一种艾地骨化醇有关异构体杂质、制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种艾地骨化醇有关异构体杂质、制备方法和应用。本发明专利技术旨在保护一种全新结构的艾地骨化醇发酵杂质F，经制备和结构确认，该杂质是艾地骨化醇合成工艺中产生的25

【技术实现步骤摘要】
一种艾地骨化醇有关异构体杂质、制备方法和应用


[0001]本专利技术属于药物化学合成
，具体涉及一种艾地骨化醇有关异构体杂质的制备方法和应用。

技术介绍

[0002]艾地骨化醇(Eldecalcitol)，化学名为：(1R,2R,3R,5Z,7E)
‑2‑
(3
‑
羟基丙氧基)
‑
9,10
‑
开环胆甾
‑
5,7,10(19)
‑
三烯
‑
1,3,25
‑
三醇，结构式为：
[0003][0004]艾地骨化醇是一种具有生理活性的维生素D3衍生物，其制剂剂型主要为软胶囊，规格为0.5μg和0.75μg，适应症为骨质疏松症。艾地骨化醇软胶囊原研厂家为日本中外制药株式会社，于2011年1月21日在日本获批上市，商品名为Edirol。在预防骨质疏松骨折方面，艾地骨化醇疗效优于阿法骨化醇，且安全性与阿法骨化醇相当。
[0005]艾地骨化醇生理活性高，单次服用剂量极小，且性质不稳定，对光和热敏感，含有多个手性中心，传统合成路线较长，在合成过程中无可避免的容易产生一些异构体杂质及其它有关物质，难于分离纯化，因而合成工艺技术门槛高、难度大。我们在开发艾地骨化醇原料药的合成工艺中，在步骤八的微生物转化反应中，除了会在25
‑
位羟化，也会在26
‑
位或者27
‑
位发生羟化反应，生成两个25
‑
位异构体杂质。该杂质在艾地骨化醇粗品中的含量超过3.0％，经传统的柱层析、重结晶等纯化方式难以清除，会给产品安全性带来隐患。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种艾地骨化醇有关异构体杂质、制备方法和应用。本专利技术旨在保护杂质F的制备方法，建立检测方法，分析杂质含量，并确定合理的杂质限度，以保证艾地骨化醇的产品质量及用药安全性。
[0007]实现上述专利技术目的的技术方案是：
[0008]第一方面，本专利技术提供一种艾地骨化醇杂质F，其具有如下所示结构：
[0009][0010]进一步地，所述杂质F由两个互为异构体的杂质组成，结构式如下：
[0011][0012]所述式(I)和式(II)互为异构体。
[0013]第二方面，本专利技术提供一种艾地骨化醇杂质F的制备方法，反应路线如下：
[0014][0015]所述的制备方法步骤如下：
[0016](1)以式1化合物为原料，经微生物转化反应，在式1化合物的26
‑
位或27
‑
位上羟基得到式2化合物；
[0017](2)式2化合物在1,3
‑
丙二醇和碱的作用下，发生环氧开环反应得到式3化合物；
[0018](3)式3化合物在光敏剂和碱的作用下，经光化学及热异构化反应得到含有杂质F的粗品；
[0019](4)将步骤(3)所得粗品溶解后，采用DAC
‑
50动态轴向压缩制备柱色谱系统对粗品进行制备分离和纯化，最终得杂质F。
[0020]根据本专利技术实施方案，步骤(1)中所述微生物转化反应是将式1化合物作为反应底物，然后将假诺卡氏菌HRW001进行发酵培养、离心分离后得到假诺卡氏菌HRW001菌体，并将所述菌体应用于微生物转化，在式1化合物的26
‑
位或27
‑
位上羟基得到式2化合物；
[0021]根据本专利技术实施方案，所述微生物转化反应在有机溶剂中进行，所述溶剂选自乙醇、甲醇、丙二醇、四氢呋喃、乙酸乙酯、二氯甲烷、丙酮中的一种或至少两种的组合；优选地，所述溶剂选自乙醇。
[0022]根据本专利技术实施方案，步骤(1)中假诺卡氏菌HRW001，经中国普通微生物菌种保藏管理中心鉴定，分类命名为假诺卡氏菌Pseudonocardia sp.HRW001，该菌株已于2019年04月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.17524，保藏地址：中国北京。
[0023]根据本专利技术实施方案，步骤(2)中所述碱选自碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钾、氢氧化钠、叔丁醇钠、叔丁醇钾、甲醇钾、三乙胺、N,N
‑
二异丙基乙胺中的一种或至少两种的组合；所述式2化合物与碱的摩尔比为1:2～4；
[0024]优选地，所述碱选自叔丁醇钾，所述式2化合物与碱的摩尔比为1：3；式2化合物与1,3
‑
丙二醇的质量比为1：20；
[0025]优选地，所述反应在氮气保护下进行，反应温度控制在100～120℃，反应时间为2～4h。
