【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种r8-dgr修饰的脂质纳米粒及其用途。
技术介绍
1、常见的肺部罕见病包括囊性纤维化、特发性肺纤维化、α-1抗胰蛋白酶缺乏症、原发性纤毛运动障碍、淋巴管肌瘤病等，这些疾病多为慢性或持续性的肺部症状，严重影响患者的生活质量。肺部罕见病的共同点为小分子化药难以治疗，现有的治疗指南和专家共识也大多为对症疗法，因此针对这些肺部疾病的治疗具有极大的未被满足的临床需求。同时，由于大多数肺部罕见病是由基因突变导致的，以核酸药物递送为基础的基因治疗即成为了最有潜力的对因治疗方案。其中脂质纳米粒(lipid nanoparticles,lnp)由于生物相容性良好，制备方法相对简便，对核酸药物的包封率高，成为了近年来快速发展且较为成熟的核酸药物载体系统。用于核酸药物递送的lnp通常包括可电离脂质、辅助磷脂、胆固醇和聚乙二醇化脂质，目前基于这四种脂质材料处方的核酸药物递送lnp体系已有三款获批上市，包括用于淀粉样多发性神经病变的sirna药物onpattro，以及两款mrna新冠疫苗comirnaty和spikevax，此外也有更多的lnp核酸药物递送体系已进入临床研究阶段。
2、然而lnp的应用，尤其是经吸入给药在肺部疾病的基因治疗上的应用，仍然存在一定的缺陷。首先，核酸药物需进入细胞后才能调控基因表达或编码功能蛋白，而lnp进入细胞的主要方式是通过脂质材料与细胞膜的膜融合作用，这种介导入胞的能力通常是相对较弱的；同时，由于呼吸道内的上皮细胞表面通常覆盖着一层起保护作用的黏液层，经吸入给药用于肺部
3、细胞穿膜肽是一类具有高效介导穿透入胞能力的短肽，已有大量研究证实将穿膜肽作为配体修饰能够增强载药系统的组织穿透和细胞内传递，专利(cn104497147b)公开了一种具有双受体识别能力的串联型主动靶向穿膜肽rx-dgr，其能够同时识别肿瘤细胞表面高度表达的整合素受体αvβ3和跨膜蛋白受体nrp-1，将该穿膜肽用于肿瘤靶向纳米递药系统能够显著增强递药系统的肿瘤靶向和肿瘤深层穿透能力。另有研究使用该类主动靶向穿膜肽r8-dgr修饰的脂质体包载crispr/cas9基因编辑系统，用于胰腺癌的治疗，同样能够显著增强递药系统对肿瘤组织的穿透能力和治疗效果(knockdown of hypoxia-induciblefactor-1alpha by tumor targeted delivery of crispr/cas9 system suppressed themetastasis of pancreatic cancer.man li et.al,j control release.2019,304:204-215.)。该类主动靶向穿膜肽的应用目前仅局限于肿瘤靶向递药系统，但事实上，一方面穿膜肽本身较强的穿透能力使其具有了介导递药系统穿透肺部上皮细胞黏液层的潜在可能，另一方面整合素受体与肺部纤维化的发病机制同样密切相关，有研究报道整合素受体αv家族参与了肺纤维化关键靶点转化生长因子(tgf-β)的激活，进而参与肺部纤维化的病程发展，在纤维化病变的肺泡上皮细胞通常高表达整合素受体αv家族(role of integrin-mediated tgfβactivation in the pathogenesis of pulmonary fibrosis.amandagoodwin et.al,biochem soc trans.2009,37(pt 4):849-54.)。因此主动靶向穿膜肽rx-dgr具有应用于肺部核酸药物递送尤其是针对肺部纤维化病变的核酸药物递送的潜在优势，而目前尚无将此类主动靶向穿膜肽应用于治疗肺部纤维化相关疾病的研究报道。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术提供了主动靶向穿膜肽r8-dgr修饰的包载核酸药物的脂质纳米粒，用于治疗相关疾病，其不仅能够主动靶向肺部细胞的整合素受体αv家族，还能够通过穿膜肽具有高效穿透进入细胞的作用，将脂质纳米粒包裹的核酸药物递送到病灶，进而增加药物的治疗效果。
2、本专利技术的目的之一是提供一种r8-dgr修饰的脂质纳米粒，其包括脂质复合物和包封在所述脂质复合物中的核酸类药物。
3、在一些实施方案中，所述脂质复合物包括可电离脂质、辅助磷脂、胆固醇和聚乙二醇脂质、r8-dgr修饰的聚乙二醇脂质的一种或多种，优选地，所述脂质复合物由可电离脂质、辅助磷脂、胆固醇和聚乙二醇脂质、r8-dgr修饰的聚乙二醇脂质组成。
4、在一些实施方案中，所述脂质复合物由以下组分组成：
5、所述可电离脂质的摩尔百分比为35-65％，优选45-55％；
6、所述辅助磷脂的摩尔百分比为10-20％，优选10-15％；
7、所述胆固醇的摩尔百分比为20-50％，优选30-40％；
8、所述聚乙二醇脂质的摩尔百分比为1-10％，优选1-5％；
9、所述r8-dgr修饰的聚乙二醇脂质的摩尔百分比为0.1-5％，优选0.5-1.5％。
10、在一些实施方案中，所述可电离脂质为dlin-mc3-dma、sm-102、5a2-sc8、c12-200中的至少一种；优选地，所述可电离脂质为sm-102；在一些实施方案中，所述辅助磷脂包括二硬脂酰磷脂酰胆碱(dspc)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(dppc)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(dmpc)、1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰胆碱(popc)、二油酰磷脂酰乙醇胺(dope)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dspe)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(dppe)、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