本发明专利技术提供了一种呼吸道合胞病毒(RSV)疫苗组合物，涉及生物医药工程领域。本发明专利技术将表达的融合前F蛋白和本发明专利技术的佐剂组合后，制备疫苗组合物，所述疫苗组合物可诱导产生高滴度的中和抗体，以及IL‑2、IFN‑γ等Th1型细胞因子。
1、呼吸道合胞病毒(rsv)是感染肺和呼吸道的呼吸道病毒，是世界范围内婴儿中严重病毒性下呼吸道疾病的主要原因，且是老年人呼吸疾病的重要原因。rsv f(针对所述病毒的中和抗体的主要靶标)是在病毒包膜上丰富的i类融合糖蛋白。尽管对f蛋白诸多的结构设计已经足以使其呈稳定的融合前构象，发挥改善的免疫原性，但对于重组亚单位疫苗而言，使用佐剂是尤为重要的，其可减少抗原使用量、增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型。铝佐剂是目前批准且应用最为广泛的佐剂，但铝佐剂对体液免疫应答具有有限的佐剂作用。专利技术人发现mpl与polyi:c或tql-1055组合制备的脂质体佐剂不仅可以提高体液免疫应答，还能强效刺激th1型免疫。生物相容性好，且大大降低佐剂的副作用。然而其是否能有效增强机体对rsv抗原的免疫应答，以及采用何种比例配制可在确保安全性的前提下最大化免疫刺激活性，这些问题均无法预测，需要试验验证，也成为本领域技术人员急需解决的技术问题。
1、本专利技术的目的是提供一种新的安全性和免疫刺激活性好，具有人体应用前景的rsv疫苗组合物及其制备方法和应用。尤其涉及某些佐剂的发现，所述佐剂能够增加对呼吸道合胞病毒包膜蛋白的免疫应答，特别涉及rsv糖蛋白f，佐剂的存在允许用减少量的抗原制备疫苗，且大大增强了抗原的免疫原性。
>3、本专利技术一方面提供一种疫苗组合物，其包含rsv抗原性多肽和佐剂；所述佐剂为包含mpl、tql-1055和polyi:c中一种或几种的水包油乳剂、脂质体或纳米颗粒。4、在一些实施方式中，所述佐剂是包含tql-1055和/或polyi:c的脂质体佐剂。
5、在一些实施方式中，所述佐剂进一步包含mpl。
6、在本专利技术提供的一种疫苗组合物中，所述佐剂是包含tql-1055和mpl的脂质体佐剂。
7、在一些实施方式中，所述脂质体佐剂包括：
8、a)由dopc组成的脂质；
9、b)胆固醇；以及
10、c)基本分布于脂质体磷脂双分子层的mpl和tql-1055，
11、其中所述由dopc组成的脂质与胆固醇的重量比为4:1，胆固醇与mpl的重量比为5:1，mpl与tql-1055的重量比为2:1-2:3。
12、在一些实施方式中，每人用剂量中所述由dopc组成的脂质重量为1000μg，胆固醇的重量为250μg，mpl的重量为25～50μg，tql-1055的重量为25～75μg。
13、在一些实施方式中，每人用剂量中所述由dopc组成的脂质重量为1000μg，胆固醇的重量为250μg，mpl的重量为25μg或50μg，polyi:c的重量为25μg或62.5μg。
14、在另一些实施方式中，所述脂质体佐剂包括：
15、a)由dopc和dotap组合的脂质混合物；
16、b)胆固醇；以及
17、c)基本分布于脂质体磷脂双分子层的mpl和tql-1055，
18、其中dopc与dotap的重量比为9:1或4:1，脂质混合物与胆固醇的重量比为4:1，胆固醇与mpl的重量比为5:1，mpl与tql-1055的重量比为2:1-2:3。
19、在一些实施方式中，每人用剂量中所述dopc与dotap重量合计为1000μg，胆固醇的重量为250μg，mpl的重量为25～50μg，tql-1055的重量为25～75μg。
20、在一些实施方式中，每人用剂量中所述dopc与dotap重量合计为1000μg，胆固醇的重量为250μg，mpl的重量为25μg或50μg，tql-1055的重量为25μg或62.5μg。
21、dotap与中性脂质(例如dopc)的组合主要优点是二者的组合更稳定，制成的脂质混合物保持无沉淀状态时间可超过2个月，相比于仅使用中性脂质的稳定性增加3-5倍。另外，dopc与dda的脂质组合获得的脂质体粒径远大于200nm，对工艺后期的过滤除菌等会有不利影响，而本专利技术的脂质体颗粒平均粒径普遍较小，有利于后期工艺及免疫增效。
22、在一些实施方式中，所述tql-1055和mpl均基本分布于脂质体佐剂的磷脂双分子层。
23、在本专利技术提供的另一种疫苗组合物中，所述佐剂是包含polyi:c和mpl的平均粒径80～100nm的单室或多室脂质体，其中所述mpl与polyi:c的重量比为2:1-2:120。
24、在一些实施方式中，所述脂质体佐剂包括：
25、a)由dopc组成的脂质；
26、b)胆固醇；以及
27、c)mpl和polyi:c，
28、其中所述由dopc组成的脂质与胆固醇的重量比为4:1，胆固醇与mpl的重量比为5:1，mpl与polyi:c的重量比为2:1-2:60。
29、在一些实施方式中，每人用剂量中所述由dopc组成的脂质重量为1000μg，胆固醇的重量为250μg，mpl的重量为25～50μg，polyi:c的重量为25～1500μg。
