【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物基因工程领域，具体涉及一种柑橘株高调控基因citbbx及其应用。
技术介绍
1、柑橘是我国重要的经济果树之一，其产业在我国国民经济发展及农村经济产业结构调整中具有重要作用。为守住粮食耕地红线，果树栽培面积受到制约，将威胁农民经济利益，影响我国居民膳食平衡的需要。利用分子生物学手段进行柑橘品种的培育和改良，有望培育矮化柑橘品种，提升栽培密度，且利于机械化栽培，达到增加单位面积柑橘产量和提升经济效益的目的。
2、株高是影响株型、产量和生物量的重要因素，其中节间是株高重要的构成部分。调控植物株高的因素主要有内源激素信号以及外源光照温度等环境信号。其中植物内源激素赤霉素(ga)是影响株高的关键激素，其合成和代谢基因的表达水平高低决定了活性ga的含量高低。模式植物和作物中已有较多关于转录水平调控ga通路基因的报道。如hy5是植株的胚轴伸长和发育的关键基因，其可以整合激素信号和环境信号协同调控植株生长。
3、目前有关柑橘中环境信号和ga信号如何调控柑橘植株生长发育的分子机理尚不清楚，如何利用这些信号服务于实际生产过程和产业发展也尚未有较好的实践成效报道。一方面，柑橘作为多年生果树作物，其遗传转化具有一定难度，因此前人研究多从转录水平筛选候选的株高调控基因，和下游基因仅建立了共表达关系，较少有研究报道了候选基因的具体调控功能和作用分子机理。另一方面，虽然柑橘具有丰富的株高和节间变异的资源，但有关系统地整合和利用这些丰富资源筛选柑橘株高调控基因尚未报道。一方面，从分子育种层面，通过促进负调控株高基因的表
4、为提升粮食作物耕地面积，提倡果林业上山上坡，制约了果实业栽植面积，从而影响农村经济产业结构调整，影响农村经济发展和农民利益。因此亟待利用丰富的柑橘资源，利用效果明确，效果好，且可操作性强的调控株高的候选基因，培育矮化密植柑橘，提高单位面积果实产量，促进经济发展和保护农民利益。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种柑橘株高调控基因citbbx及其应用，本专利技术鉴于柑橘的株高和节间性状存在很大差异，对多个不同柑橘资源的节间进行了测定，鉴定到了短节间的柑橘资源。并应用转录组学筛选鉴定到了调控节间伸长和株高发育的候选基因citbbx，该候选基因citbbx为两个基因，分别为citbbx19和citbbx19，它们为柑橘矮化分子设计育种提供基因资源和关键靶点。
2、为实现上述目的，本专利技术所设计的技术方案：
3、本专利技术提供了一种柑橘株高调控基因citbbx，所述调控基因citbbx为citbbx19或citbbx22，其中，citbbx19的核苷酸序列如seq id no.1所示；citbbx22的核苷酸序列如seqid no.2所示。
4、本专利技术还提供了一种上述的柑橘株高调控基因citbbx编码的蛋白citbbx，所述蛋白citbbx为蛋白citbbx19或蛋白citbbx22，其中，所述蛋白citbbx19的氨基酸序列为seqid no.3所示；所述蛋白citbbx22的氨基酸序列为seq id no.4所示。
5、专利技术还提供了一种获得上述柑橘株高调控基因citbbx的引物对，所述调控基因citbbx为citbbx19时，获得citbbx19的引物对citbbx19f/r为：
6、citbbx19引物f：5’-atgcgaacgctttgcgac-3’，
7、citbbx19引物r：5’-tcaattttcaggctctcttttgaa-3’；
8、或，所述调控基因citbbx为citbbx22时，获得citbbx22的引物对citbbx22f/r为：
9、citbbx22引物f：5’-atgaggatacagtgcaacgtatgc-3’，citbbx22引物r：5’-ttactgcaaccgccttcttg-3’。
10、本专利技术还提供了一种柑橘citbbx过表达载体，所述柑橘citbbx过表达载体为pk7wg2d-citbbx19时，所述柑橘citbbx过表达载体含有上述citbbx19基因；
11、或，所述柑橘citbbx过表达载体为pk7wg2d-citbbx22时，所述柑橘citbbx过表达载体含有上述citbbx22基因。
12、本专利技术还提供了一种柑橘citbbx编辑载体，所述柑橘citbbx编辑载体为pcambia1300-pyao::cas9:citbbx19时，所述柑橘citbbx编辑载体为含有上述citbbx19基因编辑靶点的载体，
13、或，所述柑橘citbbx编辑载体为pcambia1300-pyao::cas9:citbbx22时，
14、所述柑橘citbbx编辑载体为含有上述citbbx22基因编辑靶点的载体。
