【技术实现步骤摘要】
本申请涉及分子生物学检测领域，特别是涉及一种cyp21a2基因拷贝数变异检测用的引物和探针。
技术介绍
1、先天性肾上腺皮质增生症(cah)是一组由肾上腺皮质激素合成过程中酶的缺陷引起的常染色体隐性遗传病。根据酶缺陷类型的不同，cah可分为21-羟化酶缺乏症(21-ohd)、11β-羟化酶缺乏症(11β-ohd)、17α-羟化酶缺乏症(17α-ohd)、3β-羟类固醇脱氢酶缺乏症(3β-hsd)、先天性肾上腺脂质增生症(lipoid cah)、细胞色素p450氧化还原酶缺陷症(pordeficiency)、胆固醇侧链裂解酶缺乏症(sccdeficiency)，分别由cyp21a2、cyp11b1、cyp17a1、hsd3b2、star、por和cyp11a1这7种基因的突变引起。其中21-ohd最常见，约占cah的90-95％。
2、根据临床表型的由重到轻，21-ohd可以分为失盐型(sw)、单纯男性化型(sv)和非典型性cah(nccah)，其中失盐型和单纯男性化型统称为典型cah。引起21-ohd的人源cyp21a2基因位于6p21.3的hlaiii类基因区，长度约3.2kb，具有10个外显子和9个内含子。cyp21a2基因和对应的假基因cyp21a1p的外显子和内含子的同源性分别为98％和96％。端粒侧基因串rp1-c4a-cyp21a1p-tnxa和着丝粒侧同源基因串rp2-c4b-cyp21a2-tnxb串联形成双rccx模式。rccx模式的高同源性使得在有丝分裂或减数分裂期间可能发生不平等互换或重组。约7
3、基因大片段缺失和重复又称为基因拷贝数变异(cnvs)，目前针对cyp21a1p基因的cnv变异检测的方法主要有：多重连接探针扩增技术(mlpa)、实时荧光定量pcr技术(rt-qpcr)、微阵列比较基因杂交(array-cgh)、affymetrix cnv芯片技术及第二代基因测序技术等。其中arrat-cgh、affymetrix cnv芯片技术及第二代基因测序技术主要用于全基因组的拷贝数变异检测，准确而高效，但是成本也相对较高；rt-qpcr技术虽然简便易操作，但其通量较低，难以实现对多个片段的同时检测；mlpa是目前为止针对特定基因片段拷贝数检测比较成熟的一种方式，通过一代测序平台得以实现，然而这种方法也存在一定的局限性，例如对样本dna要求较高、检测通量较低、结果容易出现假阳性等。截至目前为止，市面上并无成型的cyp21a1p基因的拷贝数检测试剂盒。
4、公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本申请的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
技术实现思路
1、本申请的目的在于提供一种cyp21a2基因拷贝数变异检测用的引物和探针，以解决现有技术中针对cyp21a2基因的cnvs检测存在的各种问题，并提供一种快速、全面、准确且低成本的cyp21a2基因拷贝数变异检测技术。
2、为实现上述目的，本申请采用的一个技术方案是：
3、提供一种cyp21a2基因拷贝数变异检测用的引物和探针，所述探针包括：
4、覆盖位于cyp21a2基因的10个外显子上共16个目标位点的16个探针组，其中，所述cyp21a2基因的1号、2号、7号、8号外显子上各有1个目标位点，其余每个外显子上有2个目标位点；
5、其中，每一所述探针组包括分别与目标位点的5’端和3’端至少部分互补的5’端探针和3’端探针，每一所述5’端探针包括依次排列的第一通用引物结合位点和第一连接序列，每一所述3’端探针包括依次排列的第二连接序列和第二通用引物结合位点，所述第一连接序列和所述第二连接序列分别与目标位点的5’端和3’端至少部分互补，针对cyp21a2基因外显子的16个探针组的第一连接序列如seq id no.1～16所示，第二连接序列如seqid no.17～32所示；
6、所述引物包括：
7、针对所述第一通用引物结合位点的第一通用引物组，包括至少一个第一通用引物，每一所述第一通用引物至少与一个所述5’端探针的所述第一通用引物结合位点至少部分互补；
8、针对所述第二通用引物结合位点的第二通用引物组，包括至少一个第二通用引物，每一所述第二通用引物至少与一个所述3’端探针的所述第二通用引物结合位点至少部分互补。
9、在一个或多个实施方式中，所述探针还包括：
10、覆盖位于cyp21a2基因上游200bp处的1个目标位点的1个探针组，针对cyp21a2基因上游的1个探针组的第一连接序列如seq id no.33所示，第二连接序列如seq id no.34所示；
11、覆盖分别位于cyp21a2基因下游500bk处的1个目标位点以及位于cyp21a2基因下游2kk处的2个目标位点的3个探针组，针对cyp21a2基因下游的3个探针组的第一连接序列如seq id no.35～37所示，第二连接序列如seq id no.38～40所示。