30、在一些实施方式中，每人用剂量中所述由dopc组成的脂质重量为1000μg，胆固醇的重量为250μg，mpl的重量为25μg或50μg，polyi:c的重量为25μg、50μg、500μg、1000μg或1500μg。
31、在另一些实施方式中，所述脂质体佐剂包括：
32、a)由dopc和dotap组合的脂质混合物；
33、b)胆固醇；以及
34、c)mpl和polyi:c，
35、其中dopc与dotap的重量比为9:1或19:1，脂质混合物与胆固醇的重量比为4:1，胆固醇与mpl的重量比为5:1，mpl与polyi:c的重量比为2:1-2:60。
36、在一些实施方式中，每人用剂量中所述dopc与dotap重量合计为1000μg，胆固醇的重量为250μg，mpl的重量为25～50μg，polyi:c的重量为25～1500μg。
37、在一些实施方式中，每人用剂量中所述dopc与dotap重量合计为1000μg，胆固醇的重量为250μg，mpl的重量为25μg或50μg，polyi:c的重量为25μg、50μg、500μg、1000μg或1500μg。
38、dotap与中性脂质(例如dopc)的组合主要优点是二者的组合更稳定，制成的脂质混合物保持无沉淀状态时间可超过2个月，相比于仅使用中性脂质的稳定性增加3-5倍。另外，dopc与dda的脂质组合获得的脂质体粒径远大于200nm，对工艺后期的过滤除菌等会有不利影响，而本专利技术的脂质体颗粒平均粒径普遍较小，有利于后期工艺及免疫增效。
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【技术保护点】
1.一种疫苗组合物，包含RSV抗原性多肽和佐剂，所述佐剂为脂质体形式，其包括：
2.如权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，每人用剂量中所述由DOPC组成的脂质重量为1000μg，胆固醇的重量为250μg，MPL的重量为25～50μg，TQL-1055的重量为25～75μg。
3.如权利要求2所述的疫苗组合物，其特征在于，每人用剂量中所述由DOPC组成的脂质重量为1000μg，胆固醇的重量为250μg，MPL的重量为25μg或50μg，PolyI:C的重量为25μg或62.5μg。
4.一种疫苗组合物，包含至少一种RSV抗原性多肽和佐剂，所述佐剂为脂质体形式，其包括：
5.如权利要求4所述的疫苗组合物，其特征在于，每人用剂量中所述DOPC与DOTAP重量合计为1000μg，胆固醇的重量为250μg，MPL的重量为25～50μg，TQL-1055的重量为25～75μg。
6.如权利要求5所述的疫苗组合物，其特征在于，每人用剂量中所述DOPC与DOTAP重量合计为1000μg，胆固醇的重量为250μg，MPL的重量为25μg或50μg，TQL-1055的重量为25μg或62.5μg。
7.如权利要求1或4所述的疫苗组合物，其特征在于，所述RSV抗原性多肽为选自重组的RSV糖蛋白F，糖蛋白G，基质蛋白(M2)和核蛋白(N)的肽或其免疫原性片段。
8.如权利要求7所述的疫苗组合物，其特征在于，相比于野生型RSV F蛋白，所述重组的RSV糖蛋白F包含至少一个将其稳定在融合前构象的氨基酸修饰。
9.如权利要求8所述的疫苗组合物，其特征在于，所述野生型RSV选自亚型A和亚型B毒株。
10.权利要求1-9中任一项所述的疫苗组合物的制备方法，包括以下步骤：
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【技术特征摘要】
1.一种疫苗组合物，包含rsv抗原性多肽和佐剂，所述佐剂为脂质体形式，其包括：
2.如权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，每人用剂量中所述由dopc组成的脂质重量为1000μg，胆固醇的重量为250μg，mpl的重量为25～50μg，tql-1055的重量为25～75μg。
3.如权利要求2所述的疫苗组合物，其特征在于，每人用剂量中所述由dopc组成的脂质重量为1000μg，胆固醇的重量为250μg，mpl的重量为25μg或50μg，polyi:c的重量为25μg或62.5μg。
4.一种疫苗组合物，包含至少一种rsv抗原性多肽和佐剂，所述佐剂为脂质体形式，其包括：
5.如权利要求4所述的疫苗组合物，其特征在于，每人用剂量中所述dopc与dotap重量合计为1000μg，胆固醇的重量为250μg，mpl的重量为25～50μg...
【专利技术属性】
技术研发人员：姚文荣，吴双，袁楚晓，胡颖嵩，柏浩，李倩倩，洪坤学，刘勇，
申请(专利权)人：江苏瑞科生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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