【技术实现步骤摘要】
本申请涉及微生物检测领域，尤其涉及一种干酪、再制干酪及干酪制品中多种微生物同时检测模型的建立方法。
技术介绍
1、检测食品中的食源性病原体、腐败微生物和其他生物污染物对于维持食品质量和保护消费者安全至关重要。其中，对于奶酪及相关产品中的微生物检测，通常采用国家标准检测方法，进行微生物培养检测及生化确认。但是国家标准检测方法操作复杂度和对操作人员的技能和熟练程度较高，需要满足培养基配置、高压灭菌和无菌操作、菌相确认、生化鉴定等条件，且检测时间较长，通常需要3-10天。
2、流式细胞术(flow cytometry，fcm)是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，具有速度快、精度高及准确性好等优点，能够一次性检测数十万个细胞上的多种标记，被广泛的应用于医学领域中。利用流式细胞术对奶酪及相关产品中的多种微生物进行快速检测，能够有效解决国家标准方法操作复杂程度高、技能要求高和检测效率低等问题。需要说明的是，流式细胞的分析模型作为流式细胞技术定量或定性检测奶酪及相关产品中微生物的关键技术，对流式细胞技术的工作质量有直接影响。
3、但是，受限于奶酪种类繁多，且不同品种的奶酪微生物菌群存在着一定差异的影响，多种菌群均采用同一分析模型检测，难以满足不同种类奶酪的检测需求。
技术实现思路
1、有鉴于此，本申请提出了一种干酪、再制干酪及干酪制品中多种微生物同时检测模型的建立方法，以解决上述问题。
2、本申请一方面，提出一种干酪、再制干酪
3、根据国家产品标准确定六项监控项目；
4、基于干酪、再制干酪及干酪制品生产环境中对应的污染源，相对确定所述监控项目的目标菌株；
5、配置阳性样本，利用国家标准方法和流式细胞技术对所述阳性样本进行检测，得到标准方法检测结果和流式细胞技术检测结果；
6、以所述流式细胞技术检测结果为横坐标，以所述标准方法检测结果为纵坐标，建立关联关系，构建检测分析模型；
7、其中，在配置所述阳性样本时，基于奶酪样品特性，用所述目标菌株配置的系列标准混合菌悬液实现。
8、作为本申请的一可选实施方案，可选地，，所述监控项目，包括：
9、菌落总数、大肠菌群、霉菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和单核细胞增生李斯特氏菌。
10、作为本申请的一可选实施方案，可选地，，所述基于干酪、再制干酪及干酪制品生产环境中对应的污染源，相对确定所述监控项目的目标菌株，包括：
11、所述菌落总数对应的目标菌株为枯草芽孢杆菌；
12、所述大肠菌群对应的目标菌株为大肠埃希氏菌；
13、所述霉菌对应的目标菌株为黑霉菌；
14、所述金黄色葡萄球菌对应的目标菌株为金黄色葡萄球菌；
15、所述沙门氏菌对应的目标菌株为鼠伤寒沙门氏菌；
16、所述单核细胞增生李斯特氏菌的目标菌株为单核细胞增生李斯特氏菌。
17、作为本申请的一可选实施方案，可选地，所述配置阳性样本时，利用国家标准方法和流式细胞技术对所述阳性样本进行检测，得到标准方法检测结果和流式细胞技术检测结果之前，还包括：
18、确定基质荧光干扰阈值。
19、作为本申请的一可选实施方案，可选地，所述确定基质荧光干扰阈值，包括：
20、获取干酪、再制干酪及干酪制品的样品，并基于国家标准筛选无菌样品；
21、利用所述无菌样品和生理盐水制备无菌奶酪样液，并通过荧光染料染色；
22、将染色后的所述无菌奶酪样液进行荧光分析，得到荧光图谱；
23、将所述荧光图谱叠加确定基质荧光干扰阈值。
24、作为本申请的一可选实施方案，可选地，所述制备所述系列标准混合菌悬液，包括：
25、获取所述目标菌株；
26、针对每个所述目标菌株制备相应的标准菌悬液后混合；
27、将混合后的所述标准菌悬液采用梯度稀释法稀释，配制满足预设标准的系列标准混合菌悬液。
28、作为本申请的一可选实施方案，可选地，，所述配置阳性样本，包括：
29、获取所述无菌奶酪样液；
30、获取所述系列标准混合菌悬液；
31、将所述系列标准混合菌悬液分别加入所述无菌奶酪样液中，制备阳性样本。
32、作为本申请的一可选实施方案，可选地，所述分别利用国家标准方法和流式细胞技术对所述阳性样本进行检测，得到标准方法检测结果和流式细胞技术检测结果，包括：
33、将所述阳性样本等分为两份；
34、其中一份所述阳性样本采用国家标准方法检测，得到标准方法检测结果；
35、另一份所述阳性样品置于预设条件下培养后，采用流式细胞技术检测，得到流式细胞技术检测结果。
36、作为本申请的一可选实施方案，可选地，利用流式细胞技术对所述阳性样本进行检测时，将染色后的所述阳性样本进行荧光分析，扣除所述基质荧光干扰阈值，输出流式细胞技术检测结果。
37、作为本申请的一可选实施方案，可选地，所述关联关系为y＝ax+b；
