一种以外泌体和含核定位序列多肽为基础的基因递送方法技术

本发明专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种以外泌体和含核定位序列多肽为基础地基因递送方法。具体地，本发明专利技术提供了一种通过外泌体提高靶细胞中外源基因表达量的方法，所述方法包括外泌体与外源基因混合共电转后与细胞共孵育的步骤；所述方法还包括在电转前，将外源基因与辅助多肽和/或KK58混合孵育，所述辅助多肽是核定位信号、核定位信号与DNA结合结构域连接所构成的。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种以外泌体和含核定位序列多肽为基础地基因递送方法。

技术介绍

1、基因疗法是指在dna水平对致病的缺陷基因进行编辑，通过修正基因缺陷或是调节基因的表达起到治愈疾病的作用。如何利用载体将外源基因准确有效地导入靶细胞是基因治疗成功的关键技术，目前的临床实验研究中80％采用逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒等病毒类载体，此外还包括受体、脂质体、脂质纳米粒(lipid nanoparticle，lnp)等非病毒载体。上述载体虽然转染效率高，但是依然存在免疫原性、毒性、致癌性、宿主dna插入整合等安全隐患，而作为天然胞间信息载体的外泌体可以克服前者在免疫原性及安全性等方面存在的问题，还具有更强的靶向性，容易通过血脑屏障，在药物载体领域具有巨大的应用潜力。

2、外泌体是指来源于细胞内内溶酶体微粒内陷形成的直径在40-100nm的多囊泡体，由含有跨膜蛋白、胞质蛋白和各种核酸的脂质双层组成。人体内多种细胞及体液均可分泌外泌体，包括内皮细胞、免疫细胞、血小板、平滑肌细胞等。当其由宿主细胞被分泌到受体细胞中时，外泌体可通过其携带的本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种通过外泌体提高靶细胞中外源基因表达量的方法，所述方法包括外泌体与外源基因混合共电转后与细胞共孵育的步骤；

2.如权利要求1所述方法，所述核定位信号的序列如SEQ ID NO.1-2或13-16所示；

3.如权利要求1所述方法，所述HSP蛋白是对细胞进行热激培养后离心并使用缓冲液重悬沉淀而得到；

4.如权利要求1所述方法，所述外源基因存在于质粒中；

5.如权利要求1所述方法，所述外泌体的来源包括生物体液、生物组织或细胞培养液；

6.权利要求1所述方法所制备得到的靶细胞。

7.权利要求6所述靶细胞在制备基因治疗药...

【技术特征摘要】

1.一种通过外泌体提高靶细胞中外源基因表达量的方法，所述方法包括外泌体与外源基因混合共电转后与细胞共孵育的步骤；

2.如权利要求1所述方法，所述核定位信号的序列如seq id no.1-2或13-16所示；

3.如权利要求1所述方法，所述hsp蛋白是对细胞进行热激培养后离心并使用缓冲液重悬沉淀而得到；

4.如权利要求1所述方法，所述外源基因存在于质粒中；

5.如权利要求1所述方法，所述外泌体的来源包括生物体液、生物组织或细胞培养液；

6.权利要求1所述方法所制备得到的靶细胞。

7...

【专利技术属性】
技术研发人员：张恒，武佳燕，吴理达，顾雨春，胡兰芳，
申请(专利权)人：呈诺再生医学科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：