一种修复HBA2基因突变的方法、组合物及其应用技术

本发明专利技术涉及基因编辑技术领域，特别是涉及一种修复HBA2基因突变的方法、组合物及其应用。本发明专利技术修复HBA2基因突变的方法，采用HDR编辑的方式，将核酸酶、gRNA和供体修复模板与待编辑修复的HBA2基因序列接触，使HBA2基因CD142密码子中的胞嘧啶碱基修复为胸腺嘧啶，gRNA的导向序列与Chr16:173596‑173624靶区域结合或反向互补，编辑效率高，能够达到治疗水平；并且，gRNA导向序列的靶区域为HBA2特异性靶位点，能够避免对HBA1进行切割；同时，修复的目的基因表达受天然的HBA2全部调控元件调控，具有较高的安全，也更能平衡α/β珠蛋白的表达。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因编辑，特别是涉及一种修复hba2基因突变的方法、组合物及其应用。

技术介绍

1、地中海贫血症是一种遗传性溶血性的贫血，在我国长江以南广泛分布，其中广西地区最为严重。根据基因分型，临床上主要有α地中海贫血、β地中海贫血。引发α地中海贫血的突变分缺失型和非缺失型。非缺失型α地贫是由于α基因核苷酸的“点突变”导致。广东、广西及四川等地的α地贫中，非缺失型占35％～60％。我国较常见的非缺失型α-地贫有3种：hb-cs(cd142)、hb-qs(cd125)和hb-ws(cd122)。其中hb-cs型患者病情相对最严重，血红蛋白低，生存率不高。

2、血红蛋白cs(hb-cs,haemoglobin-constant spring，α142,term→gln,taa>caa(α2),αcsα/)是一种非缺失形式的α-地中海贫血(α-thal)，在α2-珠蛋白基因(hba2)终止密码子cd142处有一个核苷酸取代(uaa>caa)。hb-cs若同时复合α2α1双缺失型地贫突变(如αsea,αmed,αthai)，仅剩余一个正常本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种修复HBA2基因突变的方法，其特征在于，包括以下步骤：将核酸酶、gRNA和供体修复模板与待编辑修复的HBA2基因序列接触，使突变的HBA2基因CD142密码子中的胞嘧啶碱基修复为胸腺嘧啶；

2.权利要求1所述的修复HBA2基因突变的方法在制备用于治疗α地中海贫血症的药物中的应用。

3.一种修复HBA2基因突变的组合物，其特征在于，包括：核酸酶、gRNA和供体修复模板，用于使突变的HBA2基因CD142密码子中的胞嘧啶碱基修复为胸腺嘧啶；

4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述导向序列选自SEQ ID NO.10-SEQID NO.39...

【技术特征摘要】

1.一种修复hba2基因突变的方法，其特征在于，包括以下步骤：将核酸酶、grna和供体修复模板与待编辑修复的hba2基因序列接触，使突变的hba2基因cd142密码子中的胞嘧啶碱基修复为胸腺嘧啶；

2.权利要求1所述的修复hba2基因突变的方法在制备用于治疗α地中海贫血症的药物中的应用。

3.一种修复hba2基因突变的组合物，其特征在于，包括：核酸酶、grna和供体修复模板，用于使突变的hba2基因cd142密码子中的胞嘧啶碱基修复为胸腺嘧啶；

4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述导向序列选自seq id no.10-seqid no.39所示任一序列。

5.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述grna的导向序列的长度为20-25bp；和/或

6.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述核酸酶选自cas9、casx、casy、cpf1、c2c1、cas12b2、cas12h、cas12i、cas12g、c2c2、c2c3、c2c4、c2c5、c2c6、c2c7、c2c8、c2c9、及其变体中的至少一种。

7.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述核酸酶选自spry cas9变体、ng-cas9变体、spcas9中的至少一种。

8.根据权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述核酸酶为spry cas9，所述导向序列选自seq id no.13-seq id no.14、seq id no.30-seq id no.39所示任一序列。

9.根据权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述核酸酶为ng-cas9，所述导向序列选自seq id no.11-seq id no.12、seq id no.20-seq id no.29所...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁峻彬，徐辉，程琳，罗颖，
申请(专利权)人：广州瑞风生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：