【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种制备静注人免疫球蛋白的优化方法，属于生物制药领域。
技术介绍
1、静注人免疫球蛋白是目前世界上最为广泛使用的血液制剂。用于原发性或继发性免疫缺陷的替换治疗，以及与自身免疫性相关的一系列疾病的治疗。静注人免疫球蛋白产品的生产方法已经经历了大半个世纪的发展，生产企业多在传统的cohn或者kistler-nitschmann方法的基础上，进行不断的优化改良，演变出目前生产静注人免疫球蛋白产品的主流工艺。以目前美国fda批准的静注人免疫球蛋白产品为例，共有baxter,csl等7家公司生产的10个剂型的产品。其生产工艺均首先通过低温乙醇沉淀获得组分ii或组分ii+iii，再进行下游纯化。不同厂家采用的下游处理工艺区别相对较大。如csl公司的静注人免疫球蛋白产品flebogamma采用的是多次peg沉淀的方法；baxter公司的gammagard采用两步离子交换层析的方法；而biotest公司的intratect则是采用辛酸盐处理加离子交换树脂处理的方法生产静注人免疫球蛋白。
2、国内静注人免疫球蛋白均采用低温乙醇法进行生产，各厂家生产工艺大同小异，均存在iga、igm残留量高，fc段活性偏低，分子大小分布不理想等问题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种静注人免疫球蛋白现有低温乙醇法的改良方案，克服现有技术中存在的缺陷，旨在解决现有工艺iga、igm残留量高，fc段活性低，分子大小分布不理想等问题。
2、本专利技术的技术方案采用增加组分ⅰ
3、在本申请中，除非另有说明，否则％表示wt％，即质量百分比或重量百分比。混合物与混合液具有相同的含义。
4、因此，根据本专利技术的第一个实施方案，提供一种制备静注人免疫球蛋白的方法，该方法包括以下步骤：
5、1)乙醇一次分离组分ⅰ+ⅲ：
6、将cohn法获得的组分ⅰ+ⅱ+ⅲ或组分ⅱ+ⅲ进行沉淀；用7～20倍(优选8～18倍、优选9～16倍、更优选10～15倍)沉淀量的温度1-10℃(优选4～7℃、更优选5～6℃)的浓度0.05-0.02m(优选0.07-0.015m、更优选0.08-0.012m，例如0.01m)磷酸二氢钠溶液溶解沉淀；用hac缓冲液(优选，其浓度为1-3m，优选1.5-2.5m，优选1.8-2.2m，如2m)调节所得混合物的ph值为4.5～5.5(优选4.7～5.3，更优选4.9～5.1)，然后让混合物在乙醇浓度9-11％(优选9-10.5％，更优选9-10％，例如9％、9.5％或10％)，ph值4.5～5.5(优选4.7～5.3，更优选4.9～5.1)，温度-1.5～-3.5℃(优选-2～-3℃)，蛋白浓度1.2～2.8％(优选1.4～2.6％，更优选1.5～2.5％)，离子强度(即，电导率)为0.015-0.021ms/cm(优选0.016-0.020，更优选0.017-0.019，如0.018ms/cm)的条件下进行反应，反应结束后进行压滤，收集压滤液；
7、优选，按2±1g硅藻土/kg反应液加入助滤剂，平衡液中加硅藻土循环铺板，然后进行压滤，进液压力≤0.3mpa，即，压力0.25mpa；收集压滤液，得过滤液；优选，所述平衡液(含有乙醇和磷酸氢二钠)的配方：乙醇浓度10％，磷酸氢二钠浓度0.005m，用2m hac缓冲液调ph值4.9～5.1，温度-2～-3℃；
8、2)乙醇二次分离组分ⅰ+ⅲ：
9、将步骤1)所收集的压滤液用碳酸氢钠缓冲液(例如浓度0.5-2m，浓度优选为0.8-1.5m，如1m)调节ph值为4.8～5.4(优选5.0～5.2)，然后让混合物在乙醇浓度14-16％(14.5-15.5％，如15％)，ph值4.8～5.4(优选5.0～5.2)，温度-2～-8℃(优选-3～-7℃，优选-4～-6℃)，蛋白浓度0.3～2％(优选0.4～1.7％、更优选0.5～1.5％)，离子强度为0.011-0.017ms/cm(优选0.012-0.016，更优选0.013-0.015，如0.014ms/cm)的条件下进行反应，反应结束后压滤，收集压滤液；