(dmpe)、1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰乙醇胺(pope)中的至少一种；优选地，所述辅助磷脂为二硬脂酰磷脂酰胆碱(dspc)；所述聚乙二醇脂质包括1,2-二肉豆蔻酰-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇(dmg-peg)、二硬脂酰-rac-甘油-聚乙二醇(dsg-peg)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(dspe-peg)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(dppe-peg)、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(dmpe-peg)、二油酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(dope-peg)中的至少一种，peg分子量为500-5000；优选地，所述聚乙二醇脂质为dmg-peg2000。
11、在一些实施方案中，所述r8-dgr修饰的聚乙二醇脂质由含马来酰亚胺末端的聚乙二醇脂质和含有半胱氨酸末端的r8-dgr制备得到。
12、在一些实施方案中，所述含马来酰亚胺末端的聚乙二醇脂质包括二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺(dspe-peg-mal)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺(dppe-peg-mal)、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺(dmpe-peg-mal)、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种R8-dGR修饰的脂质纳米粒，其中，所述R8-dGR修饰的脂质纳米粒包括脂质复合物以及包封在脂质复合物中的核酸药物。
2.根据权利要求1所述的R8-dGR修饰的脂质纳米粒，所述脂质复合物包括可电离脂质、辅助磷脂、胆固醇和聚乙二醇脂质、R8-dGR修饰的聚乙二醇脂质的一种或多种，优选地，所述脂质复合物由可电离脂质、辅助磷脂、胆固醇和聚乙二醇脂质、R8-dGR修饰的聚乙二醇脂质组成。
3.根据权利要求2所述的R8-dGR修饰的脂质纳米粒，其中，所述脂质复合物由以下组分组成：
4.根据权利要求2或3所述的R8-dGR修饰的脂质纳米粒，其中，所述可电离脂质包括DLin-MC3-DMA、SM-102、5A2-SC8、C12-200中的至少一种；优选地，所述可电离脂质为SM-102；
5.根据权利要求2-4任一项所述的R8-dGR修饰的脂质纳米粒，其中，所述R8-dGR修饰的聚乙二醇脂质主要由含马来酰亚胺末端的聚乙二醇脂质和含有半胱氨酸末端的R8-dGR制备得到。
6.根据权利要求5所述的R8-dGR修饰的脂质纳米粒，其中，
7.根据权利要求2-6任一项所述的R8-dGR修饰的脂质纳米粒，其中，所述R8-dGR修饰的聚乙二醇脂质为DSPE-PEG2000-R8-dGR。
8.根据权利要求2-7任一项所述的R8-dGR修饰的脂质纳米粒，其中，所述核酸药物包括mRNA药物、siRNA药物、miRNA药物、反义核酸药物、适配体药物和DNA药物中的至少一种；
9.根据权利要求2-8任一项所述R8-dGR修饰的脂质纳米粒，其中，所述核酸药物与所述脂质复合物的质量比为1:10-1:40，优选为1:20-1:30。
10.一种如权利要求1-9任一项所述的R8-dGR修饰的脂质纳米粒的制备方法，包括以下步骤：取可电离脂质、辅助磷脂、胆固醇、聚乙二醇脂质、R8-dGR修饰的聚乙二醇脂质，溶解于无水乙醇作为乙醇相，另取核酸药物溶解于柠檬酸缓冲液作为水相，混合所述水相和所述乙醇相制备脂质纳米粒，接收液为脂质纳米粒中间品；使用磷酸盐缓冲液稀释后；透析除去乙醇，过滤即得R8-dGR修饰的包载核酸药物的脂质纳米粒体系。
11.如权利要求10所述R8-dGR修饰的脂质纳米粒的的制备方法，其中，所述柠檬酸缓冲液浓度为10-100mM，pH值为3-5；优选为50mM，pH＝4。
12.如权利要求10或11所述R8-dGR修饰的脂质纳米粒的的制备方法，其中，混合所述水相和所述乙醇相制备脂质纳米粒过程中，所述水相和乙醇相的流速比为(2-5):1，总流速为2-20mL/min；优选为4-8mL/min。
13.一种如权利要求1-9任一项所述的R8-dGR修饰的脂质纳米粒的制备方法，包括以下步骤：
14.如权利要求13所述R8-dGR修饰的脂质纳米粒的制备方法，其中，所述柠檬酸缓冲液浓度为10-100mM，pH值为3-5；优选为50mM，pH＝4。
15.如权利要求13或14所述R8-dGR修饰的脂质纳米粒的制备方法，其中，混合所述水相和所述乙醇相制备脂质纳米粒过程中，所述水相和乙醇相的流速比为(2-5):1，总流速为2-20mL/min；优选为4-8mL/min。
16.一种R8-dGR修饰的脂质复合物，所述脂质复合物包括可电离脂质、辅助磷脂、胆固醇和聚乙二醇脂质、R8-dGR修饰的聚乙二醇脂质的一种或多种，优选地，所述脂质复合物由可电离脂质、辅助磷脂、胆固醇和聚乙二醇脂质、R8-dGR修饰的聚乙二醇脂质组成。
17.根据权利要求16所述的R8-dGR修饰的脂质复合物，其中，所述脂质复合物由以下组分组成：
18.根据权利要求16或17所述的R8-dGR修饰的脂质复合物，其中，所述可电离脂质包括DLin-MC3-DMA、SM-102、5A2-SC8、C12-200中的至少一种；优选地，所述可电离脂质为SM-102；
19.根据权利要求16-18任一项所述的R8-dGR修饰的脂质复合物，其中，所述R8-dGR修饰的聚乙二醇脂质由含马来酰亚胺末端的聚乙二醇脂质和含有半胱氨酸末端的R8-dGR制...
