本公开提供了与嵌合抗原受体(CAR)相关的组合物和方法。具体地，本公开提供了靶向表达磷脂酰肌醇蛋白聚糖‑3(GPC3)的肿瘤细胞的基于CAR的免疫治疗组合物以用于治疗和预防癌症。
本公开提供了与嵌合抗原受体(car)相关的组合物和方法。具体地，本公开提供了靶向表达磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3)的肿瘤细胞的基于car的免疫治疗组合物以用于治疗和预防癌症。
1、嵌合抗原受体(car)是为免疫效应细胞(例如，淋巴细胞)提供特定特性的基因工程化的受体。这些受体获得针对特定肿瘤细胞靶向的单克隆抗体的特异性。术语“嵌合”表示受体的组成部分的不同来源。具有工程化car的淋巴细胞获得了有效的免疫特性，并通过重新定向免疫系统来消除恶性细胞，充当活体药物，在患者体内扩张并确保长期抗肿瘤记忆。目前car技术的进展包括在血液恶性肿瘤、实体瘤中的使用、双car-t细胞和嵌合抗原受体自然杀伤细胞(car-nk细胞)的使用。例如，肝癌是全球癌症相关死亡的第二大原因，而肝细胞癌是最常见的类型。肝细胞癌的发病机制隐蔽，进展迅速，预后差，并且死亡率高。因此，迫切需要针对肝细胞癌的新分子靶点、早期诊断和靶向疗法的开发。磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(一种细胞表面糖蛋白，其中硫酸乙酰肝素糖胺聚糖链共价连接至蛋白质核心)在hcc组织中过表达，但在健康成人肝脏中不表达。因此，磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3正在成为肝癌诊断和免疫疗法的有前景的候选物。迄今为止，磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3已成为肝细胞癌诊断的可靠免疫组织化学标志物，并且血清中的可溶性磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3已成为液体活检的有前景的标志物。此外，已经开发了多种靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3的免疫疗法，包括磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3疫苗、抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3免疫毒素和嵌合抗原受体修饰的细胞。
r/>技术实现思路
1、本公开的方面包括与磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3)结合的嵌合抗原受体(car)。根据这些方面，car包含与gpc3结合的单链fv(scfv)、跨膜结构域和一个或多个胞内信号传导结构域，其中scfv包含重链可变(vh)区和轻链可变(vl)区对。在一些方面，vh和vl对选自表1中列出的各种序列。在一些方面，vh和vl对的cdr的各种组合选自表1中列出的序列。
2、本公开的方面包括一种与磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3)结合的嵌合抗原受体(car)，其中所述car包含与gpc3结合的单链fv(scfv)、跨膜结构域和一个或多个胞内信号传导结构域，
3、其中所述scfv包含重链可变(vh)区和轻链可变(vl)区对，并且其中所述vh和vl对选自由以下各项组成的组：
4、a)vh区，所述vh区包含具有seq id no:1的氨基酸序列的重链互补决定区1(cdr-h1)、具有seq id no:2的氨基酸序列的重链互补决定区2(cdr-h2)、具有seq id no:3的氨基酸序列的重链互补决定区3(cdr-h3)，和vl区，所述vl区包含具有seq id no:58的氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)、具有seq id no:59的氨基酸序列的轻链互补决定区2(cdr-l2)和具有seq id no:60的氨基酸序列的轻链互补决定区3(cdr-l3)；
5、b)vh区，所述vh区包含具有seq id no:4的氨基酸序列的重链互补决定区1(cdr-h1)、具有seq id no:5的氨基酸序列的重链互补决定区2(cdr-h2)、具有seq id no:6的氨基酸序列的重链互补决定区3(cdr-h3)，和vl区，所述vl区包含具有seq id no:61的氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)、具有seq id no:62的氨基酸序列的轻链互补决定区2(cdr-l2)和具有seq id no:63的氨基酸序列的轻链互补决定区3(cdr-l3)；
