【技术实现步骤摘要】
技术介绍
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技术介绍
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1、亮脑啡肽(leu-enkephalin)是一种内源性啡肽，由五个氨基酸组成，序列为h-酪氨酸-甘氨酸-甘氨酸-苯胺酸-亮氨酸(tyr-gly-gly-phe-leu-oh)。它属于内啡肽家族，主要存在于人体或多种动物中枢神经系统中，特别是在前脑区域。亮脑啡肽具有镇痛和镇静的作用，通过与μ-和δ-阿片受体结合来产生药理效应。它是一种天然的镇痛剂，参与调节疼痛传递和情绪反应。人类前脑啡肽的合成和释放受到多种因素的调控，包括神经递质、压力和疼痛刺激等。它在神经系统中的存在对于疼痛调节和情绪稳定起着重要作用。研究表明，亮脑啡肽与镇痛药物和药物滥用有关，其调节功能对于理解疼痛机制和药物滥用行为具有重要意义。
2、9-芴基甲氧基羰基保护基(fmoc)多肽固相合成方法在多肽合成的快速、高效、可控方面具有优势。它被广泛应用于药物研发、生物医学研究和生物工程等领域。通过合理的设计和优化反应条件，可以实现高产率、高纯度的多肽合成，并为合成复杂肽类化合物和药物提供了可行的路线。fmoc多肽固相合成方法具有操作简便、反应条件温和、合成效率高等优点，成为目前化学合成多肽最为常用的方法。fmoc脱保护不仅要求脱保护剂具有适当的碱性，使得临近fmoc芴环系的9-h被除去，也需要对随之生成的二苯并富烯副产物9-亚甲基芴(dbf)进行清除，同时要维持温和的脱保护环境以保证多肽的侧链保护基安全。常规fmoc脱保护使用20-50％体积百分比的高浓度哌啶溶液，导致合成中部分对碱敏感保护基的应用受到一定妨碍。需要注
3、通常地，胺类化合物的碱性/亲核性越强，往往其毒性也越强。四氢异喹啉(tiq)作为一种天然生物碱，广泛存在于人体的体液和/或组织(包括大脑)中，是一种低毒的仲胺。tiq受到自身苯环部分的空间限制，其分子总体接近平面，不会像哌啶一样出现椅型构象，因此氮原子可以更容易的和dbf进行加合，高效地清除脱保护副产物。不过，由于其碱性较弱，单独使用tiq进行脱除fmoc保护基团被证明是低效率的。1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]癸-5-烯(tbd)是一种桥环胍基强碱，即使在低浓度的情况下，其强碱性依然足以快速将fmoc基团脱保护，但其清除dbf的能力较弱。tbd与其他大部分强有机碱相比，具有毒性低、无挥发无恶臭和性质稳定等优点。本专利技术以tbd搭配tiq，结合两种组分的各自优势，扬长避短，可大幅提升脱除fmoc保护基团与清除9-亚甲基芴(dbf)效果，以提供多肽合成中替代哌啶，规避易制毒管控的风险。
技术实现思路
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技术实现思路
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1、本专利技术的目的在于提供一种fmoc法固相合成亮脑啡肽的方法。
2、本专利技术所采取的技术方案是：
3、一种fmoc法固相合成亮脑啡肽的方法，该方法的特征在于：方法采用的fmoc脱保护剂是tbd与tiq混合溶液。
4、进一步的，tbd的结构为
5、进一步的，tiq的结构为
6、进一步的，上述tbd与tiq混合溶液的溶剂为n,n-二甲基甲酰胺(dmf)。
7、进一步的，上述tbd与tiq混合溶液中tbd与tiq的摩尔浓度分别为0.2mol/l和2.0mol/l。
8、进一步的，该方法中第一个氨基酸酪氨酸使用fmoc-tyr-oh作为原料，无需侧链保护基。
9、进一步的，该方法包括如下基本步骤：在多肽固相合成的脱保护步骤中，向载有fmoc保护的氨基酸或多肽的树脂添加含0.2mol/l tbd和2.0mol/l tiq的dmf溶液，在室温下震荡15分钟后过滤，得到脱去fmoc保护基的载有氨基酸或多肽的树脂。
10、所述的采用tbd与tiq混合溶液的fmoc脱保护过程可能是：
11、
12、，r为任意除n端胺基以外的树脂加载多肽部分，生成的为n-二苯并富烯-四氢异喹啉加合物(dbf-tiq)。
13、与传统应用哌啶脱保护剂的方法相比，本专利技术所述的一种固相合成亮脑啡肽的方法的创新与优势在于：
14、1.tbd和tiq比哌啶的理化性质更稳定，低毒低挥发，使用更安全，且价格低廉；tbd和tiq不属于易制毒易制爆化学品，不受《危险化学品安全管理条例》、《易制毒化学品管理条例》管制，科研机构和企业均能在购买和使用过程中轻易获得。
15、2.tbd只需要传统哌啶等有机碱用量的十分之一摩尔浓度，即可完成fmoc脱保护，其低浓度对整个脱保护体系的稳定性几乎没有影响。
16、3.tiq有效弥补tbd的清除dbf能力短板，脱保护过程中优先生成带有紫外发色团的dbf-tiq，无其他加合物生成，保证了紫外检测吸光度与浓度的优良线性，提升了脱保护检测方法的可靠性。
17、4.本专利技术以tbd与tiq混合溶液实现无任何侧链保护基的亮脑啡肽固相合成，且未发现传统哌啶法造成的酪氨酸侧链酰化等可能的副产物生成。使用本专利技术的新方法得到的亮脑啡肽粗产品的纯度高，大幅降低了后续纯化的成本和难度，体现了本方法在固相合成亮脑啡肽中的优越性，对其他多肽的生产制备也具有很大的参考意义。
18、5.本专利技术提出的亮脑啡肽合成方法与常规fmoc合成法的操作步骤和工艺流程并无明显差异，无须对现有操作人员进行额外培训，对现有设备也没有额外更新要求。
19、说明附图
20、图1.以tbd和tiq混合的dmf溶液脱保护fmoc-丙氨酸(fmoc-l-ala)的fmoc标准曲线图。
21、图2.实施例2(应用哌啶作为脱保护剂组分的亮脑啡肽固相合成(tyr侧链无保护基))，3(应用哌啶作为脱保护剂组分的亮脑啡肽固相合成(tyr侧链带保护基))、实施例4(应用tbd和tiq混合溶液作为脱保护剂组分的亮脑啡肽固相合成(tyr侧链无保护基))的多肽产物hplc对比图。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种多肽固相合成中Fmoc脱保护的方法，其特征在于：所述的一种多肽固相合成中Fmoc脱保护的方法包括如下基本步骤：在亮脑啡肽固相合成的脱保护步骤中，将向载有Fmoc保护的氨基酸或多肽的树脂添加含0.2mol/L 1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]癸-5-烯和2.0mol/L四氢异喹啉的DMF溶液，在室温下震荡15分钟后过滤，得到脱去Fmoc保护基的载有氨基酸或多肽的树脂。
【技术特征摘要】
1.一种多肽固相合成中fmoc脱保护的方法，其特征在于：所述的一种多肽固相合成中fmoc脱保护的方法包括如下基本步骤：在亮脑啡肽固相合成的脱保护步骤中，将向载有fmoc保护的氨基酸或多肽的树...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈铭，杨刚强，赵洁雯，于宗炜，孙圣庭，吴洪震，甘甜甜，马建业，赵文叶，胡嘉烨，
申请(专利权)人：烟台大学，
类型：发明
国别省市：
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