【技术特征摘要】
1.一种r8-dgr修饰的脂质纳米粒，其中，所述r8-dgr修饰的脂质纳米粒包括脂质复合物以及包封在脂质复合物中的核酸药物。
2.根据权利要求1所述的r8-dgr修饰的脂质纳米粒，所述脂质复合物包括可电离脂质、辅助磷脂、胆固醇和聚乙二醇脂质、r8-dgr修饰的聚乙二醇脂质的一种或多种，优选地，所述脂质复合物由可电离脂质、辅助磷脂、胆固醇和聚乙二醇脂质、r8-dgr修饰的聚乙二醇脂质组成。
3.根据权利要求2所述的r8-dgr修饰的脂质纳米粒，其中，所述脂质复合物由以下组分组成：
4.根据权利要求2或3所述的r8-dgr修饰的脂质纳米粒，其中，所述可电离脂质包括dlin-mc3-dma、sm-102、5a2-sc8、c12-200中的至少一种；优选地，所述可电离脂质为sm-102；
5.根据权利要求2-4任一项所述的r8-dgr修饰的脂质纳米粒，其中，所述r8-dgr修饰的聚乙二醇脂质主要由含马来酰亚胺末端的聚乙二醇脂质和含有半胱氨酸末端的r8-dgr制备得到。
6.根据权利要求5所述的r8-dgr修饰的脂质纳米粒，其中，所述含马来酰亚胺末端的聚乙二醇脂质包括二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺(dspe-peg-mal)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺(dppe-peg-mal)、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺(dmpe-peg-mal)、二油酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺(dope-peg-mal)中的至少一种，peg分子量为1000-5000；
7.根据权利要求2-6任一项所述的r8-dgr修饰的脂质纳米粒，其中，所述r8-dgr修饰的聚乙二醇脂质为dspe-peg2000-r8-dgr。
8.根据权利要求2-7任一项所述的r8-dgr修饰的脂质纳米粒，其中，所述核酸药物包括mrna药物、sirna药物、mirna药物、反义核酸药物、适配体药物和dna药物中的至少一种；
9.根据权利要求2-8任一项所述r8-dgr修饰的脂质纳米粒，其中，所述核酸药物与所述脂质复合物的质量比为1:10-1:40，优选为1:20-1:30。
10.一种如权利要求1-9任一项所述的r8-dgr修饰的脂质纳米粒的制备方法，包括以下步骤：取可电离脂质、辅助磷脂、胆固醇、聚乙二醇脂质、r8-dgr修饰的聚乙二醇脂质，溶解于无水乙醇作为乙醇相，另取核酸药物溶解于柠檬酸缓冲液作为水相，混合所述水相和所述乙醇相制备脂质纳米粒，接收液为脂质纳米粒中间品；使用磷酸盐缓冲液稀释后；透析除去乙醇，过滤即得r8-dgr修饰的包载核酸药物的脂质纳米粒体系。
11.如权利要求10所述r8-dgr修饰的脂质纳米粒的的制备方法，其中，所述柠檬酸缓冲液浓度为10-100mm，ph值为3-5；优选为50mm，ph＝4。
12.如权利要求10或11所述r8-dgr修饰的脂质纳米粒的的制备方法，其中，混合所述水相和所述乙醇相制备脂质纳米粒过程中，所述水相和乙醇相的流速比为(2-5):1，总流速为2-20ml/min；优选为4-8ml/min。
13.一种如权利要求1-9任一项所述的r8-dgr修饰的脂质纳米粒的制备方法，包括以下步骤：
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【专利技术属性】
技术研发人员：刘亚圆，王震宇，冯博，张利，舒宏，杜书文，
申请(专利权)人：四川普锐特药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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