【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于病毒毒株分离及改造，具体涉及一种ⅰ型单纯疱疹病毒毒株yd06、 重组毒株及其用途。
技术介绍
1、溶瘤病毒(oncolytic virus，ov)是一类天然的或经过基因工程技术改造的具有特异性 复制能力的病毒，能够选择性感染和杀伤肿瘤细胞，并能激发机体免疫应答，改善肿瘤免疫 抑制性微环境，产生抗肿瘤免疫反应。
2、相较于其它肿瘤免疫疗法，溶瘤病毒具有直接溶瘤作用、靶向性好、毒副作用小、激活 抗肿瘤免疫反应、作为外源基因表达载体、避免耐药性和成本低廉等优势。
3、溶瘤病毒疗法发展至今，全球已有4款溶瘤产品获得监管部门批准正式上市：rigvir(一 种基因改造的echo-7肠道病毒，用于治疗黑色素瘤和其他恶性肿瘤)、安柯瑞(一种重组人 5型腺病毒，被批准用于对常规放疗无效的晚期鼻咽癌患者)、imlygic(经过基因修饰的第二 代hsv-1，被批准用于局部治疗术后复发的晚期黑色素瘤)、delytact(一种经过基因修饰的 第三代hsv-1、用于治疗恶性胶质瘤)。
4、i型单纯疱疹病毒(herps simplex virus，hsv-1)是一种长约152kb的双链dna病毒， 属于α疱疹病毒亚科。hsv-1通过hvem(疱疹病毒进入介质，又被称为tnfrsf14)进入 细胞并在受感染宿主细胞核中复制。它是一种常用的溶瘤病毒。
5、hsv基因组包含长独特序列(ul)、短独特序列(us)及其两侧与复制、包装相关的反向重复序列。正常细胞通过阻断宿主细胞蛋白激酶r(pkr)/真核起始
6、hsv应用于抗肿瘤具有以下优点：(1)宿主细胞广泛；(2)感染效率高，可高效感染静 息期和非静息期细胞；(3)可插入大容量外源片段；(4)方便制备和纯化。然而，hsv也有自身的缺点：(1)野生毒株毒性较强；(2)给药方式具有局限性：瘤内注射使得病毒颗粒局限于注射区的病变部位，对转移癌症治疗效果较差；静脉给药病毒颗粒会遭受宿主的先天免 疫反应使病毒颗粒在到达靶细胞前被抗体中和。
7、针对上述hsv存在的缺点，研究者们主要进行了如下研究：(1)基因敲除减毒株：删除 病毒某些关键基因实现在肿瘤细胞中特异性复制，例如编码胸苷激酶基因ul23、编码核糖核 苷酸还原酶基因ul39、编码神经毒性基因icp34.5、编码tap蛋白转运抑制基因us12等； (2)外源基因表达毒株：在减毒株的基础上插入肿瘤特异性启动子或具有免疫调节作用的外 源基因，如加载粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,gm-csf)、白介素2、pd-1抗体、ctla-4抗体等。通过采用基因敲除减毒株、外源基 因表达毒株，得到的改造后的hsv毒性弱，能在更多的细胞中表达。
8、目前已经上市和临床试验的hsv毒株包括hf10、r3616、hg52、t-vec(talimogenelaherparepvec)、1716、nv1020、g207、g47δ等都删除了hsv-1中的icp34.5基因。g207 删除双拷贝icp34.5、icp47及icp6基因，在治疗恶性胶质瘤治疗的临床试验中显示出良好 的治疗效果。t-vec删除了基因组中的icp34.5和icp47基因，并在34.5删除位置插入了双 拷贝hgm-csf，临床试验数据显示在恶性黑色素瘤治疗上客观缓解率为26.4％，具有较为显 著的治疗效果和良好的安全性。这些数据表明hsv-1在肿瘤的基因治疗具有良好安全性和巨大潜力。
9、疱疹病毒具有良好的复制能力和安全性，可以用于基因治疗或递送，在肿瘤治疗中受到 广泛重视，但目前进入临床试验的候选溶瘤产品主要由少数实验室毒株(例hsv-117+毒株、 f毒株、kos毒株)改造而来，存在病毒基因组多样性不足及溶瘤活性欠佳等问题。
10、由于单纯疱疹病毒基因组较大，病毒在复制中容易发生多位点突变，从而造成不同患者 分离而来的毒株在感染肿瘤细胞能力、复制能力和杀伤肿瘤细胞能力存在较大差异，导致不 同来源的毒株的临床应用价值差异较大。因此，筛选和改造出溶瘤能力强、适合临床使用的 单纯疱疹病毒株是溶瘤病毒药物研发中至关重要的问题。
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题为：现有单纯疱疹病毒标准毒株hsv-1 17+感染肿瘤细胞能力、 复制能力和杀伤肿瘤细胞能力还有待提高，并且不能满足病毒基因组多样性要求等缺陷。
2、本专利技术解决上述技术问题的技术方案为：提供了一种ⅰ型单纯疱疹病毒毒株yd06。本 专利技术的ⅰ型单纯疱疹病毒毒株yd06，其保藏编号为：cctcc no：v202271。保藏时间为2022年08月22日，保藏地点为中国典型培养物保藏中心，(简称：cctcc)，保藏单位地址：中 国.武汉.武汉大学；邮编：430072；分类命名为：人单纯疱疹病毒1型hsv-1/yd06。