6、c)vh区，所述vh区包含具有seq id no:7的氨基酸序列的重链互补决定区1(cdr-h1)、具有seq id no:8的氨基酸序列的重链互补决定区2(cdr-h2)、具有seq id no:9的氨基酸序列的重链互补决定区3(cdr-h3)，和vl区，所述vl区包含具有seq id no:64的氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)、具有seq id no:65的氨基酸序列的轻链互补决定区2(cdr-l2)和具有seq id no:66的氨基酸序列的轻链互补决定区3(cdr-l3)；
7、d)vh区，所述vh区包含具有seq id no:10的氨基酸序列的重链互补决定区1(cdr-h1)、具有seq id no:11的氨基酸序列的重链互补决定区2(cdr-h2)、具有seq id no:12的氨基酸序列的重链互补决定区3(cdr-h3)，和vl区，所述vl区包含具有seq id no:67的氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)、具有seq id no:68的氨基酸序列的轻链互补决定区2(cdr-l2)和具有seq id no:69的氨基酸序列的轻链互补决定区3(cdr-l3)；
8、e)vh区，所述vh区包含具有seq id no:13的氨基酸序列的重链互补决定区1(cdr-h1)、具有seq id no:14的氨基酸序列的重链互补决定区2(cdr-h2)、具有seq id no:15的氨基酸序列的重链互补决定区3(cdr-h3)，和vl区，所述vl区包含具有seq id no:70的氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)、具有seq id no:71的氨基酸序列的轻链互补决定区2(cdr-l2)和具有seq id no:72的氨基酸序列的轻链互补决定区3(cdr-l3)；
9、f)vh区，所述vh区包含具有seq id no:16的氨基酸序列的重链互补决定区1(cdr-h1)、具有seq id no:17的氨基酸序列的重链互补决定区2(cdr-h2)、具有seq id no:18的氨基酸序列的重链互补决定区3(cdr-h3)，和vl区，所述vl区包含具有seq id no:73的氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)、具有seq id no:74的氨基酸序列的轻链互补决定区2(cdr-l2)和具有seq id no:75的氨基酸序列的轻链互补决定区3(cdr-l3)；
10、g)vh区，所述vh区包含具有seq id no:16的氨基酸序列的重链互补决定区1(cdr-h1)、具有seq id no:19的氨基酸序列的重链互补决定区2(cdr-h2)、具有seq id no:20的氨基酸序列的重链互补决定区3(cdr-h3)，和vl区，所述vl区包含具有seq id no:76的氨基酸序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)、具有seq id no:77的氨基酸序列的轻链互补决定区2(cdr-l2)和具有seq id no:78的氨基酸序列的轻链互补决定区3(cdr-l3)；
11、h)vh区，所述vh区包含具有seq id no:21的氨基酸序列的重链互补决定区1(cdr-h1)、具有seq id no:22的氨基酸序列的重链互补决定区2(cdr-h2)、具有seq id no:本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种与磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)结合的嵌合抗原受体(CAR)，其中所述CAR包含与GPC3结合的单链Fv(scFv)、跨膜结构域和一个或多个胞内信号传导结构域，
2.如权利要求所述的CAR，其中：
3.如权利要求1或权利要求2所述的CAR，其中所述scFv的所述VH和所述VL由肽接头分开，
4.一种工程化核酸，所述工程化核酸编码如权利要求1至3中任一项所述的CAR。
5.一种表达载体，所述表达载体包含如权利要求4所述的工程化核酸。
6.一种分离的细胞，所述分离的细胞包含如权利要求1至3中任一项所述的CAR、如权利要求4所述的工程化核酸或如权利要求5所述的表达载体。
7.一种工程化细胞群，所述工程化细胞群表达如权利要求1至3中任一项所述的CAR、如权利要求4所述的工程化核酸或如权利要求5所述的表达载体。
8.如权利要求6或权利要求7所述的细胞或细胞群，其中所述CAR是重组表达的，任选地其中所述CAR从载体或来自所述细胞的基因组的选定基因座表达。
9.如权利要求6至8中任一项所述的细胞或细胞群，其中所述细胞或细胞群进一步表达一种或多种免疫调节效应物，
