【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药物分析，具体涉及一种左酮咯酸有关物质的高效液相色谱分析方法。
技术介绍
1、酮咯酸氨丁三醇是由美国辛迪斯制药公司研制，并于1990年在意大利首先上市的一种新型的可供注射给药的非甾体类抗炎药，能抑制前列腺素生物合成和释放从而产生抗炎作用。酮咯酸的镇痛活性较强，是吗啡的0.4倍，阿司匹林的800倍，吲哚美辛的60倍。与阿片类镇痛剂相比，酮咯酸具有起效快、无成瘾性、无中枢神经系统损害、无呼吸抑制作用或便秘等不良反应、作用时间长的优点。与吗啡合用，可降低吗啡用量，减少吗啡带来的不良反应和成瘾性。酮咯酸氨丁三醇已上市产品包括口服片剂/胶囊、注射液、滴眼液、鼻喷剂等多种剂型。
2、目前，中国药典(2020版)、英国药典(bp2020)、欧洲药典(ep9.0)及美国药典(usp42)中收载了该品种，中国药典、usp、bp和ep药典中针对酮咯酸氨丁三醇原料药杂质的液相色谱检测中，存在以下不足：流动相盐相均为50mmol/l的磷酸二氢铵(用磷酸调节ph至3.0)，有机相为四氢呋喃。流动相中盐浓度太高时，会对仪器及色谱柱容易造成堵塞和损耗，四氢呋喃也会对检测仪器造成一定的伤害，对实验人员身体健康也有较大危害。
3、专利cn108152418a公开了一种酮咯酸氨丁三醇或其制剂中酮咯酸氨丁三醇或/和杂质的hplc检测方法，其中，流动相盐相为50mmol磷酸二氢铵，有机相为乙腈和四氢呋喃，还是不可避免的使用四氢呋喃。
4、专利cn103926339a公开了一种包含非-类固醇消炎药剂的可注射医药组合物中物
5、已上市制剂和公开文献中报道的药物活性成分，都是酮咯酸氨丁三醇，其酸根酮咯酸是外消旋体，由左酮咯酸和右酮咯酸等量构成。左酮咯酸是酮咯酸氨丁三醇中发挥药效的活性光学异构体，将其从外消旋体中单独分离出来制成左酮咯酸的制剂形式，有利于提高单位给药剂量的药效、降低酮咯酸氨丁三醇较为明显的不良反应。
6、我们研究发现左酮咯酸的手性中心位于这个特殊的吡咯并吡咯烷杂环上，导致该分子在温度升高尤其是溶液状态时极不稳定。尝试采用酮咯酸氨丁三醇的相关杂质检测方法，发现并不适用于左酮咯酸的相关杂质检测。而现有公开文献中，尚未涉及关于左酮咯酸有关物质检测方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种左酮咯酸有关物质的高效液相色谱分析方法。
2、本专利技术主要是通过如下技术方案实现的：
3、本专利技术提供一种左酮咯酸有关物质的高效液相色谱分析方法，所述方法能够分离左酮咯酸中有关物质，各色谱峰之间的分离度不小于1.5；
4、根据本专利技术实施方案，所述方法色谱条件设置为：
5、色谱柱：c8柱选自agilent zorbax sb-c8，规格为4.6mm×250mm，5μm；
6、流动相：以0.02mol/l磷酸二氢铵溶液为流动相a，用磷酸调ph至3.0，乙腈为流动相b进行梯度洗脱；
7、柱温：20～30℃；
8、流速：0.1～1.0ml/min；
9、进样体积：5～20μl；
10、检测波长：300～320nm。
11、根据本专利技术实施方案，所述有关物质包括杂质tls-5a、杂质tls-5e、杂质tls-5f、杂质tls-5j，各色谱峰之间的分离度不小于1.5；
12、
13、根据本专利技术实施方案，本专利技术提供一种左酮咯酸有关物质的高效液相色谱分析方法，具体包括以下步骤：
14、(1)样品配制：
15、供试品溶液制备：精密量取本品约10mg，置25ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含左酮咯酸0.4mg的溶液；
16、对照溶液制备：精密量取供试品溶液0.1ml，置100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；
17、系统适用性溶液制备：精密量取左酮咯酸对照品约10mg，置25ml量瓶中，依次加入杂质tls-5a贮备液、杂质tls-5e贮备液、杂质tls-5f贮备液和杂质tls-5j贮备液，用稀释剂稀释至刻度，摇匀；
18、(2)色谱条件设置：
19、色谱柱：c8柱选自agilent zorbax sb-c8，规格为4.6mm×250mm，5μm；
20、流动相：以0.02mol/l磷酸二氢铵溶液为流动相a，用磷酸调ph至3.0，乙腈为流动相b进行梯度洗脱；
21、柱温：20～30℃；
22、流速：0.1～1.0ml/min；
23、进样体积：5～20μl；
24、检测波长：300～320nm；
25、(3)检测和计算：
26、精密量取系统适用性溶液10μ1，注入液相色谱仪，再精密量取对照溶液和供试品溶液各10μ1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
