【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及食品安全和生物，具体涉及一株新型产气荚膜梭菌噬菌体lpcpa58及其应用，特别是在控制食品加工和动物饲养中的产气荚膜梭菌污染的应用。本专利技术筛选的产气荚膜梭菌噬菌体lpcpa58经比对，与现有的噬菌体全基因组序列的同源性小于66％，为一种新型的噬菌体。
技术介绍
1、产气荚膜梭菌(clostridium perfringens)是一种厌氧的革兰氏阳性菌，广泛存在于土壤、污水、人和动物肠道及粪便中。该菌可产细菌毒素，是引起人类食物中毒、气性坏疽、坏死性肠炎和菌血症的重要病原之一。根据六种毒素的差异，产气荚膜梭菌可分为a-g七种毒素型。根据食物中毒的病因调查分析，引起人类食物中毒的产气荚膜梭菌主要为a型和c型。通常，a型菌株引起的食物中毒症状主要包括腹部绞痛、腹泻、恶心、呕吐和发烧，而c型菌株则导致更为严重的病症(如梭菌坏死性肠炎)，其致死率极高，主要发生于新生儿等缺乏胰蛋白酶的患者。因此产气荚膜梭菌的防控至关重要。目前，产气荚膜梭菌耐药现象严重，鸡源、猪源和羊源产气荚膜梭菌的耐药率分别达到66％，82％和100％，且对红霉素、林可霉素、新霉素、四环素和环丙沙星具有极高的耐药率。随着减抗、限抗条例的颁布，迫切需要一种新型的防控方式。噬菌体是能特异性感染细菌、真菌、藻类、放线菌或螺旋体等微生物的病毒，在自然界中普遍存在，具有特异性强、剂量性小、绿色安全、研发周期短等优势。目前产气荚膜梭菌噬菌体相关研究较少，通过ncbi的pubmed数据库仅检索到202条与产气荚膜梭菌噬菌体相关数据，该噬菌体难以筛选导致研究样本少，因此
技术实现思路
1、本发现的目的在于，提供了一种新型产气荚膜梭菌噬菌体(clostridiumperfringens phage)，所述噬菌体的保藏编号为：cctcc no：m20231110。
2、本专利技术的另一个目的在于，控制食品链前端的食品动物养殖环节以及动物源食品的污染，有效抑制产气荚膜梭菌的交叉污染。
3、为了达到上述目的，本专利技术采取以下技术措施：
4、申请人从湖北省筛选出一株可裂解a型和c型的产气荚膜梭菌的噬菌体，该噬菌体已于2023年06月27日保藏在中国典型培养物保藏中心(简称cctcc)，地址：中国武汉武汉大学；保藏编号：cctcc no：m20231110，分类命名：产气荚膜梭菌噬菌体(clostridiumperfringens phage)lpcpa58。
5、本专利技术中的产气荚膜梭菌噬菌体lpcpa58具有以下生物学特征：
6、噬菌体lpcpa58可裂解a型、c型产气荚膜梭菌，裂解能力强，裂解率达96.67％，在moi＝100时，在12h内可以对14株菌(共29株)起到完全抑制的作用。lpcpa58在moi＝0.01、0.1、1、10、100条件下可以完全抑制lcp33、lcp46两株菌。
7、噬菌体lpcpa58显示较宽的酸碱耐受范围和温度范围，当ph＝3-11的范围内孵育2h，噬菌体的效价基本趋于稳定，当ph＝12时，效价下降约2log10pfu/ml。当t＝30℃-50℃条件下1h内效价基本趋于稳定，当t＝60℃-70℃时，效价下降约2log10pfu/ml，当t＝80℃时，效价下降约4log10pfu/ml。较宽的酸碱耐受性和温度耐受性表明lpcpa58有应用于养殖端食品动物肠道和加工端动物源产品的潜力。
8、噬菌体lpcpa58的基因组全长为49,058bp，噬菌体lpcpa58与已公布的clostridium phagevb_cpes-1181的比对结果为覆盖度64.00％，相似度89.82％，与clostridium phagevb_cpes_bg3p的比对结果为覆盖度66.00％，相似度95.91％，与clostridium phage phicp-b的比对结果为覆盖度11.00％，相似度94.00％，与其他的已公布的噬菌体核酸序列无相似性。说明该噬菌体是一株新型的产气荚膜梭菌噬菌体。