10.如权利要求6至9中任一项所述的细胞或细胞群，其中所述一种或多种免疫调节效应物的表达：(a)由激活条件控制多肽(ACP)控制，或(b)由一个或多个表达表达盒表达，其中所述一个或多个表达盒各自包含ACP反应性启动子和编码一种或多种免疫调节效应物的外源多核苷酸序列，其中所述ACP反应性启动子可操作地连接至所述外源多核苷酸，任选地其中所述ACP能够通过与所述ACP反应性启动子结合来诱导所述一个或多个表达盒的表达，
11.如权利要求6至10中任一项所述的细胞或细胞群，其中所述细胞或细胞群选自由以下各项组成的组：T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、γ-δT细胞、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、调节性T细胞、病毒特异性T细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、自然杀伤(NK)细胞、B细胞、肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)、先天淋巴样细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性细胞、中性粒细胞、骨髓细胞、巨噬细胞、单核细胞、树突细胞、红细胞、血小板细胞、人胚胎干细胞(ESC)、ESC源性细胞、多能干细胞、间充质基质细胞(MSC)、诱导性多能干细胞(iPSC)和iPSC源性细胞，
12.一种药物组合物，所述药物组合物包含有效量的如权利要求1至3中任一项所述的CAR、如权利要求4所述的工程化核酸、如权利要求5所述的表达载体或如权利要求7至11中任一项所述的细胞或细胞群，以及药学上可接受的载剂、药学上可接受的赋形剂或它们的组合。
13.一种在受试者中刺激针对肿瘤细胞的细胞介导的免疫反应的方法，所述方法包括向患有肿瘤的受试者施用治疗有效剂量的如权利要求1至3中任一项所述的CAR、如权利要求4所述的工程化核酸、如权利要求5所述的表达载体、如权利要求7至11中任一项所述的细胞中的任一者或如权利要求12所述的组合物。
14.一种治疗患有肿瘤的受试者的方法，所述方法包括施用治疗有效剂量的如权利要求1至3中任一项所述的CAR、如权利要求4所述的工程化核酸、如权利要求5所述的表达载体、如权利要求7至11中任一项所述的细胞中的任一者或如权利要求12所述的组合物。
15.一种用于治疗和/或预防肿瘤的试剂盒，所述试剂盒包含如权利要求1至3中任一项所述的CAR、如权利要求4所述的工程化核酸、如权利要求5所述的表达载体、如权利要求7至11中任一项所述的细胞中的任一者或如权利要求12所述的组合物。
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【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种与磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3)结合的嵌合抗原受体(car)，其中所述car包含与gpc3结合的单链fv(scfv)、跨膜结构域和一个或多个胞内信号传导结构域，
2.如权利要求所述的car，其中：
3.如权利要求1或权利要求2所述的car，其中所述scfv的所述vh和所述vl由肽接头分开，
4.一种工程化核酸，所述工程化核酸编码如权利要求1至3中任一项所述的car。
5.一种表达载体，所述表达载体包含如权利要求4所述的工程化核酸。
6.一种分离的细胞，所述分离的细胞包含如权利要求1至3中任一项所述的car、如权利要求4所述的工程化核酸或如权利要求5所述的表达载体。
7.一种工程化细胞群，所述工程化细胞群表达如权利要求1至3中任一项所述的car、如权利要求4所述的工程化核酸或如权利要求5所述的表达载体。
8.如权利要求6或权利要求7所述的细胞或细胞群，其中所述car是重组表达的，任选地其中所述car从载体或来自所述细胞的基因组的选定基因座表达。
9.如权利要求6至8中任一项所述的细胞或细胞群，其中所述细胞或细胞群进一步表达一种或多种免疫调节效应物，
10.如权利要求6至9中任一项所述的细胞或细胞群，其中所述一种或多种免疫调节效应物的表达：(a)由激活条件控制多肽(acp)控制，或(b)由一个或多个表达表达盒表达，其中所述一个或多个表达盒各自包含acp反应性启动子和编码一种或多种免疫调节效应物的外源多核苷酸序列，其中所述acp反应性启动子可操作地连接至所述外源多核苷酸，任选地其中所述acp能够通过与所述acp反应性启动子结合来诱导所述一个或多个表达盒的表达，
11.如权利要求6至10中任一项所述的细胞或细胞...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·G·阿亚拉，
申请(专利权)人：森蒂生物科学公司，
类型：发明
国别省市：
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