【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分析检测，特别涉及一种同时测定β-烟酰胺单核苷酸中α-异构体和其他有关物质的方法。
技术介绍
1、烟酰胺单核苷酸(nmn)，是维生素b3(烟酰胺)的衍生物，含α和β两种构型，研究表明仅β构型具有生物活性，是人体中主要能量物质、长寿蛋白辅因子nad+的前体。且随着人类年龄的增大，身体中nad+持续减少，导致人体中细胞功能下降，从而导致人体衰老，新陈代谢失调等。目前nmn在抗衰老领域取得广泛的关注，同时在医药治疗领域和化工合成方面具有广泛的应用前景。
2、
3、nmn制备方法，目前主流有化学合成和酶法，不管是化学合成方法还是酶法，均涉及到产生差向异构体α-异构体的问题，如何定量鉴定β-烟酰胺单核苷酸中α-异构体，对于β-烟酰胺单核苷酸的绝对活性成分含量表征很重要，目前公开α-异构体检测方法的资料很少。
4、专利cn115876932a公开了一种同时测定食品中烟酰胺单核苷酸α、β异构体的方法，但是其采用液相色谱质谱联用仪(lc-ms)，仪器昂贵，且需要对样品进行衍生化前处理，检验需要采用标准曲线方法，操作繁琐，并不适合企业常规检验。
5、专利cn113358776 b公布了一种同时检测nmn中多种有关物质的hplc方法，但是并不适合检测α-异构体。
6、目前迫切需要开发一种简单快速、能同时检测β-烟酰胺单核苷酸中差向异构体即α-异构体和其他有关物质的方法来更好地满足生产企业过程控制检测、产品检验以及和监管机构检验需求。
技术实现思路<
1、为了克服上述现有技术的缺点与不足，本专利技术的首要目的在于提供一种能够简便快速测定β-烟酰胺单核苷酸中α-异构体的检测方法，以便更好地表征生物活性成分：β-烟酰胺单核苷酸的绝对含量，另一方面，本专利技术的检验方法，也可以同时测定β-烟酰胺单核苷酸中其他多个有关物质(杂质)，如烟酰胺氧化物、三磷酸腺苷atp、二磷酸腺苷adp、单磷酸腺苷amp和烟酰胺，实现采用一个方法，同时检测α-异构体和多个有关物质的目的，成本低、效率高，极大地便利了生产企业日常检验以及监管机构监督检验需要，
2、本专利技术的目的通过下述方案实现：
3、一种同时测定β-烟酰胺单核苷酸α-异构体、多个有关物质含量的方法，采用ultimate amino acid色谱柱(4.6mm×250mm，5μm或效能相当的色谱柱)，按照hplc方法进行分离检测，包括以下步骤：
4、1.色谱分离条件：流动相a：0.01mol/l的磷酸二氢钾缓冲液溶液，调节ph值至6.0；流动相b：乙腈，流速：0.6ml/min；柱温：30℃；检测波长为260nm；进样体积10μl，按照下表进行梯度洗脱：
5、表1梯度洗脱
6、 时间(min) 流动相a(％) 流动b(％) 0 100 0 10 100 0 15 40 60 20 40 60 20.1 100 0 35 100 0
7、2.系统适用性溶液配制：精密称取β-烟酰胺单核苷酸α-异构体、烟酰胺氧化物、三磷酸腺苷atp、二磷酸腺苷adp、单磷酸腺苷amp、烟酰胺与β-烟酰胺单核苷酸对照品各适量，加水溶解并稀释制成每1ml约含α-异构体、烟酰胺氧化物、atp、adp、amp、烟酰胺各3.0μg与β-烟酰胺单核苷酸1.5mg的混合溶液。
8、进一步地，系统适用性溶液色谱图(见附图3)中，出峰顺序依次为α-异构体、β-烟酰胺单核苷酸、烟酰胺氧化物、atp、adp、amp与烟酰胺，其中α-异构体峰与β-烟酰胺单核苷酸峰之间的分离度应不小于2.0。
9、3.β-烟酰胺单核苷酸储备液：取β-烟酰胺单核苷酸对照品12mg，精密称定，置20ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为β-烟酰胺单核苷酸储备液，
10、4.杂质储备液：精密称取α-异构体、烟酰胺氧化物、atp、adp、amp与烟酰胺各约10mg，各置于20ml容量瓶中，加入一定纯化水，溶解、稀释至刻度，作为各杂质储备液。
11、5.对照品溶液：精密称取上述(3)和(4)各储备液约3ml，置于100ml容量瓶中，加入纯化水稀释至刻度，摇匀。
12、6.β-烟酰胺单核苷酸供试品溶液：精密称取β-烟酰胺单核苷酸样品适量约75mg，置于50ml容量瓶，加入纯化水溶解、稀释至刻度，加水溶解并稀释制成每1ml中约含1.5mg的溶液。
13、7.加标供试品溶液：精密称取烟酰胺单核苷酸约75mg，置于50ml容量瓶中，然后加入精密量取的上述(4)对照品溶液3ml，加入纯化水稀释至刻度。
14、8.测量记录：精密量取空白溶液，加标供试品溶液、对照品溶液、供试品溶液各10μl，注入hplc色谱仪，记录色谱图，按照外标法以峰面积计算。
15、本专利技术采用的hplc方法，经过方法学验证，线性良好、准确度高、精密度良好等，符合分析检测方法技术指南要求，满足日常检验需求。
16、本专利技术具有以下有益效果：
17、本专利技术提供一种简便的hplc方法，可以检测β-烟酰胺单核苷酸中α-异构体，较现有技术采用昂贵的lc-ms仪器、复杂的样品处理和检测程序，更加快速、高效、低成本，适合生产企业日常检验需求。
18、本专利技术提供一种简便的hplc方法，可以同时检测β-烟酰胺单核苷酸中α-异构体和其他多个有关物质含量，如烟酰胺氧化物、atp、adp、amp与烟酰胺，具有一个检测方法，多种杂质检测能力的优势，尤其适合生产中快速过程控制检测和成品检测的需求。
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1.一种同时测定β-烟酰胺单核苷酸中α-异构体和其他有关物质的方法，其特征在于，包括以下步骤：
【技术特征摘要】
1.一种同时测定β-烟酰胺单核苷酸中α-异构体和...
【专利技术属性】
技术研发人员：张兰平，许多，陈俊辰，王寅，
申请(专利权)人：江苏信佑生物有限公司，
类型：发明
国别省市：
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