【技术实现步骤摘要】
本公开涉及基因工程，尤其是涉及真菌来源启动子元件p22及其应用。
技术介绍
1、启动子是决定转录起始位置并控制基因表达强度的一类生物元件，是基因表达系统的核心之一。通过启动子的强弱来实现对不同基因表达的控制是一种常用的生物调控手段。由不同强度的启动子组成的启动子库能够很好地满足不同基因表达强度的需求。
2、酵母（yeast）是蛋白表达宿主的良好选择。酵母细胞发酵简单、生长快速、发酵培养基便宜，易于遗传操作，具有蛋白翻译后修饰系统，蛋白可分泌表达，纯化工艺简单。其中，毕赤酵母（pichiapastoris，下文简称pp），乳酸克鲁维酵母（kluyveromyceslactis，下文简称kl）克鲁维毕赤酵母(pichiakluyveri)和马克斯克鲁维酵母(kluyveromycesmarxianus，下文简称km)已成为有利的宿主细胞。其中km是同宗配合的半子囊菌酵母，位于酵母科克鲁维属。km通常在酸奶，马乳酒，奶酪，牛奶，以及甘蔗叶子中出现。km是一种被普遍认可的食品级的酵母。它已经通过了fda的gras认证，欧盟的qps认证，还被中国卫计委批准为新食品原料。由于其安全性高，km在生产食用、饲用和药用蛋白领域具有得天独厚的优势。但是，对于表达外源蛋白，无论pp、kl还是km目前均缺乏高效的表达元件和配套的表达载体，限制了酵母表达系统的发展。
技术实现思路
1、本公开的目的在于，提供一种来源于真菌的具有强启动子活性的启动子元件，利用该启动子元件构建外源蛋白表达盒，并导入酵
2、在本公开的第一方面，提供一种真菌来源启动子元件，所述启动子元件含有与seqid no：1所示核苷酸序列具有80%以上同一性的核苷酸序列，所述同一性比例包括但不限于80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。
3、在本公开的第二方面，提供一种转录表达盒，所述转录表达盒包括本公开第一方面所述的启动子元件，以及与所述启动子元件可操作地连接的编码基因。
4、在本公开的第三方面，提供一种重组表达载体，所述重组表达载体包括本公开第一方面所述的启动子元件，或本公开的第二方面所述的转录表达盒。
5、在本公开的第四方面，提供一种重组细胞，所述重组细胞含有本公开第一方面所述的启动子元件，或本公开的第二方面所述的转录表达盒，或在本公开的第三方面所述的重组表达载体。
6、在可选的实施方式中，所述重组细胞的宿主细胞为酵母细胞，选自马克斯克鲁维酵母（kluyveromycesmarxianus）、乳酸克鲁维酵母（kluyveromyceslactis）、克鲁维毕赤酵母(pichiakluyveri)或毕赤酵母（pichiapastoris）。
7、在本公开的第五方面，提供本公开第一方面所述启动子元件、第二方面所述转录表达盒、第三方面所受重组表达载体、第四方面所述重组细胞中的至少一项在（a）和/或（b）中的应用：
8、（a）增强编码基因转录水平，或者，制备用于增强编码基因转录水平的试剂或试剂盒；
9、（b）制备外源蛋白，或者，制备用于制备外源蛋白的试剂或试剂盒。
10、在可选的实施方式中，所述外源蛋白包括乳蛋白，包括β-乳球蛋白、α-乳白蛋白、酪蛋白、乳铁蛋白或骨桥蛋白中的至少一种。
11、在本公开的第六方面，提供一种增强编码外源蛋白基因转录的方法，所述方法包括将本公开第一方面所述启动子元件与外源蛋白的编码基因可操作地连接，而后导入宿主细胞中。
12、在可选的实施方式中，所述外源蛋白包括β-乳球蛋白、α-乳白蛋白、酪蛋白、乳铁蛋白或骨桥蛋白中的至少一种。
13、在可选的实施方式中，所述宿主细胞选自马克斯克鲁维酵母（kluyveromycesmarxianus）、乳酸克鲁维酵母（kluyveromyceslactis）、克鲁维毕赤酵母(pichiakluyveri)或毕赤酵母（pichiapastoris）。
14、在本公开的第七方面，提供一种乳蛋白生产方法，包括培养本公开第四方面所述重组细胞，并分离收集发酵液中的乳蛋白；其中重组细胞中含有与乳蛋白编码基因可操作地连接的本公开第一方面所述的启动子元件。
15、在可选的实施方式中，所述乳蛋白包括β-乳球蛋白、α-乳白蛋白、酪蛋白、乳铁蛋白或骨桥蛋白中的至少一种。
16、本公开取得的有益效果为：
