本发明专利技术涉及能够高效地检测胞外多糖的方法，尤其涉及包括下述步骤的胞外多糖的检测方法，所述步骤为：使包含胞外多糖(EPS)的试样与(i)能与上述胞外多糖特异性结合的凝集素及(ii)能与上述胞外多糖特异性结合的标记凝集素接触，利用上述标记凝集素的标记来检测与(i)的凝集素及(ii)的标记凝集素这两者发生了结合的胞外多糖。
1、已知以乳酸菌为代表的各种微生物产生胞外多糖(eps)并将其分泌到细胞外。通常，通过使用德氏乳杆菌保加利亚亚种(lactobacillus delbrueckii ssp.bulgaricus；也被称为保加利亚菌)和嗜热链球菌(streptococcus thermophilus；也被称为嗜热菌)将乳类发酵而制造的酸奶所代表的发酵乳中也包含胞外多糖。近年来，胞外多糖因具有免疫激活功能等各种生理活性功能而备受关注。
2、以往，在微生物的培养上清、发酵乳中的胞外多糖的测定中使用苯酚-硫酸法(例如非专利文献1)。但是苯酚硫酸法是对单糖、低聚糖(包含2～10个糖残基)、多糖等所有的糖进行检测，因此在定量胞外多糖时需要通过乙醇沉淀等操作完全除去试样中所含的单糖、二糖等胞外多糖以外的糖的前处理。因此，利用苯酚硫酸法测定胞外多糖的操作变得繁杂，测定需要长时间，并且容易由于人的手法而产生差异。需要能够高效测定胞外多糖的方法。
4、专利文献1公开了一种免疫测定方法，其通过使用特异性识别糖链的标记凝集素和抗体(配体)的夹心法测定生物试样中的具有糖链的化合物(肿瘤标志物等)的量，其中，为了降低源自生物试样中的糖脂等杂质所具有的糖链的背景噪声，在与标记凝集素的结合中，添加与杂质的糖链竞争的糖链化合物。但是，该方法难以将胞外多糖这种多糖与单糖、低聚糖等其它糖类区分检测。
>5、专利文献2公开了一种方法，其使用能够区分未分化细胞和分化细胞的未分化糖链标志物fucα1-2galβ1-3glcnac/galnac特异性凝集素rbc2lcn来判断干细胞的未分化状态。专利文献2记载了通过凝集素-凝集素夹心法来检测该未分化糖链标志物。但是，专利文献2的方法并未设想检测胞外多糖。6、现有技术文献
7、专利文献
8、专利文献1:国际公开wo 2014/103553号
9、专利文献2:国际公开wo 2013/065302号
10、非专利文献
11、非专利文献1:ziadi et al.,biomed research international,(2018)vol.2018,doi:10.1155/2018/1896240.
技术实现思路
1、专利技术要解决的问题
2、本专利技术的课题在于，提供能够高效地检测胞外多糖的方法。
3、用于解决问题的方案
4、本专利技术人们为了解决上述课题反复进行了深入研究，结果发现，使用与胞外多糖特异性结合的凝集素对胞外多糖进行夹心(夹持并结合)能够高效地检测胞外多糖，从而完成了本专利技术。
5、即，本专利技术包括以下方案。
6、[1]一种胞外多糖的检测方法，其包括下述步骤：使包含胞外多糖(eps)的试样与(i)能与上述胞外多糖特异性结合的凝集素及(ii)能与上述胞外多糖特异性结合的标记凝集素接触，利用上述标记凝集素的标记来检测与(i)的凝集素及(ii)的标记凝集素这两者发生了结合的胞外多糖。
7、[2]根据上述[1]所述的方法，其中，上述试样包含培养物或其级分(fraction)，所述培养物含有具有胞外多糖产生能力的微生物。
8、[3]根据上述[2]所述的方法，其中，上述微生物为乳酸菌或双歧杆菌。
9、[4]根据上述[1]～[3]中任一项所述的方法，其中，胞外多糖源自乳酸菌或双歧杆菌。
10、[5]根据上述[3]或[4]所述的方法，其中，乳酸菌为德氏乳杆菌保加利亚亚种oll1073r-1株(保藏号ferm bp-10741)。
11、[6]根据上述[1]～[5]中任一项所述的方法，其中，(ii)的标记凝集素包含与(i)的凝集素相同的凝集素。
12、[7]根据上述[1]～[6]中任一项所述的方法，其中，(i)的凝集素及(ii)的标记凝集素与上述胞外多糖中的糖特异性结合。
13、[8]根据上述[7]所述的方法，其中，上述糖为半乳糖或葡萄糖，或者上述糖包含半乳糖或葡萄糖。
14、[9]根据上述[1]～[8]中任一项所述的方法，其中，(i)的凝集素及(ii)的标记凝集素为rca120或伴刀豆球蛋白a。
15、[10]根据上述[1]～[9]中任一项所述的方法，其中，(i)的凝集素被固相化到固体载体上。
16、[11]根据上述[10]所述的方法，其包括在上述检测前清洗上述固体载体的步骤。
17、[12]根据上述[2]所述的方法，其中，上述培养物为发酵食品。
18、[13]根据上述[12]所述的方法，其中，发酵食品为发酵乳。
19、[14]根据上述[1]～[13]中任一项所述的方法，其为胞外多糖的定量检测方法，上述方法包括基于胞外多糖的上述检测的结果来确定试样中的胞外多糖的含量的步骤。
