【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于化妆品，具体的说，涉及一种用于评价化妆品原料去角质功效的方法及试剂盒。
技术介绍
1、去角质的释义为“有助于促进皮肤角质的脱落或促进角质更新”，皮肤是覆盖身体表面的一个能够连续再生的器官，从表至里可分为表皮层和真皮层。表皮是皮肤的第一道屏障和防线，其最外层是角质层。人的薄型皮肤的角质层厚度约10-20μm，含若干层高度角化的细胞，其细胞间隙充满了几种混合脂质，角质层同时具有防上水分和盐分流失的保护作用、阻止水溶性物质通透的屏障作用和物理屏等功能。因此角质层对维护皮肤健康和皮肤的保护功能发挥了重要作用。当皮肤屏障受损，代谢不规律时，外部角质就会自然脱落异常，造成废旧角质积累、硬化、分布不均匀，从而导致皮肤粗糙暗黄、脱屑，产生皱纹等，并且影响美容护肤产品的有效吸收。
2、蛋白是角质层中的主要组成部分，由于脱落的角质细胞与脱落蛋白数量成正比，因此可以使用对脱落蛋白定量，来评价产品有无去角质功效及去角质功效的强弱。角质中富含角蛋白，因此可以将k1，k5，k10和k14角蛋白作为检测对象，其蛋白质表达水平可以用来判断细胞分化和增殖能力强弱。
3、基底层干细胞能够生成角质形成细胞，能够合成角蛋白k1，k5，k10和k14，以及角质化包膜蛋白。表皮细胞中主要的两种结构蛋白是角蛋白和丝聚蛋白，这些蛋白具有结构和功能的特异性。其中，角蛋白k5和k14称为基地角蛋白，主要在基底层中。细胞由终末分化移行至棘层，k1/k10蛋白对的表达相对增多，伴随着细胞的进一步分化，k1/k10的表达增多到最大限度，而k5/k1
4、目前，对于化妆品去角质功效评价测试方法对皮肤染色后，利用色度计测量每个部位原始皮肤颜色的颜色恢复情况，从而评估产品的去角质功效。该类测试方法以产品成品检测为主，对于化妆品研发初期的原料筛选效果不理想，检测方法与市场需求不匹配。而对于qpcr法筛选，适用于大规模的原料筛选。
技术实现思路
1、鉴于上述问题，本专利技术提供一种用于评价化妆品原料去角质功效的方法，该方法主要通过qpcr方法进行原料去角质功效的筛选。本专利技术的第二个目的是提供一种用于快速筛选化妆品原料去角质功效的试剂盒，试剂盒内包括rna提取试剂，逆转录试剂，特异性引物和qpcr试剂。
2、为实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：一种用于评价化妆品原料去角质功效的方法，包括以下步骤：
3、(1)将hacat细胞分为3组，分别为对照组，模型组和样品组，其中，对照组为正常培养的细胞，模型组为lps诱导的细胞，样品组为lps诱导和含待评价化妆品原料的处理组；
4、(2)用qpcr法测定各组中hacat细胞中角蛋白相关基因：k1，k5，k10和k14共4个基因的表达水平；通过其mrna的表达情况评价化妆品原料的去角质功效。
5、进一步地，步骤(2)中，用于检测k1基因表达的特异性引物序列如seq id no：1-2所示：
6、forward：5’-atggacaacaaccgcagtct-3’；
7、reverse：3’-tgcagctcttcatacttgctct-5’。
8、进一步地，步骤(2)中，用于检测k5基因表达的特异性引物序列如seq id no：3-4所示：
9、forward：5’-ggcgaggaatgcagactc-3’；
10、reverse：3’-tgctacctccggcaagac-5’。
11、进一步地，步骤(2)中，用于检测k10基因表达的特异性引物序列如seq id no：5-6所示：
12、forward：5’-acttgctgaacaaaaccgca-3’；
13、reverse：3’-cagggattgtttcaaggcca-5’。
14、进一步地，步骤(2)中，用于检测k14基因表达的特异性引物序列如seq id no：7-8所示：
15、forward：5’-gcagtcatccagagatgtgacct-3’；
16、reverse：3’-tgcgaaggacctgctcgtg-5’。
17、进一步地，hacat细胞作为实验模型，且复苏细胞后传代3次进行后续实验，且细胞传代不超过8次。
