【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及水蛭肽，更具体地说是一种具有抗糖尿病活性的水蛭肽及其用途。
技术介绍
1、糖尿病是一种受遗传因素和环境因素影响的重大慢性疾病，易导致心血管疾病、肾病、失明、等严重并发症，严重影响患者的生活质量和寿命。目前，尽管医学对糖尿病的发病机制有了较为深入的研究，但在治疗方面仍未有突破性的进展。因此，寻找糖尿病的有效防治策略具有重要意义。
2、糖尿病的主要特征是血糖的异常升高，其主要分为i型糖尿病(胰岛素依赖型糖尿病或iddm)和ii型糖尿病(非胰岛素依赖型糖尿病或niddm)。i型糖尿病个体的高血糖症包括胰岛素水平的缺乏、降低或不存在，致使不足以维持生理范围的血糖水平。饮食治疗和口服降血糖药物是无效的，施用胰岛素是唯一的治疗方法。ii型糖尿病个体的高血糖症由于胰岛素的抵抗状态，导致胰岛素水平下降，个体无法维持代谢稳态，但ii型糖尿病不总是需要施用胰岛素，通常可以通过食物疗法和运动疗法来改善，并可以采用口服降血糖药来加强治疗。
3、目前，改善高血糖状态的已知药物制剂包括胰岛素制剂、磺酰脲制剂、双胍制剂、胰岛素抵抗改良剂、α-葡萄糖苷酶抑制剂等。胰岛素制剂是胰岛素依赖型糖尿病的治疗剂。虽然胰岛素制剂可靠地降低血糖值，但有引起低血糖症的风险。磺酰脲制剂是通过经刺激胰腺β-细胞增强内源性胰岛素分泌来降低血糖值的药物。不论血糖值如何，磺酰脲制剂都可引起由胰岛素分泌引起的低血糖症副作用。双胍制剂是通过抑制肝脏中的糖原异生、增大骨骼肌等中的糖消耗、并抑制肠内的糖吸收来降低血糖值的药物。双胍制剂的优点是在正常受验者或
4、目前，已发现许多天然的抗糖尿病有效成分，譬如：姜黄素、芍药苷、三七皂苷等。然而生物活性多肽治疗糖尿病方面的研究较少。基于水蛭在糖尿病方面的治疗作用及仿生酶解工艺的应用。我们发现，来源于水蛭的活性肽lrvapeehpvl和syvgdeaqsk具有抑制血糖值升高和增强胰岛素分泌的作用。针对以上发现，本专利技术提供一种水蛭肽在制备治疗或减轻糖尿病药物中的应用，揭示了水蛭肽对糖尿病的改善作用，可望为以后的糖尿病及其并发症的治疗提供新的理论依据及新的药物治疗靶点，并为动物类中药多肽类成分的研究提供了参考。
技术实现思路
1、为了克服现有技术的上述缺陷，本专利技术提供一种具有抗糖尿病活性的水蛭肽及其用途，首次合成了的lrvapeehpvl和syvgdeaqsk两个水蛭肽，纯度高，安全有效，消除了服用异蛋白等引起的免疫原反应，减小了不良反应发生率，并且检测了合成多肽对糖尿病大鼠的抑制活性，合成多肽对糖尿病具有潜在的保护作用，为研究开发一种新型的抗糖尿病及其并发症治疗药物提供参考。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种具有抗糖尿病活性的水蛭肽，由lrvapeehpvl和/或syvgdeaqsk组成。
3、本专利技术的抗糖尿病的多肽在确保表现出血糖值升高抑制作用或胰岛素分泌增强作用的条件下，可以完全由该ll-11和/或sk-10肽组成，也可与药学上可接受的载体和/或添加剂在一起进行制备。
4、lrvapeehpvl结构式如下：
5、
6、命名为：ll-11，序列为leu-arg-val-ala-pro-glu-glu-his-pro-val-leu，即亮氨酸-精氨酸-缬氨酸-丙氨酸-脯氨酸-谷氨酸-谷氨酸-组氨酸-脯氨酸-缬氨酸-亮氨酸，分子量1258.70da，纯度为95.3％，等电点为5.23，疏水指数为16.66kcal·mol-1，水溶性较好。
7、syvgdeaqsk结构式如下：
8、
