【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医学组织切片，尤其是涉及一种肺部组织的冰冻包埋方法。
技术介绍
1、时空组学作为前沿的测序技术，能为研究者提供时间及空间两个维度的信息，具有亚细胞级精度和厘米级大视场，可以实现同一样本在组织、细胞、亚细胞、分子“四尺度”同时进行空间转录组分析。将冷冻包埋组织进行切片和rna质量评估，再将oct组织切片贴到时空芯片上进行透化及转录组测序，从而还原解析器官中的细胞类型以及空间定位、追溯个体发育轨迹、精细疾病分型、推演物种进化过程。
2、肺是人体最重要的呼吸器，承担着呼吸调节功能、免疫功能、造血功能等多种重要功能。在动物实验研究和组织学教学中，肺脏切片是了解肺的形态结构最直接的方法。正常的肺脏分为肺实质和肺间质两部分，其中肺实质指的是肺内支气管的各级分支及其终端的大量肺泡，肺脏独特且重要的生理功能依赖于肺实质结构中的海绵状空腔结构。肺脏解剖离体时，内部肺泡会残留大量气体，直接包埋处理的肺组织切片时容易出现大量气孔，内部结构崩溃和皱缩，难以满足时空组学分析的要求，因此在肺组织包埋前需要对离体肺脏进行特殊处理。
3、肺脏的传统包埋多以石蜡包埋为主，但石蜡包埋固定时间长、包埋温度较高容易造成抗原和基因信息损失。oct包埋(冰冻包埋)所使用的oct不与影响抗原性的蛋白质和其他分子相互作用，适用于更多的组学实验研究。目前oct包埋对肺脏预处理方法是采用气管灌注法，使用气管插管方式往肺脏内部灌注50％ oct包埋剂，置换出肺泡中的气体。但仅通过灌注手段无法完全且快速排出肺实质支气管末端的空气，容易在切片时造成
4、有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种肺部组织的冰冻包埋方法，以解决上述问题中的至少一种。
2、为了实现以上目的，提出以下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供了一种肺部组织的冰冻包埋方法，包括以下步骤：
4、向肺部组织注射体积浓度为20％-50％的oct包埋剂，然后将肺部组织浸没于相同浓度的oct包埋剂中进行抽真空处理，之后将肺部组织浸没于纯oct包埋剂中进行冰冻包埋，获得冰冻包埋肺部组织；
5、所述抽真空处理的程序为：在10-30hpa真空度下，真空抽气30-50s，放气10-30s，抽气放气循环。
6、作为进一步技术方案，所述体积浓度为20％-50％的oct包埋剂为将oct包埋剂采用无核酸酶水稀释得到。
7、作为进一步技术方案，向肺部组织注射的oct包埋剂的体积浓度为20％。
8、作为进一步技术方案，向肺部组织注射oct包埋剂的量为0.8-1.2ml/0.2g肺。
9、作为进一步技术方案，向肺部组织注射oct包埋剂的速度为1-2ml/min。
10、作为进一步技术方案，向肺部组织注射oct包埋剂的方法包括：将与肺部组织连通的气管结扎，然后从结扎处向肺部组织注射oct包埋剂。
11、作为进一步技术方案，所述抽真空处理的程序为：在20hpa真空度下，真空抽气40s，放气20s，抽气放气循环。
12、作为进一步技术方案，所述抽真空处理的时间为7-10min。
13、作为进一步技术方案，所述肺部组织包括小鼠肺部组织。
14、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
15、本专利技术提供的肺部组织的冰冻包埋方法，通过抽真空处理模拟肺脏呼吸过程，使得肺脏内部空气顺压力排至肺外，在此过程中，oct进入肺脏内部空间填充，快速稳定膨胀肺脏内部组织结构，保持胸膜完整性和肺泡充盈舒张。该冰冻包埋方法简单方便，获得的冰冻包埋肺部组织结构清晰，边缘胸膜大体完整，基本能够满足时空转录组学的实验要求。
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1.一种肺部组织的冰冻包埋方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的肺部组织的冰冻包埋方法，其特征在于，所述体积浓度为20％-50％的OCT包埋剂为将OCT包埋剂采用无核酸酶水稀释得到。
3.根据权利要求1所述的肺部组织的冰冻包埋方法，其特征在于，向肺部组织注射的OCT包埋剂的体积浓度为20％。
4.根据权利要求1所述的肺部组织的冰冻包埋方法，其特征在于，向肺部组织注射OCT包埋剂的量为0.8-1.2mL/0.2g肺。
5.根据权利要求1所述的肺部组织的冰冻包埋方法，其特征在于，向肺部组织注射OCT包埋剂的速度为1-2mL/min。
6.根据权利要求1所述的肺部组织的冰冻包埋方法，其特征在于，向肺部组织注射OCT包埋剂的方法包括：将与肺部组织连通的气管结扎，然后从结扎处向肺部组织注射OCT包埋剂。
7.根据权利要求1所述的肺部组织的冰冻包埋方法，其特征在于，所述抽真空处理的程序为：在20hPa真空度下，真空抽气40s，放气20s，抽气放气循环。
8.根据权利要求1所述的肺部组织的冰
9.根据权利要求1所述的肺部组织的冰冻包埋方法，其特征在于，所述肺部组织包括小鼠肺部组织。
...【技术特征摘要】
1.一种肺部组织的冰冻包埋方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的肺部组织的冰冻包埋方法，其特征在于，所述体积浓度为20％-50％的oct包埋剂为将oct包埋剂采用无核酸酶水稀释得到。
3.根据权利要求1所述的肺部组织的冰冻包埋方法，其特征在于，向肺部组织注射的oct包埋剂的体积浓度为20％。
4.根据权利要求1所述的肺部组织的冰冻包埋方法，其特征在于，向肺部组织注射oct包埋剂的量为0.8-1.2ml/0.2g肺。
5.根据权利要求1所述的肺部组织的冰冻包埋方法，其特征在于，向肺部组织注射oct包埋剂的速度...
【专利技术属性】
技术研发人员：林国盛，韩丽娟，康弼伦，陈强根，张乐，王志翔，张羽薇，
申请(专利权)人：康美华大基因技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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