MutS突变蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术涉及蛋白质突变技术领域，具体涉及MutS突变蛋白及其应用。本发明专利技术公开了通过突变TthMutS、MutL和MutH三种识别错配修复蛋白，得到热稳定的纠错酶组合，可以随扩增或拼接过程对DNA片段进行同步纠错。本发明专利技术结合一代测序和二代测序的共同分析，证明了突变后的TthMutS、MutL和MutH三种纠错酶组合具有明显降低扩增或拼接后DNA产物出错频率的功能。本发明专利技术提供了在对MutS突变蛋白组进行生物素修饰后，可以固相识别异源双链DNA的磁珠‑MutS体系的合成方法。经突变的MutS蛋白在均相和固相，高温和室温，其错配识别功能可按需求被灵活运用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及蛋白质突变，具体涉及muts突变蛋白及其应用。

技术介绍

1、对所有生物体，辐射、药物、病毒感染等外界因素，和细胞代谢，dna复制过程中发生的碱基错配等内在因素，都可以对生物体内造成不可避免地dna损伤。dna的损伤若不得到及时正确的修复，则可能造成dna突变，染色体畸变，基因表达异常等状况，并最终导致如肿瘤等各种生理病变。dna修复系统存在于各个生物体内，并随时对受损伤的dna进行修复，维持dna正常结构。dna修复系统包括光活化，碱基切除修复，核苷酸切除修复，重组修复和错配修复。其中dna错配修复可以识别并纠正因错误掺入而产生的错配碱基从而避免dna突变，在维护基因组的完整性和正确性方面发挥着重要作用。在大肠杆菌中，dna腺嘌呤甲基化引导的，通过muts，mutl和muth三种蛋白协同完成的dna错配修复，是研究最广泛的错配修复。muts是一种错配结合蛋白质，在dna修复系统中，muts首先识别并结合错配，而后发出信号并召集mutl蛋白加入muts-dna复合体并激活muth蛋白的内切酶活性，对半甲基化gatc序列中的非甲基化链进行切割，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.MutS突变蛋白或蛋白组，其特征在于，具有：

2.生物素修饰后的蛋白或蛋白组，其特征在于，包括：

3.如下任意项在制备用于识别错配DNA的固相载体中的应用：

4.MutS-固相载体，其特征在于，包括如下任意项：

5.如权利要求4所述MutS-固相载体的制备方法，其特征在于，取如权利要求2所述的生物素修饰后的蛋白或蛋白组与带有生物素和链霉亲和素的固相载体结合，制得所述MutS-固相载体。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述孵育采用的Bindi...

【技术特征摘要】

1.muts突变蛋白或蛋白组，其特征在于，具有：

2.生物素修饰后的蛋白或蛋白组，其特征在于，包括：

3.如下任意项在制备用于识别错配dna的固相载体中的应用：

4.muts-固相载体，其特征在于，包括如下任意项：

5.如权利要求4所述muts-固相载体的制备方法，其特征在于，取如权利要求2所述的生物素修饰后的蛋白或蛋白组与带有生物素和链霉亲和素的固相载体结合，制得所述muts-固相载体。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述孵育采用的binding buffer包括0.05～1m nacl、20mm tris-hcl、0.1～5mm edta和0.1％tween-20；

8.如权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，步骤3所述固相载体-peg-生物素-亲和素的加入量为10～100μg；步骤3所述孵育采用的反应体积为20～50μl。

9.纠错酶蛋白组，其特征在于，包括：

10.如权利要求9所述的纠错酶蛋白组，其特征在于，所述mutl突变蛋白或蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：董一名，陈淑美，曹逸凡，
申请(专利权)人：上海芯宿医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：