【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程，具体地，本专利技术涉及一种重组猴痘病毒疫苗，及其在预防猴痘病毒感染中的应用。
技术介绍
1、猴痘病毒(monkeypox virus，mpxv)亦称猴天花，与天花病毒和牛痘病毒一样同属于正痘病毒，属于一种人畜共患病的病毒，其发源与非洲热带雨林，根据该病毒的毒力的不同以及危害程度不同，将其分为中非和西非两种病毒。猴痘病毒大小200-300nm，外周有30nm的外膜，内核为匀质的核心体，病毒可以独立复制。
2、一直以来，天花病毒和猴痘病毒被认为是两个最具有潜在生物恐怖威胁的病原。天花病毒由于全世界大规模的安全和廉价疫苗的应用，已经在70-80年代在全球被根除。猴痘病毒在人与人之间传播性差，致死率相对天花病毒较低，但是它的宿主群体广泛(啮齿动物)，导致存在被基因修饰为更高毒株的危险性，所以继天花病毒之后猴痘病毒也成为重要的痘病毒传染病。
3、猴痘是一种自限性疾病，主要症状通常包括发烧、剧烈头痛、肌肉酸痛、背痛、精力不足、淋巴结肿大和皮疹或皮肤损伤，其中淋巴腺症状是猴痘的一个显著特征。症状通常持续两到四周，大多数情况无需治疗即可自行消失。但对某些人，这些症状可能导致并发症或甚至死亡。新生儿、儿童和有免疫缺陷基础疾病的人可能面临更严重的症状和死于猴痘的风险。严重猴痘病例的并发症包括皮肤感染、肺炎、神志不清和可导致视力丧失的眼部感染。目前在流行国家报告的病例中约有3-6％导致死亡。
4、
5、
6、
7、痘病毒存在两种形式：成熟病毒粒子(matu
8、a35r是细胞内包膜病毒粒子(iev)和细胞外包膜病毒粒子(eev)的包膜成分，与脊索痘病毒a33r同源。痘苗病毒中的a33r在病毒粒子在细胞间的传播中起着至关重要的作用，是疫苗开发的重要靶点，也有研究表明a35r是猴痘病毒血清学检测的潜在靶点。
9、m1r与牛痘病毒l1蛋白同源，是一种在成熟imv颗粒表面发现的跨膜蛋白。由l1rorf编码，高度保守，参与病毒粒子组装，在病毒进入和成熟过程中发挥重要作用。l1是诱导低ph触发的细胞-细胞融合所必需的，且对牛痘病毒复制至关重要。
10、基于猴痘病毒目前的传播形势，本领域急需开发针对猴痘病毒的特异性疫苗，以应对未来可能发生的猴痘病毒疫情。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种猴痘病毒疫苗，该疫苗从猴痘病毒的两种传染性病毒粒子分别选择了一个蛋白作为抗原靶点，即细胞内病毒粒子的m1r蛋白和细胞外囊膜病毒的a35r蛋白。本专利技术提供了一种用于编码a35r的细胞外结构域与完整的m1r共价链接做成融合蛋白基因优化的核苷酸，所述核苷酸以e1、e3联合缺失的复制缺陷型人5型腺病毒为载体，以整合腺病毒基因e1基因的hek293细胞为包装细胞系，经包装获得的重组腺病毒载体形式的新型猴痘病毒疫苗。
2、本专利技术的第一方面，提供了一种a35r-m1r融合蛋白表达盒，所述表达盒包括以下元件：kozak序列、任选的信号肽编码序列、a35r的细胞外结构域编码序列和m1r全长蛋白编码序列；
3、其中，所述a35r的细胞外结构域的氨基酸序列如seq id no:1所示，或与seq idno:1所示的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性；所述m1r全长蛋白的氨基酸序列如seqid no:2所示，或与seq id no:2所示的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性。
4、在另一优选例中，所述表达盒从5’端至3’端具有式i所示的结构：
5、z1-z2-z3-z4-z5(式i)
6、其中，
7、各“-”独立地为键或核苷酸连接序列；
8、z1为kozak序列；
9、z2为任选的信号肽编码序列；
10、z3为a35r的细胞外结构域编码序列；
11、z4为连接肽(linker)的编码序列；
12、z5为m1r全长蛋白编码序列。
13、在另一优选例中，所述信号肽选自下组：组织型纤溶酶原激活因子(tpa)信号肽或其突变体。
14、在另一优选例中，所述信号肽的氨基酸序列如seq id no:6或7所示；