9、含有产气荚膜梭菌噬菌体lpcpa58的微生物制剂也为本专利技术的保护范围。
10、本专利技术保护内容还包括：产气荚膜梭菌噬菌体lpcpa58制备产气荚膜梭菌抑菌剂中的应用；
11、产气荚膜梭菌噬菌体lpcpa58在非治疗为目的抑制产气荚膜梭菌中的应用。
12、产气荚膜梭菌噬菌体lpcpa58在制备治疗或预防产气荚膜梭菌感染中的应用。
13、产气荚膜梭菌噬菌体lpcpa58在防止食品产气荚膜梭菌污染中的应用；
14、以上所述的应用中，优选的噬菌体抑菌应用效价为104pfu/ml-1011pfu/ml，更优选的应用效价106pfu/ml-109pfu/ml。
15、与现有技术相比，本专利技术具有以下优点和有益效果：
16、1)本专利技术的噬菌体lpcpa58，与现有的噬菌体全基因组序列的同源性小于66％，为一种新型的噬菌体。
17、2)本专利技术的产气荚膜梭菌噬菌体lpcpa58至少可裂解a型，和/或c型产气荚膜梭菌，裂解能力强，裂解率达96.67％(29/30)。
18、3)本专利技术的产气荚膜梭菌噬菌体lpcpa58在moi＝100时，在12h内可以对14株菌(共29株)起到完全抑制的作用。lpcpa58在moi＝0.01、0.1、1、10、100条件下可以完全抑制lcp33、lcp46两株产气荚膜梭菌。
19、4)产气荚膜梭菌噬菌体lpcpa58显示较宽的酸碱耐受范围，当ph＝3-11的范围内孵育2h后，噬菌体的效价基本趋于稳定，当ph＝12时，效价下降约2log10pfu/ml。
20、5)产气荚膜梭菌噬菌体lpcpa58具有较好的温度耐受性，在30℃-50℃条件下1h内效价基本趋于稳定，当t＝60℃、70℃时，效价下降约2log10pfu/ml。
21、本专利技术提供的新型产气荚膜梭菌噬菌体lpcpa58丰富了噬菌体库，具有广谱抑菌效果，且同时具有抑制和杀死产气荚膜梭菌的能力，ph和温度的耐受性广，可显著提高患坏死性肠炎雏鸡的存活率，有应用于养殖端食品动物肠道和加工端动物源产品的潜力。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1. 一株新型产气荚膜梭菌噬菌体（Clostridium perfringens phage）LPCPA58，所述产气荚膜梭菌噬菌体LPCPA58的保藏编号为：CCTCC NO: M20231110。
2.一种微生物制剂，所述的微生物制剂包括权利要求1所述的产气荚膜梭菌噬菌体LPCPA58。
3. 权利要求1所述的产气荚膜梭菌噬菌体LPCPA58制备产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）抑菌剂中的应用。
4.权利要求1所述的产气荚膜梭菌噬菌体LPCPA58在非治疗为目的抑制产气荚膜梭菌中的应用。
5.权利要求1所述的产气荚膜梭菌噬菌体LPCPA58在制备治疗或预防产气荚膜梭菌感染中的应用。
6.权利要求1所述的产气荚膜梭菌噬菌体LPCPA58在防止食品的产气荚膜梭菌污染中的应用。
【技术特征摘要】
1. 一株新型产气荚膜梭菌噬菌体（clostridium perfringens phage）lpcpa58，所述产气荚膜梭菌噬菌体lpcpa58的保藏编号为：cctcc no: m20231110。
2.一种微生物制剂，所述的微生物制剂包括权利要求1所述的产气荚膜梭菌噬菌体lpcpa58。
3. 权利要求1所述的产气荚膜梭菌噬菌体lpcpa58制备产气荚膜梭...
【专利技术属性】
技术研发人员：李锦铨，邹更，吴仁蔚，金美君，宋智勇，王文静，赵雯琦，郭海祥，张腾飞，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：
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