【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种具有滞留能力的靶向识别apn的荧光探针化合物、制备方法及应用。
技术介绍
1、随着工业化进程的发展，环境中致癌因素越来越多，人们罹患癌症的风险越来越高。据现有统计数据预测，2035年新增癌症患者将达到2400万人，届时死亡人数将超过1450万。目前临床上针对癌症已经开发了多种策略的治疗方式，包括手术切除、化疗、放疗、靶向治疗、免疫治疗等。但癌症的治愈率仍不尽如人意，其中一个重要的原因就是癌症发现时间太晚。许多患者被首次确诊罹患癌症的时候，疾病就已经进展到中后期，失去了手术治疗的机会。再加上治疗过程中产生耐药性以及转移灶，导致癌症的死亡率居高不下。实际上，如果能在癌症早期进行准确诊断，就有很大治愈的机会。因此，对癌症病灶的识别尤为关键。
2、细胞表面氨基肽酶n(apn)是一种膜结合的外切酶，其能够水解蛋白质和肽并调节许多细胞的功能，参与肿瘤细胞的扩张和运动，是癌症治疗的靶点之一，目前已发现apn在多种癌症中过表达，包括肝癌、肾癌、乳腺癌、结直肠癌、膀胱癌等，而在正常组织中，apn的表达量较低。通过对apn酶的表达水平进行检测，就可以实现癌组织的识别，从而达到癌症早期诊断的目的。然而，现有的免疫组化、elisa等方法无法实现活细胞层面的apn检测。
3、荧光分析法具有灵敏度高、特异性强、检测方便、能进行原位实时监测的特点在生物分析中取得了广泛的应用。荧光染料作为荧光分析的基础，其性能的好坏很大程度上决定了荧光分析法的检测准确率。目前用于apn检测的荧光染料虽然能在细胞中对apn
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了克服现有技术存在的缺点和不足，而提供一种具有滞留能力的靶向识别apn的荧光探针化合物、制备方法及应用。
2、本专利技术所采取的技术方案如下：一种具有滞留能力的靶向识别apn的荧光探针化合物，其具有式i所示结构，
3、
4、式i中，r1，r2各自独立地选自h、苯基、取代苯基、c1-8的取代或未取代烷基、c1-8的取代或未取代烯基；所述的取代苯基由卤素、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6羧基和c1-6酯基任意取代；所述的取代烷基和取代烯基由卤素或c1-6烷氧基任意取代；
5、r3为卤素。
6、如上所述的具有滞留能力的靶向识别apn的荧光探针化合物的制备方法，包括以下步骤：
7、(1)化合物1、对氨基卞醇反应，制备化合物2；
8、
9、通过化合物2制备化合物3；
10、
11、(3)化合物3和化合物4反应，制备化合物5；
12、
13、(4)通过化合物5制备化合物6；
14、
15、通过化合物6制备化合物15；
16、
17、将化合物15与三氟乙酸反应后得到具有式i所示结构的荧光探针化合物。
18、优选的，步骤(1)中，化合物1、对氨基卞醇、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(hatu)和二异丙基乙胺在氮气保护下，反应溶剂为四氢呋喃，反应体系温度为室温，反应得到化合物2。
19、优选的，步骤(2)中，化合物2与对甲苯磺酰氯、三乙胺反应，反应溶剂为二氯甲烷，冰浴下进行反应，得到化合物3。
20、优选的，步骤(3)中，化合物3和化合物4在碳酸铯存在的条件下，反应溶剂为n,n-二甲基甲酰胺，反应体系温度为40-80℃，反应制备化合物5。
21、优选的，步骤(4)中，化合物5与硼氢化钠，在甲醇和二氯甲烷的混合溶剂中，在室温下，进行反应得到化合物6。
22、优选的，步骤(5)中，
23、①当式i中r3为氟时，化合物6与二乙胺基三氟化硫(dast)反应，制备化合物7，反应溶剂为二氯甲烷，反应为冰盐浴下进行；
24、
25、②当式i中r3为氯时，化合物6与三氯氧磷(pocl3)反应，制备化合物8，反应溶剂为三氯氧磷，反应体系温度为40-80℃；
26、
27、③当式i中r3为溴时，化合物6与三溴化磷(pbr3)反应，制备化合物9，反应溶剂为二氯甲烷，反应体系温度为室温；
28、
29、④当式i中r3为碘时，化合物6与三苯基磷，咪唑，碘单质反应，制备化合物10，反应溶剂为甲苯，反应体系温度为室温；
30、
31、优选的，步骤(6)中，化合物15与三氟乙酸反应，反应溶液为二氯甲烷，反应体系温度为室温。
32、如上所述的具有滞留能力的靶向识别apn的荧光探针化合物用于制备检测试剂的应用，所述检测试剂用于标记并检测apn表达量异常的癌细胞。
33、一种apn检测试剂，其包含如上所述的具有滞留能力的靶向识别apn的荧光探针化合物。
34、本专利技术的有益效果如下：本专利技术所提供的荧光探针化合物，其对apn具有较好响应，可以对活细胞内的apn酶进行检测，区分癌细胞和正常细胞。并且，由于染料再识别apn酶后，可以通过共价键固定到细胞上，从而避免细胞间的荧光信号传递，降低假阳性。
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1.一种具有滞留能力的靶向识别APN的荧光探针化合物，其特征在于，其具有式I所示结构，
2.如权利要求1所述的具有滞留能力的靶向识别APN的荧光探针化合物的制备方法，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，化合物1、对氨基卞醇、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)和二异丙基乙胺在氮气保护下，反应溶剂为四氢呋喃，反应体系温度为室温，反应得到化合物2。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，化合物2与对甲苯磺酰氯、三乙胺反应，反应溶剂为二氯甲烷，冰浴下进行反应，得到化合物3。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，化合物3和化合物4在碳酸铯存在的条件下，反应溶剂为N,N-二甲基甲酰胺，反应体系温度为40-80℃，反应制备化合物5。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(4)中，化合物5与硼氢化钠，在甲醇和二氯甲烷的混合溶剂中，在室温下，进行反应得到化合物6。
7.根据权利要求2所
8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(6)中，化合物15与三氟乙酸反应，反应溶液为二氯甲烷，反应体系温度为室温。
9.如权利要求1所述的具有滞留能力的靶向识别APN的荧光探针化合物用于制备检测试剂的应用，所述检测试剂用于标记并检测APN表达量异常的癌细胞。
10.一种APN检测试剂，其包含如权利要求1所述的具有滞留能力的靶向识别APN的荧光探针化合物。
...【技术特征摘要】
1.一种具有滞留能力的靶向识别apn的荧光探针化合物，其特征在于，其具有式i所示结构，
2.如权利要求1所述的具有滞留能力的靶向识别apn的荧光探针化合物的制备方法，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，化合物1、对氨基卞醇、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(hatu)和二异丙基乙胺在氮气保护下，反应溶剂为四氢呋喃，反应体系温度为室温，反应得到化合物2。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，化合物2与对甲苯磺酰氯、三乙胺反应，反应溶剂为二氯甲烷，冰浴下进行反应，得到化合物3。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，化合物3和化合物4在碳酸铯存在的条...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐峰，王冰，郑晓群，项光新，何超翔，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：
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