27、根据本专利技术实施方案，所述稀释剂为乙腈和水的混合溶液，其乙腈和水体积比为30：70。
28、根据本专利技术实施方案，按照下表进行梯度洗脱：
29、
30、
31、根据本专利技术实施方案，所述柱温为20℃。
32、根据本专利技术实施方案，所述流速为0.98～1.0ml/min。
33、根据本专利技术实施方案，所述进样体积为10μl。
34、根据本专利技术实施方案，所述波长为313nm。
35、根据本专利技术实施方案，所述杂质tls-5a贮备液、杂质tls-5e贮备液、杂质tls-5f贮备液和杂质tls-5j贮备液均为0.1mg/ml，各0.1ml。
36、根据本专利技术实施方案，所述的杂质的检测限度为：供试品溶液色谱图中如有杂质峰，按乘以校正因子的主成分自身对照法计算杂质含量，tls-5e峰面积不得大于对照溶液中主峰面积即0.1％，tls-5f峰面积不得大于对照溶液中主峰面积即0.1％，tls-5j峰面积不得大于对照溶液中主峰面积的5倍即0.5％，其余杂质各峰面积均不得大于对照溶液中主峰面积的2倍即0.2％，杂质总峰面积之和不得大于对照溶液中主峰面积的10倍即1.0％。
37、本专利技术有益效果：
38、(1)高浓度盐、四氢呋喃均会对检测仪器造成一定伤害，且四氢呋喃对实验人员身体健康也有较大危害，因此本专利技术通过大量实验后优选出最佳的分析条件，采用有机相为乙腈且降低磷酸二氢铵的浓度(20mmol/l)，避免采用四氢呋喃，严格控制流动相组分比例，设置合理的梯度洗脱条件，提高了主峰与相关杂质的分离度，分离度均大于1.5，分离效果突出；
39、(2)本专利技术分析方法基线平稳，稳定性良好，专属性良好，灵敏度高，可以准确检测左酮咯酸的有关物质，从而全面、准确、客观的评价产品质量，具有非常重要的意义。
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1.一种左酮咯酸有关物质的高效液相色谱分析方法，其特征在于，所述方法能够分离左酮咯酸中有关物质，各色谱峰之间的分离度不小于1.5；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有关物质包括杂质TLS-5A、杂质TLS-5E、杂质TLS-5F、杂质TLS-5J，各色谱峰之间的分离度不小于1.5；
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述稀释剂为乙腈和水的混合溶液，其中乙腈和水体积比为30：70。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，按照下表进行梯度洗脱：
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述柱温为20℃。
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述流速为0.98～1.0ml/min。
8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述进样体积为10μl。
9.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述波长为313nm。
10.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的杂质的检测限度为：供试品溶
...【技术特征摘要】
1.一种左酮咯酸有关物质的高效液相色谱分析方法，其特征在于，所述方法能够分离左酮咯酸中有关物质，各色谱峰之间的分离度不小于1.5；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有关物质包括杂质tls-5a、杂质tls-5e、杂质tls-5f、杂质tls-5j，各色谱峰之间的分离度不小于1.5；
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述稀释剂为乙腈和水的混合溶液，其中乙腈和水体积比为30：70。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，按照下表进行梯度洗脱：
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述柱温为20℃。
7.根据权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：晁阳，冯云庆，张琼燕，李斯，闵涛，龚磊，李淦，
申请(专利权)人：南京海融医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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