38、式中，y为国家标准方法检测结果、a为流式细胞技术检测结果和国家标准方法检测结果线性拟合的斜率、x为流式细胞技术检测结果、b为流式细胞技术检测结果和国家标准方法检测结果线性拟合的截距。
39、本申请的有益效果：
40、本申请提供一种干酪、再制干酪及干酪制品中多种微生物同时检测模型的建立方法，基于奶酪实际生产环境及可能存在的微生物污染风险，确定具体的目标菌株，并针对目标菌株配置阳性样本进行检测，通过获得的国家标准检测结果以及流式细胞技术检测结果建立关联关系，从而构建检测分析模型。具体包括：根据国家产品标准确定六项监控项目；基于干酪、再制干酪及干酪制品生产环境中对应的污染源，相对确定监控项目的目标菌株；配置阳性样本，并分别利用国家标准方法和流式细胞技术对阳性样本进行检测，得到标准方法检测结果和流式细胞技术检测结果；以流式细胞技术检测结果为横坐标，以标准方法检测结果为纵坐标，建立关联关系，构建检测分析模型；其中，在配置阳性样本时，基于无菌奶酪样液和由目标菌株的配置的系列标准混合菌悬液实现。本申请的奶酪及相关产品中多种微生物同时快速检测模型的建立方法，形成基于奶酪及相关产品品类的分析模型数据库，为实现奶酪及相关产品中多种微生物同时快速检测分析提供基础，所形成的可复制应用的分析模型，能够适配不同奶酪的检测需求。
41、根据下面参考附图对示例性实施例的详细说明，本申请的其它特征及方面将变得清楚。
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1.一种干酪、再制干酪及干酪制品中多种微生物同时检测模型的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的干酪、再制干酪及干酪制品中多种微生物同时检测模型的建立方法，其特征在于，所述监控项目，包括：
3.根据权利要求2所述的干酪、再制干酪及干酪制品中多种微生物同时检测模型的建立方法，其特征在于，所述基于干酪、再制干酪及干酪制品生产环境中对应的污染源，相对确定所述监测项目的目标菌株，包括：
4.根据权利要求1所述的干酪、再制干酪及干酪制品中多种微生物同时检测模型的建立方法，其特征在于，所述配置阳性样本时，利用国家标准方法和流式细胞技术对所述阳性样本进行检测，得到标准方法检测结果和流式细胞技术检测结果之前，还包括：
5.根据权利要求4所述的干酪、再制干酪及干酪制品中多种微生物同时检测模型的建立方法，其特征在于，所述确定基质荧光干扰阈值，包括：
6.根据权利要求1所述的干酪、再制干酪及干酪制品中多种微生物同时检测模型的建立方法，其特征在于，所述制备所述系列标准混合菌悬液，包括：
7.根据权利要求1所述
8.根据权利要求1所述的干酪、再制干酪及干酪制品中多种微生物同时检测模型的建立方法，其特征在于，所述分别利用国家标准方法和流式细胞技术对所述阳性样本进行检测，得到标准方法检测结果和流式细胞技术检测结果，包括：
9.根据权利要求4所述的干酪、再制干酪及干酪制品中多种微生物同时检测模型的建立方法，其特征在于，利用流式细胞技术对所述阳性样本进行检测时，将染色后的所述阳性样本进行荧光分析，扣除所述基质荧光干扰阈值输出流式细胞技术检测结果。
10.根据权利要求1所述的干酪、再制干酪及干酪制品中多种微生物同时检测模型的建立方法，其特征在于，所述关联关系为Y＝AX+B；
...【技术特征摘要】
1.一种干酪、再制干酪及干酪制品中多种微生物同时检测模型的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的干酪、再制干酪及干酪制品中多种微生物同时检测模型的建立方法，其特征在于，所述监控项目，包括：
3.根据权利要求2所述的干酪、再制干酪及干酪制品中多种微生物同时检测模型的建立方法，其特征在于，所述基于干酪、再制干酪及干酪制品生产环境中对应的污染源，相对确定所述监测项目的目标菌株，包括：
4.根据权利要求1所述的干酪、再制干酪及干酪制品中多种微生物同时检测模型的建立方法，其特征在于，所述配置阳性样本时，利用国家标准方法和流式细胞技术对所述阳性样本进行检测，得到标准方法检测结果和流式细胞技术检测结果之前，还包括：
5.根据权利要求4所述的干酪、再制干酪及干酪制品中多种微生物同时检测模型的建立方法，其特征在于，所述确定基质荧光干扰阈值，包括：
6.根据权利要求1所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：李梅，智丽慧，鲁润林，金珠，
申请(专利权)人：上海妙可蓝多生物技术研发有限公司，
类型：发明
国别省市：
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