【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程，具体涉及稳定子、融合蛋白、表达载体、表达系统、及其应用。
技术介绍
1、随着基因工程技术的发展，重组蛋白的表达量已经有了较大提高，但重组蛋白通常在培养中完全或部分降解，导致蛋白质的不稳定性，是重组蛋白技术行业是一个常见而严重的问题，亟需解决。大多数蛋白质的降解，包括重组单克隆抗体和融合蛋白，其原因可能归因于宿主细胞衍生的蛋白酶，控制蛋白水解的最常见策略是宿主细胞系进行改造，通过使它们成为蛋白酶阴性或细胞内蛋白酶表达的突变体，不能进行翻译后修饰和分泌，很少能避免蛋白酶降解的影响，并且所有宿主蛋白酶都存在缺陷，不能从根本上解决，因为它会造成其他有害影响。其他一些使用的方法是基因工程在转染目的基因中突变已知蛋白酶位点，分析分泌的蛋白酶并特异性抑制，如进行培养基优化、降低培养温度等。
2、中国仓鼠卵巢(chinese hamster ovary，cho)细胞因能扩增外源基因并整合到宿主染色体中，即使在没有持续药物选择的情况下也能维持多种蛋白高水平表达；且具有类似人源化翻译后修饰；既能贴壁生长，也能高密度悬浮生长的特性，以及不易受人类病毒的侵染，成为目前生产重组治疗蛋白的主要宿主。其中70％以上批准上市的重组蛋白药物是cho细胞生产的。cho细胞生产的重组蛋白的不稳定性严重影响其表达量和质量，然而，目前还没有关于cho细胞重组蛋白稳定性的简便有效的干预策略。
技术实现思路
1、为了解决现有技术存在的问题，本专利技术的目的之一在于提供一种稳定子，作为目的蛋白
2、本专利技术的目的之二在于提供一种融合蛋白，其c末端融合本专利技术提供的稳定子，稳定性高。
3、本专利技术的目的之三在于提供一种融合蛋白表达载体，包括本专利技术提供的稳定子结构，提高目的蛋白表达水平。
4、本专利技术的目的之四在于提供一种融合蛋白表达系统，采用本专利技术提供的表达载体构建而成，能够高效表达目的蛋白。
5、本专利技术的目的之五在于提供本专利技术稳定子在提高目的蛋白稳定性方面的应用。
6、为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：
7、稳定子，其氨基酸序列包含seq id no:2或seq id no:3所示序列。
8、可选的，稳定子的氨基酸序列还可以选自如seq id no:1或seq id no:4或seq idno:5所示。
9、本专利技术提供的稳定子用于提高目的蛋白稳定性，其具体方法包括：
10、1)将稳定子编码序列融合至目的蛋白c末端，终止密码子前，构建目的蛋白表达载体；可选的，稳定子编码序列为基于稳定子的氨基酸序列设计的密码子优化后的编码序列；
11、2)将目的蛋白表达载体转染至宿主细胞，筛选获得稳定表达细胞株。
12、将筛选的稳定表达细胞株培养制备高稳定性目的蛋白。
13、一种融合蛋白，由目的蛋白c末端融合稳定子构建而成；所述稳定子为上述稳定子。
14、一种表达载体，包括上述融合蛋白表达盒。
15、上述融合蛋白表达盒通过在目的蛋白c末端编码序列与终止密码子前插入稳定子编码序列构建而成。
16、一种表达系统，通过将上述表达载体转染至宿主细胞构建而成。
17、作为优选的，上述宿主细胞选自cho-k1、cho-s、cho-dg44中的任意一种。
18、上述表达系统的应用，用于制备包含目的蛋白制剂；所述制剂选自蛋白检测试剂、治疗或预防疾病的目的蛋白药物、带有目的蛋白的基因药物。
19、本专利技术的有益效果：
20、本专利技术提供的稳定子，具有特定的氨基酸序列结构，通过融合在目的蛋白c末端的方式与目的蛋白融合表达，一方面能够实现目的蛋白稳定表达水平，另一方面能够提高目的蛋白稳定性，使得目的蛋白能够抵抗蛋白酶水解。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.稳定子，其特征在于，其氨基酸序列包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示序列。
2.如权利要求1所述稳定子，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示。
3.如权利要求1或2所述稳定子的应用，其特征在于，用于提高目的蛋白稳定性。
4.如权利要求3所述应用，其特征在于，提高目的蛋白稳定性的具体方法包括：
5.一种融合蛋白，其特征在于，由目的蛋白C末端融合稳定子构建而成；所述稳定子为如权利要求1或2所示稳定子。
6.一种表达载体，其特征在于，包括如权利要求5所述的融合蛋白表达盒。
7.如权利要求5所述的表达载体，其特征在于，所述融合蛋白表达盒通过在目的蛋白C末端编码序列与终止密码子前插入稳定子编码序列构建而成。
8.一种表达系统，其特征在于，通过将如权利要求6或7所述的表达载体转染至宿主细胞构建而成。
9.如权利要求8所述的表达系统，其特征在于，所述宿主细胞选自CHO-K1、CHO-S、CHO-DG44中的任意一种
10.如权利要求8或9所述的表达系统的应用，其特征在于，用于制备包含目的蛋白制剂；
...【技术特征摘要】
1.稳定子，其特征在于，其氨基酸序列包含seq id no:2或seq id no:3所示序列。
2.如权利要求1所述稳定子，其特征在于，其氨基酸序列如seq id no:1或seq id no:4或seq id no:5所示。
3.如权利要求1或2所述稳定子的应用，其特征在于，用于提高目的蛋白稳定性。
4.如权利要求3所述应用，其特征在于，提高目的蛋白稳定性的具体方法包括：
5.一种融合蛋白，其特征在于，由目的蛋白c末端融合稳定子构建而成；所述稳定子为如权利要求1或2所示稳定子。
【专利技术属性】
技术研发人员：樊振林，王天云，赵亚茹，张俊河，林艳，米春柳，耿少雷，孙秋丽，王小引，张玺，
申请(专利权)人：新乡医学院，
类型：发明
国别省市：
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