9、命名为：sk-10，序列为：ser-tyr-val-gly-asp-glu-ala-gln-ser-lys，即丝氨酸-酪氨酸-缬氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-谷氨酸-丙氨酸-谷氨酰胺-丝氨酸-赖氨酸，分子量1082.49da，纯度为96.0％，等电点为4.00，疏水指数为20.14kcal·mol-1，水溶性较好。
10、上述具有抗糖尿病活性的水蛭肽的制备方法如下：
11、步骤一、树脂处理：选择fmoc-leu-wang树脂(摩尔取代系数为0.6mmol/g)为起始树脂，置于3l反应柱中，加入二氯甲烷(dcm)浸泡，抽干，完成树脂的溶胀；然后加入20％哌啶的dmf溶液，通氮气搅拌30min，滤干溶剂，再用n,n-二甲基甲酰胺(dmf)循环洗涤树脂6次，抽滤，完成树脂的脱保护。
12、步骤二、氨基酸偶联反应：称取相应量的o-苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲四氟硼酸(tbtu)和保护氨基酸于烧杯中，加入dmf溶解；然后将反应液加入到树脂中，再加入n,n-二异丙基乙胺(diea)，通入氮气鼓吹90min，通过茚三酮反应进行检测；
13、反应结束后移除溶剂，用dmf洗涤树脂3次，再向树脂中加入20％哌啶的dmf溶液，通入氮气继续鼓吹30min，然后移除溶剂，再用dmf洗涤树脂6次，即完成本次氨基酸的偶联；
14、重复上述反应程序，直至完成所有保护氨基酸的缩合反应，偶联至最后一个氨基酸，最后一步接荧光素，抽干装入离心管中，加入fitc、hatu、diea、dmf和dcm，放入摇床震荡8-12h，避光，离心，离心完成后对多肽进行收缩，使用dmf/dcm/meoh依次清洗3遍，抽干后称取重。
15、步骤三、三氟乙酸裂解：将树脂加入事先配好的裂解液(86％tfa/5％edt/5％苯甲硫醚/3％苯酚/2％纯水)中，搅拌150min，然后将树脂和裂解液抽离，加入乙醚使多肽充分析出，抽滤，并用乙醚充分洗涤6次，得固相合成十一肽lrvapeehpvl和固相合成十肽syvgdeaqsk。
16、除了上述化学合成法之外，本专利技术的多肽还可以通过包含上面氨基酸序列的多肽或蛋白质的酶促降解或水解制造。
17、本专利技术所述的具有抗糖尿病活性的水蛭肽在制备抗糖尿病及其并发症治疗药物中的用途；
18、包含本专利技术水蛭肽的抗糖尿病及其并发症治疗药物可以制成多种剂型，如：注射剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂等；
19、本专利技术所说的糖尿病包含其并发症，指随着糖尿病直接或间接发生的全身和局部疾病，具体为糖尿病肝损伤、糖尿病性肾病、糖尿病性心肌病、糖尿病性肌萎缩、糖尿病性视网膜病、糖尿病性神经病变、糖尿病性抑郁症、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种具有抗糖尿病活性的水蛭肽，其特征在于：由LRVAPEEHPVL和/或SYVGDEAQSK组成。
2.根据权利要求1所述的一种具有抗糖尿病活性的水蛭肽，其特征在于：LRVAPEEHPVL结构式如下：
3.根据权利要求1所述的一种具有抗糖尿病活性的水蛭肽，其特征在于：SYVGDEAQSK结构式如下：
4.权利要求1-3任一项所述的具有抗糖尿病活性的水蛭肽在制备抗糖尿病及其并发症治疗药物中的用途。
【技术特征摘要】
1.一种具有抗糖尿病活性的水蛭肽，其特征在于：由lrvapeehpvl和/或syvgdeaqsk组成。
2.根据权利要求1所述的一种具有抗糖尿病活性的水蛭肽，其特征在于：lrvapeehpvl结构式如下：
【专利技术属性】
技术研发人员：李亚男，代龙，王少平，柏道鸣，赵红金，
申请(专利权)人：滨州医学院，
类型：发明
国别省市：
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