10、优选，按3±1g硅藻土/kg反应液加入助滤剂，平衡液中加硅藻土循环铺板，然后进行压滤，进液压力≤0.3mpa，即，压力0.25mpa；收集压滤液，得过滤液；优选，所述平衡液(含有乙醇、氯化钠和磷酸氢二钠)的配方：乙醇浓度15％，氯化钠浓度0.005m，磷酸氢二钠浓度0.005m，用2mhac调ph值为5.0～5.2，液温-4～-6℃；
11、3)乙醇分离组分ⅱ：
12、将步骤2)收集的压滤液，用碳酸氢钠缓冲液(例如浓度0.5-2m，浓度优选为0.8-1.5m，如1m)调节ph值为6.5～7.3(优选6.6～7.2、更优选6.7～7.1)，然后让混合物在乙醇浓度为19-21％(优选19.5-20.5％，如20％)，ph值6.5～7.3(优选6.6～7.2、更优选6.7～7.1)，温度-3～-8℃(优选-4～-7℃，优选-5～-6℃)，蛋白浓度0.1～0.8％(优选0.15～0.7％、更优选0.2～0.6％)，离子强度为0.06-0.012ms/cm(优选0.07-0.011，更优选0.08-0.1，如0.09ms/cm)的条件下进行反应，反应结束后进行压滤，收集沉淀物，获得组分ⅱ沉淀；
13、优选；平衡液中加硅藻土循环铺板，然后进行压滤，进液压力≤0.3mpa，即，压力0.25mpa；收集组分ⅱ沉淀，得组分ⅱ沉淀；优选，所述平衡液(含有乙醇、氯化钠和磷酸氢二钠)的配方：乙醇浓度20％，氯化钠浓度0.1m，磷酸氢二钠浓度0.005m，用2m浓度hac调节ph值为6.7～7.1，控制液温-5～-6℃；
14、4)deae sepharose fast flow离子交换层析：
15、将步骤3)所得的组分ⅱ沉淀用4～8倍沉淀量的温度1～15℃(优选3～13℃、优选4～12℃、更优选5～10℃)的注射用水溶解，澄清过滤，所得滤液用hac缓冲液(例如浓度0.5-2m，浓度优选为0.8-1.5m，如1m)调节ph值为5.7～6.3(5.8～6.2、优选5.9～6.1)，用氯化钠调节其离子强度(即，电导率)为1.0～1.8ms/cm(优选1.1～1.7ms/cm、更优选1.2～1.6ms/cm)，调整蛋白浓度为1.5～3.5％(g/ml)，优选为1.8～3.2％(g/ml)，更优选为2～3％(g/ml)；
16、优选，用平衡液平衡凝胶至ph值5.9～6.1，电导率1.2～1.6ms/cm；
17、优选，将上述调本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种制备静注人免疫球蛋白的方法，该方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于将下列步骤进行优化：
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中:
4.一种制备静注人免疫球蛋白的方法，所述制备方法包括如下步骤：
5.一种制备静注人免疫球蛋白的方法，该方法包括如下步骤：
【技术特征摘要】
1.一种制备静注人免疫球蛋白的方法，该方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于将下列步骤进行优化：
3.根据权利要求1或2...
【专利技术属性】
技术研发人员：张天堂，资道凤，蒋海石，赵伟，李科，
申请(专利权)人：南岳生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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