蛋白酶表达缺陷克鲁维酵母菌、制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，尤其是涉及蛋白酶表达缺陷克鲁维酵母菌、制备方法及应用。本发明专利技术针对蛋白酶编码基因进行编辑获得了具有蛋白酶表达缺陷的改造克鲁维酵母菌。外源蛋白在克鲁维酵母菌中表达时，面临着克鲁维酵母菌内源蛋白酶的水解，本发明专利技术有目的地破坏克鲁维酵母菌内源蛋白酶编码基因的表达功能完整性，使其无法正常表达蛋白酶，或者表达的蛋白酶缺少关键活性肽段，或者表达的蛋白酶无法实现正常折叠重构，或者水解活性降低，从而丧失或降低对外源蛋白的水解作用。将改造后的克鲁维酵母菌用于构建外源蛋白的表达系统，能够提高外源蛋白的表达水平，制备高纯度的外源蛋白产物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，尤其是涉及蛋白酶表达缺陷克鲁维酵母菌、制备方法及应用。

技术介绍

1、克鲁维酵母(kluyveromyces)是gras食品级酵母，已在诸多生物
得到广泛应用，特别是作为真核表达系统用于生产外泌蛋白，目前克鲁维酵母在蛋白表达领域逐渐受到重视。

2、公知的，包括马克斯克鲁维酵母、乳酸克鲁维酵母在内的多种克鲁维酵母分离于乳制品中，菌体能够消化乳制品中多种蛋白作为氮源使用，因此，直接使用克鲁维酵母作为表达系统进行乳蛋白发酵，其产物中会含有大量乳蛋白分解形成的短链蛋白肽，这不仅会降低目标乳蛋白的产量，同时给乳蛋白的分离、提纯带来很大困难。因此，亟需开发一种缺乏乳蛋白降解能力的克鲁维酵母表达系统。

技术实现思路

1、本专利技术的目的在于，提供一种改造后的克鲁维酵母，使得该克鲁维酵母在发酵过程中，与乳蛋白降解相关的蛋白酶的表达功能受到破坏，无法正常表达具有乳蛋白降解活性的一种或多种蛋白酶，从而提高发酵产物中完整乳蛋白的含量及纯度。

2、本专利技术的另一个目的在于，提供上述本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.改造马克斯克鲁维酵母菌(Kluyveromyces)在构建β-乳球蛋白表达系统中的应用，其特征在于，所述改造马克斯克鲁维酵母菌的蛋白酶Prb1和Pep4无法完整或者准确表达，或者蛋白酶Prb1和Pep4表达量下降。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述马克斯克鲁维酵母菌包括以下任一保藏编号的马克斯克鲁维酵母菌：CCTCC No：M20211601、CCTCC No：M20211602、CCTCC No：M20211603、CCTCC No：M20211604、CCTCC No：M20211605、CCTCC No：M20211606、CCTCC No：M2021...

【技术特征摘要】

1.改造马克斯克鲁维酵母菌(kluyveromyces)在构建β-乳球蛋白表达系统中的应用，其特征在于，所述改造马克斯克鲁维酵母菌的蛋白酶prb1和pep4无法完整或者准确表达，或者蛋白酶prb1和pep4表达量下降。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述马克斯克鲁维酵母菌包括以下任一保藏编号的马克斯克鲁维酵母菌：cctcc no：m20211601、cctcc no：m20211602、cctcc no：m20211603、cctcc no：m20211604、cctcc no：m20211605、cctcc no：m20211606、cctcc no：m20211607、cctcc no：m20211608、cctcc no：m20211609、cctcc no：m20211610或cctcc no：m20211265。

【专利技术属性】
技术研发人员：骆滨，屠均亮，许昱，王松伟，王正博，张改改，葛凯，
申请(专利权)人：上海昌进生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：