20、[15]一种发酵食品的制造方法，其包括下述步骤：使用上述[14]所述的方法定量胞外多糖并且在适合于增加胞外多糖的条件下进行发酵，使发酵食品中的胞外多糖的含量增加。
21、本说明书包括成为本申请的优先权基础的日本专利申请号2021-067952号及专利申请号2021-131848号的公开内容。
22、专利技术的效果
23、根据本专利技术，可以高效地检测胞外多糖。
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【技术保护点】
1.一种胞外多糖的检测方法，其包括下述步骤：使包含胞外多糖(EPS)的试样与(i)能与所述胞外多糖特异性结合的凝集素及(ii)能与所述胞外多糖特异性结合的标记凝集素接触，利用所述标记凝集素的标记来检测与(i)的凝集素及(ii)的标记凝集素这两者发生了结合的胞外多糖。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述试样包含培养物或其级分，所述培养物含有具有胞外多糖产生能力的微生物。
3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述微生物为乳酸菌或双歧杆菌。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，胞外多糖源自乳酸菌或双歧杆菌。
5.根据权利要求3或4所述的方法，其中，乳酸菌为德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1073R-1株(保藏号FERM BP-10741)。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其中，(ii)的标记凝集素包含与(i)的凝集素相同的凝集素。
7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，(i)的凝集素及(ii)的标记凝集素与所述胞外多糖中的糖特异性结合。
8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述糖为半乳糖或葡萄糖，或者所述糖包含半乳糖或葡萄糖。
9.根据权利要求1～8中任一项所述的方法，其中，(i)的凝集素及(ii)的标记凝集素为RCA120或伴刀豆球蛋白A。
10.根据权利要求1～9中任一项所述的方法，其中，(i)的凝集素被固相化到固体载体上。
11.根据权利要求10所述的方法，其包括在所述检测前清洗所述固体载体的步骤。
12.根据权利要求2所述的方法，其中，所述培养物为发酵食品。
13.根据权利要求12所述的方法，其中，发酵食品为发酵乳。
14.根据权利要求1～13中任一项所述的方法，其为胞外多糖的定量检测方法，所述方法包括基于胞外多糖的所述检测的结果来确定试样中的胞外多糖的含量的步骤。
15.一种发酵食品的制造方法，其包括下述步骤：使用权利要求14所述的方法定量胞外多糖并且在适合于增加胞外多糖的条件下进行发酵，使发酵食品中的胞外多糖的含量增加。
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【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种胞外多糖的检测方法，其包括下述步骤：使包含胞外多糖(eps)的试样与(i)能与所述胞外多糖特异性结合的凝集素及(ii)能与所述胞外多糖特异性结合的标记凝集素接触，利用所述标记凝集素的标记来检测与(i)的凝集素及(ii)的标记凝集素这两者发生了结合的胞外多糖。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述试样包含培养物或其级分，所述培养物含有具有胞外多糖产生能力的微生物。
3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述微生物为乳酸菌或双歧杆菌。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，胞外多糖源自乳酸菌或双歧杆菌。
5.根据权利要求3或4所述的方法，其中，乳酸菌为德氏乳杆菌保加利亚亚种oll1073r-1株(保藏号ferm bp-10741)。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其中，(ii)的标记凝集素包含与(i)的凝集素相同的凝集素。
7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，(i)的凝集素及(ii)的标记凝集素与所述胞外多...
【专利技术属性】
技术研发人员：大岛俊文，高林久美子，中山魁，中岛章裕，
申请(专利权)人：株式会社明治，
类型：发明
国别省市：
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