12、在一个或多个实施方式中，所述探针还包括：
13、覆盖位于cyp21a2基因5’端非翻译区的2个目标位点的2个探针组，针对cyp21a2基因5’端非翻译区的2个探针组的第一连接序列如seq id no.41～42所示，第二连接序列如seq id no.43～44所示；
14、覆盖位于cyp21a2基因3’端非翻译区的2个目标位点的2个探针组，针对cyp21a2基因3’端非翻译区的2个探针组的第一连接序列如seq id no.45～46所示，第二连接序列如seq id no.47～48所示；
15、覆盖位于cyp21a2基因1号内含子上的1个目标位点的1个探针组，针对cyp21a2基因内含子的1个探针组的第一连接序列如seq id no.49所示，第二连接序列如seq idno.50所示。
16、在一个或多个实施方式中，所述探针还包括：
17、覆盖分别位于c4a基因9号、11号、13号、21号、41号外显子上的5个目标位点的5个探针组，针对cyp21a2基因外显子的5个探针组的第一连接序列如seq id no.51～55所示，第二连接序列如seq id no.56～60所示；
18、在一个或多个实施方式中，所述探针还包括：
19、覆盖位于参照基因上的12个目标位点的12个探针组，针对参照基因的12个探针组的第一连接序列如seq id no.61～72所示，第二连接序列如seq id no.73～84所示。
20、在一个或多个实施方式中，所述第一通用引物组包括用荧光基团标记的1个或多个第一通用引物，所述第二通用引物组包括连接有本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种CYP21A2基因拷贝数变异检测用的引物和探针，其特征在于，
2.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述探针还包括：
3.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述探针还包括：
4.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述探针还包括：
5.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述探针还包括：
6.根据权利要求1至5任一所述的引物和探针，其特征在于，所述第一通用引物组包括用荧光基团标记的1个或多个第一通用引物，所述第二通用引物组包括连接有不同长度的填充序列的多个第二通用引物。
7.根据权利要求6所述的引物和探针，其特征在于，所述第一通用引物组包括一个第一通用引物，序列如SEQ ID NO.85所示，所述第一通用引物的5’端被荧光基团标记；所述第二通用引物组包括两个第二通用引物，序列如SEQ ID NO.86～87所示；
8.一种CYP21A2/2基因的拷贝数变异检测用的试剂盒，其特征在于，包括：
9.一种如权利要求8所述的试剂盒的使用方法，其特征在
10.根据权利要求9所述的使用方法，其特征在于，所述探针包括若干探针group，每一所述探针group包括多个探针组，所述多个探针组包括至少一个针对CYP21A2基因的检测探针组以及至少一个针对参照基因的参照探针组，且每一所述探针group的所述多个探针组对应于相同的正向引物和反向引物；
...【技术特征摘要】
1.一种cyp21a2基因拷贝数变异检测用的引物和探针，其特征在于，
2.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述探针还包括：
3.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述探针还包括：
4.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述探针还包括：
5.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述探针还包括：
6.根据权利要求1至5任一所述的引物和探针，其特征在于，所述第一通用引物组包括用荧光基团标记的1个或多个第一通用引物，所述第二通用引物组包括连接有不同长度的填充序列的多个第二通用引物。
7.根据权利要求6所述的引物和探针，其特征在于，所述第一通用引...
【专利技术属性】
技术研发人员：姜正文，余锋，李文明，
申请(专利权)人：苏州天昊医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：
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