15、本专利技术还提供了一种重组宿主细胞，所述重组宿主细胞为含有上述的柑橘citbbx过表达载体或上述的柑橘citbbx编辑载体，其中，所述宿主细胞为大肠杆菌dh5α。
16、本专利技术还提供了一种上述柑橘株高调控基因citbbx在柑橘矮化育种中的应用。
17、本专利技术还提供了一种上述柑橘株高调控基因citbbx19或柑橘株高调控基因citbbx22互作在柑橘矮化育种中的应用。
18、下述各项之一在柑橘矮化育种中的应用，其中，
19、(1)上述的柑橘株高调控基因citbbx；
20、(2)上述的柑橘citbbx过表达载体；
21、(3)上述的柑橘citbbx编辑载体；
22、(4)上述的重组宿主细胞。
23、本专利技术的有益效果：
24、本专利技术验证了柑橘株高调控基因citbbx19和citbbx22基因在柑橘植株节间伸长和株高生长发育中的功能，为通过分子育种方式进行柑橘矮化品种培育提供了有价值的基因资源。
25、本专利技术将柑橘株高调控基因citbbx19导入柑橘，转基因植株的株高得到了显著增加，而在柑橘中编辑citbbx19，转基因植株的株高显著降低。将柑橘株高调控基因citbbx22导入柑橘，转基因植株的株高显著降低，而在柑橘中编辑citbbx22，转基因植株的株高显著增加。表明citbbx19和citbbx22基因可用于柑橘矮化育种。
26、本专利技术公开了柑橘株高调控转录因子citbbx19和citbbx22基因在柑橘矮化育种中的运用。本专利技术发现相对于正常长度节间的酸橙材料，citbbx19在短节间酸橙的顶芽中低表达，而citbbx22在短节间酸橙的胚轴中高表达。在柑橘模式材料早花柑橘山金柑中超表达citbbx19促植株生长发育，株高增加，而编辑citbbx19植株生长发育异常，株高显著本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种柑橘株高调控基因CitBBX，其特征在于：所述调控基因CitBBX为CitBBX19或CitBBX22，其中，CitBBX19的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；CitBBX22的核苷酸序列如SEQID No.2所示。
2.一种权利要求1所述的柑橘株高调控基因CitBBX编码的蛋白CitBBX，其特征在于：所述蛋白CitBBX为蛋白CitBBX19或蛋白CitBBX22，其中，所述蛋白CitBBX19的氨基酸序列为SEQ ID No.3所示；所述蛋白CitBBX22的氨基酸序列为SEQ ID No.4所示。
3.一种获得权利要求1所述柑橘株高调控基因CitBBX的引物对，其特征在于：所述调控基因CitBBX为CitBBX19时，获得CitBBX19的引物对CitBBX19F/R为：
4.一种柑橘CitBBX过表达载体，其特征在于：所述柑橘CitBBX过表达载体为pK7WG2D-CitBBX19时，所述柑橘CitBBX过表达载体含有权利要求1所述CitBBX19基因；
5.一种柑橘CitBBX编辑载体，其特征在于：所述柑
6.一种重组宿主细胞，其特征在于：所述重组宿主细胞为含有权利要求4所述的柑橘CitBBX过表达载体或权利要求5所述的柑橘CitBBX编辑载体，其中，所述宿主细胞为大肠杆菌DH5α。
7.一种权利要求1所述柑橘株高调控基因CitBBX在柑橘矮化育种中的应用。
8.一种权利要求1所述的柑橘株高调控基因CitBBX19或柑橘株高调控基因CitBBX22在柑橘矮化育种中的应用。
9.下述各项之一在培育矮化柑橘新品种中的应用，其特征在于：
...【技术特征摘要】
1.一种柑橘株高调控基因citbbx，其特征在于：所述调控基因citbbx为citbbx19或citbbx22，其中，citbbx19的核苷酸序列如seq id no.1所示；citbbx22的核苷酸序列如seqid no.2所示。
2.一种权利要求1所述的柑橘株高调控基因citbbx编码的蛋白citbbx，其特征在于：所述蛋白citbbx为蛋白citbbx19或蛋白citbbx22，其中，所述蛋白citbbx19的氨基酸序列为seq id no.3所示；所述蛋白citbbx22的氨基酸序列为seq id no.4所示。
3.一种获得权利要求1所述柑橘株高调控基因citbbx的引物对，其特征在于：所述调控基因citbbx为citbbx19时，获得citbbx19的引物对citbbx19f/r为：
4.一种柑橘citbbx过表达载体，其特征在于：所述柑橘citbbx过表达载体为pk...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐强，付佳玲，廖理，王霞，孙娟，路志浩，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：
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