15、优选地，所述tpa信号肽的氨基酸序列如seq id no:7所示。
16、在另一优选例中，所述a35r的细胞外结构域编码序列为密码子优化的编码序列，其核苷酸序列如seq id no:3所示，或与其具有90％以上(优选地95％以上，更优选地96％以上、97％以上、98％以上或99％以上)序列同一性。
17、在另一优选例中，所述m1r全长蛋白编码序列为密码子优化的编码序列，其核苷酸序列如seq id no:4所示，与其具有90％以上(优选地95％以上，更优选地96％以上、97％以上、98％以上或99％以上)序列同一性。
18、在另一优选例中，所述连接肽的氨基酸序列如gggsggggsgg(seq id no:5)所示。
19、在另一优选例中，各个核苷酸连接序列的长度为0-30nt，较佳地1-15nt。
20、在另一优选例中，所述表达盒的核苷酸序列包括：(a)如seq id no:9或10所示的核苷酸序列、(b)与seq id no:9或10所示的核苷酸序列具有90％以上(优选地95％以上，更优选地96％以上、97％以上、98％以上或99％以上)序列同一性的核苷酸序列；和(c)与(a)或(b)所述的核苷酸序列互补的核苷酸序列。
21、在另一优选例中，所述核苷酸序列包括dna序列、cdna序列、或mrna序列。
22、在另一优选例中，所述核苷酸序列包括单链序列和双链序列。
23、本专利技术的第二方面，提供了一种载体，所述载体含有本专利技术第一方面所述的a35r-m1r融合蛋白表达盒。
24、在另一优选例中，所述载体包含一个或多个启动子，所述启动子可操作地与所述表达盒、增强子、转录终止信号、复制起点、选择性标记、核酸限制性位点、和/或同源重组位点连接。
25、在另一优选例中，所述载体包括质粒、病毒载体。
26、在另一优选例中，所述载体为质粒；优本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种A35R-M1R融合蛋白表达盒，其特征在于，所述表达盒包括以下元件：Kozak序列、任选的信号肽编码序列、A35R的细胞外结构域编码序列和M1R全长蛋白编码序列；
2.如权利要求1所述的表达盒，其特征在于，所述表达盒从5’端至3’端具有式I所示的结构：
3.如权利要求1所述的表达盒，其特征在于，所述信号肽选自下组：组织型纤溶酶原激活因子(tPA)信号肽或其突变体。
4.一种载体，其特征在于，所述载体含有权利要求1-3任一项所述的A35R-M1R融合蛋白表达盒。
5.如权利要求4所述的载体，其特征在于，所述载体为质粒；优选地，所述质粒为病毒包装系统质粒，用于产生病毒样颗粒。
6.如权利要求4所述的载体，其特征在于，所述载体为病毒载体，
7.一种宿主细胞，其含有如权利要求4所述的载体，或染色体中整合有如权利要求1-3任一项所述的A35R和M1R融合蛋白表达盒。
8.一种疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物包含：
9.如权利要求4所述的载体或如权利要求7所述的宿主细胞在制备用于预防
10.一种疫苗组合物的制备方法，包括步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种a35r-m1r融合蛋白表达盒，其特征在于，所述表达盒包括以下元件：kozak序列、任选的信号肽编码序列、a35r的细胞外结构域编码序列和m1r全长蛋白编码序列；
2.如权利要求1所述的表达盒，其特征在于，所述表达盒从5’端至3’端具有式i所示的结构：
3.如权利要求1所述的表达盒，其特征在于，所述信号肽选自下组：组织型纤溶酶原激活因子(tpa)信号肽或其突变体。
4.一种载体，其特征在于，所述载体含有权利要求1-3任一项所述的a35r-m1r融合蛋白表达盒。
5.如权利要求4所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：秦玉寅，琚姝，王爱霞，王蒙，程玲俐，赵毅，郭玉姗，刘鑫鑫，
申请(专利权)人：上海上药康希诺生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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