3、本专利技术还提供了一种ⅰ型单纯疱疹病毒毒株yd06重组毒株，所述重组毒株是在毒株yd06的基因序列中，敲除双拷贝的icp34.5基因和/或单拷贝的icp47基因而重组得到。
4、其中，上述ⅰ型单纯疱疹病毒毒株yd06重组毒株中，所述编码icp34.5基因的核苷酸 序列如seq id no:1所示。
5、seq id no:1编码icp34.5基因的核苷酸序列
6、atggcccgccgccgccgccatcgcggcccccgccgcccccggccgcccgggcccac gggcgcggtcccaaccgcacagtcccaggtaacctccacgcccaactcggaacccgtg gtcaggagcgcgcccgcggccgccccgccgccgccccccgccagtgggcccccgcctt cttgttcgctgctgctgcgccagtggctccacgttcccgagtccgcgtccgacgacgac gacgacgactggccggacagccccccgcccgagccggcgccagaggcccggcccacc gccgccgccccccgcccccggtccccaccgcccggcgcgggcccggggggcggggcta acccctc本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.Ⅰ型单纯疱疹病毒毒株YD06，其特征在于，其保藏编号为：CCTCC NO：V202271。
2.Ⅰ型单纯疱疹病毒毒株YD06重组毒株，其特征在于：在权利要求1所述的Ⅰ型单纯疱疹病毒毒株YD06基因序列中，敲除双拷贝的ICP34.5基因和/或单拷贝的ICP47基因而重组得到。
3.根据权利要求2所述的Ⅰ型单纯疱疹病毒毒株YD06重组毒株，其特征在于：满足下列任意一项，
4.根据权利要求2或3任一项所述的Ⅰ型单纯疱疹病毒毒株YD06重组毒株，其特征在于：在毒株YD06的基因序列中，敲除双拷贝的ICP34.5基因和单拷贝的ICP47基因，同时在ICP34.5缺失位置插入CMV-GFP表达盒重组得到，所述CMV-GFP表达盒的核苷酸序列如SEQID NO:5所示。
5.根据权利要求2或3任一项所述的Ⅰ型单纯疱疹病毒毒株YD06重组毒株，其特征在于：在毒株YD06的基因序列中，敲除双拷贝的ICP34.5基因和单拷贝的ICP47基因，同时在ICP34.5缺失位置插入antiB7H3/CD3双特异性抗体或antiPD-L1/CD3双特异性抗体
6.根据权利要求5所述的Ⅰ型单纯疱疹病毒毒株YD06重组毒株，其特征在于：所述的插入antiB7H3/CD3的donor质粒核酸序列如SEQ ID NO:6所示；或所述的插入antiPD-L1/CD3的donor质粒核酸序列如SEQ ID NO:7所示。
7.预防或治疗癌症的药物组合物，其特征在于：含有权利要求1所述的Ⅰ型单纯疱疹病毒毒株YD06或权利要求2-6任一项所述的Ⅰ型单纯疱疹病毒毒株YD06重组毒株。
8.根据权利要求7所述的预防或治疗癌症的药物组合物，其特征在于：所述癌症包括胶质瘤、黑色素瘤、乳腺癌、头颈部癌症、肺癌、结直肠癌、胰腺癌、肝癌、膀胱癌或宫颈癌中的至少一种。
9.权利要求1所述的Ⅰ型单纯疱疹病毒毒株YD06或权利要求2-6任一项所述的Ⅰ型单纯疱疹病毒毒株YD06重组毒株在制备预防或治疗癌症的药物中的用途。
...【技术特征摘要】
1.ⅰ型单纯疱疹病毒毒株yd06，其特征在于，其保藏编号为：cctcc no：v202271。
2.ⅰ型单纯疱疹病毒毒株yd06重组毒株，其特征在于：在权利要求1所述的ⅰ型单纯疱疹病毒毒株yd06基因序列中，敲除双拷贝的icp34.5基因和/或单拷贝的icp47基因而重组得到。
3.根据权利要求2所述的ⅰ型单纯疱疹病毒毒株yd06重组毒株，其特征在于：满足下列任意一项，
4.根据权利要求2或3任一项所述的ⅰ型单纯疱疹病毒毒株yd06重组毒株，其特征在于：在毒株yd06的基因序列中，敲除双拷贝的icp34.5基因和单拷贝的icp47基因，同时在icp34.5缺失位置插入cmv-gfp表达盒重组得到，所述cmv-gfp表达盒的核苷酸序列如seqid no:5所示。
5.根据权利要求2或3任一项所述的ⅰ型单纯疱疹病毒毒株yd06重组毒株，其特征在于：在毒株yd06的基因序列中，敲除双拷贝的icp34.5基因和单拷贝的icp47基因，同时在icp3...
【专利技术属性】
技术研发人员：仝爱平，杨念，张宗梁，朱志雄，钟坤宏，程平，杨莉，魏霞蔚，魏于全，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。