[0026]进一步优选地，反应温度控制在110℃，反应时间为3h。
[0027]根据本专利技术实施方案，步骤(3)光化学及热异构化反应是在有机溶剂中进行，所述溶剂选自乙醇、甲醇、丙二醇、四氢呋喃、乙酸乙酯、二氯甲烷、丙酮中的一种或至少两种的组合；
[0028]根据本专利技术实施方案，所述碱选自碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钾、氢氧化钠、叔丁醇钠、叔丁醇钾、甲醇钾、三乙胺、N,N
‑
二异丙基乙胺中的一种或至少两种的组合；所述式2化合物与碱的摩尔比为1:2～4；
[0029]优选地，所述溶剂选四氢呋喃，所述碱选自三乙胺，所述式3化合物与碱的摩尔比为1：3；
[0030]优选地，所述光敏剂蒽类光敏剂，具体可以是蒽、9
‑
乙酰基蒽、2
‑
乙酰基蒽、蒽
‑9‑
甲酸、9,10
‑
二苯基蒽中的一种；
[0031]进一步优选地，所述光敏剂为蒽，所述式3化合物与蒽的摩尔比是1:0.5～1。
[0032]进一步优选地，步骤(3)中光化学及热异构化反应是将式3化合物溶于四氢呋喃中，加入蒽和三乙胺，氮气保护下，于
‑5±
5℃时，500W高压紫外汞灯进行光化学反应，保温反应5h，然后升温至65℃，保温反应4h，将反应液减压浓缩，柱层析纯化，得到含有杂质F的粗品。
[0033]根据本专利技术实施方案，步骤(4)中采用DAC
‑
50动态轴向压缩制备柱色谱系统对粗品进行制备分离和纯化，取粗品溶液进样，洗脱剂为乙腈和水的混合溶液，其中乙腈和水的
体积比为：乙腈/水＝55/45，流速：80ml/min，波长：265nm。
[0034]第三方面，本专利技术还提供所述艾地骨化醇发酵杂质F在药物工艺研究中的应用，其可用于艾地骨化醇杂质研究。
[0035]第四方面，本专利技术提供一种检测艾地骨化醇原料药中杂质F的方法，具体包括以下步骤：
[0036](1)样品配制：
[0037]供试品溶液取本品约3mg，置10ml量瓶中，加2ml甲醇振摇使溶解，用稀释剂稀释至刻度，摇匀(于30分钟内进样)。
[0038]对照溶液精密量取供试品溶液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种艾地骨化醇发酵杂质F，其具有如下所示结构：2.根据权利要求1所述的艾地骨化醇发酵杂质F，其特征在于，所述杂质F由两个互为异构体的杂质组成，结构式如下：所述式(I)和式(II)互为异构体。3.一种艾地骨化醇发酵杂质F的制备方法，反应路线如下：所述制备方法步骤如下：(1)以式1化合物为原料，经微生物转化反应，在式1化合物的26
‑
位或27
‑
位上羟基得到式2化合物；
(2)式2化合物在1,3
‑
丙二醇和碱的作用下，发生环氧开环反应得到式3化合物；(3)式3化合物在光敏剂和碱的作用下，经光化学及热异构化反应得到含有杂质F的粗品；(4)将步骤(3)所得粗品溶解后，采用DAC
‑
50动态轴向压缩制备柱色谱系统对粗品进行制备分离和纯化，最终得杂质F。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述微生物转化反应是将式1化合物作为反应底物，然后将假诺卡氏菌HRW001进行发酵培养、离心分离后得到假诺卡氏菌HRW001菌体，并将所述菌体应用于微生物转化，在式1化合物的26
‑
位或27
‑
位上羟基得到式2化合物；所述微生物转化反应在有机溶剂中进行，所述溶剂选自乙醇、甲醇、丙二醇、四氢呋喃、乙酸乙酯、二氯甲烷、丙酮中的一种或至少两种的组合；优选地，所述溶剂选自乙醇。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中假诺卡氏菌HRW001，经中国普通微生物菌种保藏管理中心鉴定，分类命名为假诺卡氏菌Pseudonocardiasp.HRW001，该菌株已于2019年04月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.17524。6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述碱选自碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钾、氢氧化钠、叔丁醇钠、叔丁醇钾、甲醇钾、三乙胺、N,N
‑
二异丙基乙胺中的一种或至少两种的组合；所...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛元丽，丁伯祥，王雪萌，胡永康，王继芳，
申请(专利权)人：南京海融医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：