一种甜味蛋白的制备方法技术

本发明专利技术创造涉及生物技术领域，具体地说，涉及一种甜味蛋白的制备方法。本发明专利技术中，发明专利技术人首次尝试将β‑乳球蛋白作为引导蛋白应用于甜味蛋白表达系统的构建，依赖表达系统能够高产β‑乳球蛋白的特性，同时实现甜味蛋白的高产。同时提供了β‑乳球蛋白作为引导蛋白与甜味蛋白组成的融合蛋白，以及利用该融合蛋白进行甜味蛋白生产的方法。经验证，本发明专利技术成功制备了具有天然氨基酸序列的表现甜度活性的甜味蛋白，其产量在10g/L以上，从而在保证安全性的前提下，实现了具有甜度活性的甜味蛋白的高产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术创造涉及生物，具体地说，涉及一种甜味蛋白的制备方法。

技术介绍

1、甜味蛋白是食品添加剂中常用的一种蛋白类甜味剂，与糖类甜味剂相比，其具有甜度高和热量低的特点，能够预防龋齿且安全性已经得到广泛认可，其经胃蛋白酶消化后成为必需氨基酸，还具有一定的营养价值。迄今为止，已报道的甜味蛋白有6种，包括索马甜（thaumatin），马宾灵（mabinlin）、库克灵（curculin）、巴西甜蛋白/布拉齐因（brazzein）、莫乃灵（monellin）、神秘果素/奇果蛋白（miraculin），基本特征如下：

2、表1 不同甜味蛋白特征对比

3、

4、由于提取植物原产地的区域限制，以及提取成本过高，传统的以植物为原料提取制备甜味蛋白的方法无法得到推广应用，生产规模严重受限。在早期甜味蛋白生产中，人们尝试通过转基因作为来提高甜味蛋白的产量，及扩大生产经营范围，已报道的转基因作物包括马铃薯、黄瓜、番茄、梨和草莓等。但是利用转基因作物进行甜味蛋白生产，其年产量与转基因作物品种有关，同时还受到植物生长情况的影响，面临着严峻的气候本文档来自技高网...

【技术保护点】

1. β-乳球蛋白作为引导蛋白在甜味蛋白表达系统构建中的应用；所述β-乳球蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No:1所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述表达系统的原始菌株包括马克斯克鲁维酵母、乳酸克鲁维酵母或毕赤酵母。

3. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述表达系统的原始菌株选自以下任一保藏编号的马克斯克鲁维酵母菌株：CCTCC No:M20211265、CCTCC No:M20211601、CCTCCNo:M20211602、CCTCC No:M20211603、CCTCC No:M20211604、CCTCC No:M20211605...

【技术特征摘要】

1. β-乳球蛋白作为引导蛋白在甜味蛋白表达系统构建中的应用；所述β-乳球蛋白的氨基酸序列如seq id no:1所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述表达系统的原始菌株包括马克斯克鲁维酵母、乳酸克鲁维酵母或毕赤酵母。

3. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述表达系统的原始菌株选自以下任一保藏编号的马克斯克鲁维酵母菌株：cctcc no:m20211265、cctcc no:m20211601、cctccno:m20211602、cctcc no:m20211603、cctcc no:m20211604、cctcc no:m20211605、cctccno:m20211606、cctcc no:m20211607、cctcc no:m20211608、cctcc no:m20211609或cctccno:m20211610。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述甜味蛋白为巴西甜蛋白。

5. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述巴西甜蛋白的氨基酸序列如seq idno:2所示。

6.融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括肠激酶酶切位点连接的β-乳球蛋白和甜味蛋白。

7.根据权利要求6所述的融合蛋白，其特征在于，所述甜味蛋白为巴西甜蛋白。

8. 根据权利要求7所述的融合蛋白，其特征在于，所述β-乳球蛋白的氨基酸序列如seqid no:1所示；所述巴西甜蛋白的氨基酸序列如seq id no:2所示；所述肠激酶酶切位点的氨基酸序列如seq...

【专利技术属性】
技术研发人员：骆滨，屠均亮，许昱，王松伟，苏世源，吴蓉，张改改，
申请(专利权)人：上海昌进生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：