细胞模型，还能用于抗肿瘤药物的筛选及耐药机制的研究等等。
2、上述提及的人非小细胞肺癌细胞株，命名为人非小细胞肺癌细胞株hc5720，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：湖北省武汉市武昌区八一路2
3、所述的人非小细胞肺癌细胞株hc5720，该细胞株有egfr基因l858r和v834l两个位点的突变。
4、所述的人非小细胞肺癌细胞株hc5720，该细胞株egfr(l858r
5、mutant specific)蛋白、角蛋白pan-keratin及epcam蛋白表达阳性，
6、所述的人非小细胞肺癌细胞株hc5720，该细胞株对erlotinib敏感。
7、本专利技术还提供所述的人非小细胞肺癌细胞株hc5720在药物筛选中的应用。
8、所述的应用是在筛选制备抗肿瘤药物中的应用。
9、本专利技术还提供所述的人非小细胞肺癌细胞株hc5720在构建人非小细胞肺癌体内、外肿瘤模型中的应用。
10、本专利技术的细胞株取自一个54岁的女性黄种人的中至低分化腺癌的肺部手术肿瘤标本，然后接种至scid beige小鼠背部皮下，当scid beige小鼠背部某一点的皮下移植瘤直径大于1-1.5cm时，取瘤块剪碎继续接种至scid beige小鼠，这样接种5代，取第5代瘤块用ii型胶原酶消化，接种至t25培养瓶中，采用改良的acl4无血清培养基培养2个月后改用含10％fbs rpmi1640培养基扩增培养。该细胞株角蛋白pan-keratin、epcam、及egfr(l858rmutant specific)蛋白表达阳性。
11、本专利技术包括以下步骤：
12、(1)人非小细胞肺癌细胞株hc5720在scid beige小鼠背部皮下接种传代及在acl4无血清培养基中的培养。
13、(2)人非小细胞肺癌细胞株hc5720在含10％fbs rpmi1640培养基中培养、消化及传代。
14、(3)人非小细胞肺癌细胞株hc5720角蛋白pan-keratin、epcam及egfr(l858rmutant specific)蛋白的表达。
15、(4)人非小细胞肺癌细胞株hc5720在免疫缺陷小鼠体内的致瘤能力。
16、(5)检测人非小细胞肺癌细胞株hc5720 egfr基因突变。
17、(6)人非小细胞肺癌细胞株hc5720对靶向药物erlotinib的敏感性。
18、(7)人非小细胞肺癌细胞株hc5720种属及str的鉴定。
19、本专利技术的人非小细胞肺癌细胞株hc5720，可以用于研究人的egfr基因l858r和v834l双位点突变非小细胞肺癌细胞形态学及生物学特点、筛选和评估抗肿瘤药物及作用机制、研究肿瘤耐药机制、开发肿瘤耐药逆转药物及研究更有效的肿瘤治疗方法等，并可用于egfr基因l858r和v834l双位点突变非小细胞肺癌致瘤机制及其相关信号通路的研究。具有较高的科研和生产应用价值，预期能产生良好的科研、经济和社会效益。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种人EGFR基因双位点突变非小细胞肺癌细胞株HC5720，保藏编号为CCTCC NO：C2023357。
2.如权利要求1所述的人EGFR基因双位点突变非小细胞肺癌细胞株HC5720，其特征在于，该细胞株有EGFR基因L858R和V834L两个位点的突变。
3.如权利要求1所述的人EGFR基因双位点突变非小细胞肺癌细胞株HC5720，其特征在于，该细胞株EGFR(L858R Mutant Specific)蛋白、角蛋白Pan-Keratin及Epcam蛋白表达阳性。
4.如权利要求1所述的人EGFR基因双位点突变非小细胞肺癌细胞株HC5720，其特征在于，该细胞株对Erlotinib敏感。
5.权利要求1所述的人EGFR基因双位点突变非小细胞肺癌细胞株HC5720在药物筛选中,特别是在筛选制备抗肿瘤药物中的应用。
6.权利要求1所述的人EGFR基因双位点突变非小细胞肺癌细胞株HC5720在构建人非小细胞肺癌体内、外肿瘤模型中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种人egfr基因双位点突变非小细胞肺癌细胞株hc5720，保藏编号为cctcc no：c2023357。
2.如权利要求1所述的人egfr基因双位点突变非小细胞肺癌细胞株hc5720，其特征在于，该细胞株有egfr基因l858r和v834l两个位点的突变。
3.如权利要求1所述的人egfr基因双位点突变非小细胞肺癌细胞株hc5720，其特征在于，该细胞株egfr(l858r mutant specific)蛋白、角蛋白pa...
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