18、进一步地，含待筛原料的处理组的浓度选择时，在通过mtt实验，确定受试浓度，浓度需在ic10安全浓度以下。
19、进一步地，步骤(1)中，模型组和样品组中先使用10μg/ml的lps诱导细胞24h，诱导完成后，模型组使用新鲜培养基继续培养，样品组使用含受待评价化妆品原料的培养基继续培养。
20、进一步地，步骤(2)中，当检测结果中待筛选的化妆品原料对k1，k5，k10和k14共4个基因的表达水平表现出存在对其中两种及以上的基因表达没有表现出显著的抑制，则通过脱落蛋白进行定量实验验证功效。
21、本专利技术还提供一种用于评价化妆品原料去角质功效的试剂盒，包括核苷酸序列如seq id no：1～8所示的引物。
22、进一步地，还包括rna提取试剂、逆转录试剂和qpcr试剂。
23、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：(1)本专利技术使用hacat细胞模型，细胞的测试周期短，具有较好的准确度；(2)本专利技术对hacat细胞中与去角质相关基因进行检测，并构建形成了试剂盒，可以用于去角质类化妆品原料的快速筛选。
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1.一种用于评价化妆品原料去角质功效的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种用于评价化妆品原料去角质功效的方法，其特征在于，步骤(2)中，用于检测K1基因表达的特异性引物序列如SEQ ID NO：1-2所示：
3.根据权利要求1所述的一种用于评价化妆品原料去角质功效的方法，其特征在于，步骤(2)中，用于检测K5基因表达的特异性引物序列如SEQ ID NO：3-4所示：
4.根据权利要求1所述的一种用于评价化妆品原料去角质功效的方法，其特征在于，步骤(2)中，用于检测K10基因表达的特异性引物序列如SEQ ID NO：5-6所示：
5.根据权利要求1所述的一种用于评价化妆品原料去角质功效的方法，其特征在于，步骤(2)中，用于检测K14基因表达的特异性引物序列如SEQ ID NO：7-8所示：
6.根据权利要求1所述的一种用于评价化妆品原料去角质功效的方法，其特征在于，HaCaT细胞作为实验模型，复苏细胞后传代3次进行后续实验，且细胞传代不超过8次。
7.根据权利要求1所述的一种用于评价化
8.根据权利要求1所述的一种用于评价化妆品原料去角质功效的方法，其特征在于，步骤(1)中，模型组和样品组中先使用10μg/mL的LPS诱导细胞24h，诱导完成后，模型组使用新鲜培养基继续培养，样品组使用含待评价的化妆品原料培养基继续培养。
9.一种用于评价化妆品原料去角质功效的试剂盒，其特征在于，包括核苷酸序列如SEQID NO：1～8所示的引物。
10.根据权利要求9所述的一种用于评价化妆品原料去角质功效的试剂盒，其特征在于，还包括RNA提取试剂、逆转录试剂和qPCR试剂。
...【技术特征摘要】
1.一种用于评价化妆品原料去角质功效的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种用于评价化妆品原料去角质功效的方法，其特征在于，步骤(2)中，用于检测k1基因表达的特异性引物序列如seq id no：1-2所示：
3.根据权利要求1所述的一种用于评价化妆品原料去角质功效的方法，其特征在于，步骤(2)中，用于检测k5基因表达的特异性引物序列如seq id no：3-4所示：
4.根据权利要求1所述的一种用于评价化妆品原料去角质功效的方法，其特征在于，步骤(2)中，用于检测k10基因表达的特异性引物序列如seq id no：5-6所示：
5.根据权利要求1所述的一种用于评价化妆品原料去角质功效的方法，其特征在于，步骤(2)中，用于检测k14基因表达的特异性引物序列如seq id no：7-8所示：
6.根据权利要求1所述的一种用于评价化...
【专利技术属性】
技术研发人员：沈苍海，蒋旭峰，张阳，陆瑾，王卫国，陈凡，
申请(专利权)人：福建中妆技术研究有限公司，
类型：发明
国别省市：
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