17、本公开以获得适于工业扩大发酵培养的启动子元件为目的，对比不同发酵条件下酵母菌转录组基因表达的差异性，筛选出更易于推广的发酵条件下，表达量显著升高的基因，并确定该基因的启动子元件，而后考察使用筛选到的启动子元件进行外源蛋白表达，与现有高产启动子元件对比表达量，并从中选取外源蛋白表达显著增高的启动子元件，最终证明，本公开得到的含有核苷酸序列seq id no：1的启动子元件，取得了更高外源蛋白的表达量，特别是在km表达系统中，对于绿色荧光蛋白和β-乳球蛋白的表达量明显高于使用菊粉酶启动子的表达量。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.真菌来源启动子元件，其特征在于，所述启动子元件的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。
2.转录表达盒，其特征在于，所述转录表达盒包括权利要求1所述的启动子元件，以及与所述启动子元件可操作地连接的编码基因。
3.重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包括权利要求1所述的启动子元件，或权利要求2所述的转录表达盒。
4.重组细胞，其特征在于，所述重组细胞含有权利要求1所述的启动子元件，或权利要求2所述的转录表达盒，或权利要求3所述的重组表达载体；所述重组细胞的原始细胞选自马克斯克鲁维酵母Kluyveromycesmarxianus、乳酸克鲁维酵母Kluyveromyceslactis、克鲁维毕赤酵母Pichiakluyveri或毕赤酵母Pichiapastoris。
5.权利要求1所述启动子元件、权利要求2所述转录表达盒、权利要求3所受重组表达载体、权利要求4所述重组细胞中的至少一项在（a）和/或（b）中的应用：
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述外源蛋白包括乳蛋白。
7.根据权利要求6所述
8.增强编码外源蛋白基因转录的方法，其特征在于，所述方法包括将权利要求1所述启动子元件与外源蛋白的编码基因可操作地连接，而后导入宿主细胞中。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述外源蛋白包括β-乳球蛋白、α-乳白蛋白、酪蛋白、乳铁蛋白或骨桥蛋白中的至少一种。
10. 根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述宿主细胞选自马克斯克鲁维酵母Kluyveromycesmarxianus、乳酸克鲁维酵母Kluyveromyceslactis、克鲁维毕赤酵母Pichiakluyveri或毕赤酵母Pichia pastoris。
11.乳蛋白生产方法，其特征在于，所述方法包括，培养权利要求4所述重组细胞，并分离收集发酵液中的乳蛋白；其中重组细胞中含有与乳蛋白编码基因可操作地连接的权利要求1所述的启动子元件。
12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述乳蛋白包括β-乳球蛋白、α-乳白蛋白、酪蛋白、乳铁蛋白或骨桥蛋白中的至少一种。
...【技术特征摘要】
1.真菌来源启动子元件，其特征在于，所述启动子元件的核苷酸序列如seq id no：1所示。
2.转录表达盒，其特征在于，所述转录表达盒包括权利要求1所述的启动子元件，以及与所述启动子元件可操作地连接的编码基因。
3.重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包括权利要求1所述的启动子元件，或权利要求2所述的转录表达盒。
4.重组细胞，其特征在于，所述重组细胞含有权利要求1所述的启动子元件，或权利要求2所述的转录表达盒，或权利要求3所述的重组表达载体；所述重组细胞的原始细胞选自马克斯克鲁维酵母kluyveromycesmarxianus、乳酸克鲁维酵母kluyveromyceslactis、克鲁维毕赤酵母pichiakluyveri或毕赤酵母pichiapastoris。
5.权利要求1所述启动子元件、权利要求2所述转录表达盒、权利要求3所受重组表达载体、权利要求4所述重组细胞中的至少一项在（a）和/或（b）中的应用：
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述外源蛋白包括乳蛋白。
7.根据权利要求6所述的应用，...
【专利技术属性】
技术研发人员：骆滨，芦隐月，许昱，王松伟，王正博，张猛，杨秀华，葛凯，
申请(专利权)人：上海昌进生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。