【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及肠神经前体细胞的制造方法和扩大培养方法以及这些方法中使用的培养基。
技术介绍
1、神经嵴细胞(neural crest cell:ncc)是在早期发育阶段由神经板形成神经管时，从神经外胚层与表皮外胚层之间产生的细胞。肠神经前体细胞(enteric neuralprecursor:enp)是从该ncc产生，并分化为肠神经细胞系的细胞。enp具有分化为肠神经细胞和胶质细胞的分化能力。
2、作为先天性肠神经节细胞缺乏症引起的疾病，存在呈现消化管运动抑制现象的先天性巨结肠(hirschsprung)症。近年来，报道了旨在通过对取自患者并在体外增殖的enp进行自体移植从而治疗先天性巨结肠症的基础性尝试(非专利文献1)。
3、为了制造包含enp的细胞药品，正在研究由诱导性多能干细胞(induciblepluripotent stem cell:ipsc)等多能干细胞诱导ncc，进而由ncc诱导enp。
4、例如，非专利文献2中记载了由人多能干细胞制作肠神经系统前体细胞(entericnervous system progenitor)。非专利文献2中未示出phox2b阳性的肠神经前体细胞，也没有记载有关神经调蛋白1(neuregulin-1：nrg1)的内容。
5、此外，非专利文献3中记载了通过在包含tgfβ抑制剂、gsk3β抑制剂以及nrg1的培养基培养人ipsc，从而制作雪旺氏前体细胞(schwann cell precursor)。非专利文献3中记载的方法未使用视黄酸，所获
6、现有技术文献
7、非专利文献
8、非专利文献1：“postnatal human enteric neuronal progenitors canmigrate,differentiate,and proliferate in embryonic and postnatal aganglionicgut environments”pediatric research,2017,81,5,838-846。
9、非专利文献2：“deriving human ens lineages for cell therapy and drugdiscovery in hirschsprung disease”nature,2016,531,105-109。
10、非专利文献3：“schwann cell precursors from human pluripotent stemcells as a potential therapeutic target for myelin repair”,stem cell reports,2017,8,1714-1726。
技术实现思路
1、专利技术要解决的问题
2、为了实现使用了enp的细胞治疗等，需要能够大量提供enp的技术。如上所述，虽然报道了由人多能干细胞诱导肠神经系统前体细胞(enteric nervous system progenitor)的方法(非专利文献2)，但是至今还未开发出用于使诱导后的enp增殖并进行扩大培养的方法。
3、本专利技术的主要目的在于，提供一种用于维持enp的分化为肠神经细胞和胶质细胞的分化能力(多能(multipotency))，同时使其增殖的技术。
4、用于解决问题的手段
5、为了解决上述问题，本专利技术提供以下[1]至[27]。
6、[1]一种肠神经前体细胞的制造方法，包括以下工序：工序(a1)，提供肠神经前体细胞；以及工序(a2)，在包含erbb3激动剂和/或erbb4激动剂的培养基中培养肠神经前体细胞。
7、[2]根据[1]所述的制造方法，其中，
8、所述培养基还包含tgfβ抑制剂和gsk3β抑制剂。
9、[3]根据[1]或[2]所述的制造方法，其中，
10、所述培养基还包含视黄酸和/或其衍生物。
11、[4]根据[1]至[3]中任一项所述的制造方法，其中，
12、所述培养基还包含gdnf。
13、[5]根据[1]至[4]中任一项所述的制造方法，其中，
14、所述培养基还包含基质胶。
15、[6]根据[1]至[5]中任一项所述的制造方法，其中，
16、所述erbb3激动剂和/或erbb4激动剂为nrg1。
17、[7]一种肠神经前体细胞，其通过[1]至[6]中任一项所述的制造方法获得。
18、[8]一种冷冻储备物，包含[7]所述的肠神经前体细胞。
19、[9]一种细胞药品，包含[7]所述的肠神经前体细胞。
20、[10]一种肠神经前体细胞的制造方法，包括以下工序：工序(b1)，提供神经嵴细胞；以及工序(b2)，在包含erbb3激动剂和/或erbb4激动剂以及视黄酸和/或其衍生物的培养基中培养神经嵴细胞。
21、[11]根据[10]所述的制造方法，其中，
22、所述神经嵴细胞为迷走神经嵴细胞。
23、[12]根据[11]所述的制造方法，其中，
24、所述迷走神经嵴细胞为sox10阳性、hoxb5阳性、hoxb9阴性且phox2b阴性，所述肠神经前体细胞为sox10阳性且phox2b阳性。
25、[12a]根据[10]至[12]所述的制造方法，其中，
26、所述培养基还包含tgfβ抑制剂和/或gsk3β抑制剂。
27、[12b]根据[10]至[12a]中任一项所述的制造方法，其中，
28、所述培养基还包含视黄酸和/或其衍生物。
29、[12c]根据[10]至[12b]中任一项所述的制造方法，其中，
30、所述培养基还包含gdnf。
31、[12d]根据[10]至[12c]中任一项所述的制造方法，其中，
32、所述培养基还包含基质胶。
33、[12e]根据[10]至[12d]中任一项所述的制造方法，其中，
34、所述erbb3激动剂和/或erbb4激动剂为nrg1。
35、[12f]一种肠神经前体细胞，其通过[10]至[12e]中任一项所述的制造方法获得。
36、[13]一种肠神经前体细胞培养基，包含erbb3激动剂和/或erbb4激动剂。
37、[14]根据[13]所述的培养基，其中，
38、所述培养基还包含tgfβ抑制剂和/或gsk3β抑制剂。
39、[15]根据[13]或[14]所述的培养基，其中，
40、所述培养基还包含视黄酸和/或其衍生物。
41、[16]根据[13]至[本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种制造肠道类器官的方法，包括对肠神经前体细胞和后肠细胞进行共培养的工序。
2.根据权利要求1所述的方法，还包含制造肠神经前体细胞的工序，所述工序包含：
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述视黄酸的衍生物选自以下组成的组：视黄醇，视黄醛，维A酸，异维A酸，阿利维A酸，阿维A酯，阿曲丁，他沙罗汀，贝沙罗汀和阿达帕林。
4.根据权利要求2所述的方法，其中所述培养基还包含GDNF。
5.根据权利要求2所述的方法，其中所述培养基还包含基质胶。
6.根据权利要求1所述的方法，还包含制造肠神经前体细胞的工序，
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述神经嵴细胞为迷走神经嵴细胞。
8.根据权利要求7所述的方法，其中
9.一种制造人造肠的方法，包含以下工序：
10.根据权利要求9所述的方法，还包含制造肠神经前体细胞的工序，所述工序包含：
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述视黄酸的衍生物选自以下组成的组：视黄醇，视黄醛，维A酸，异维A酸，阿利维A酸，阿维A酯，阿曲丁，
12.根据权利要求10所述的方法，其中所述培养基还包含GDNF。
13.根据权利要求10所述的方法，其中所述培养基还包含基质胶。
14.根据权利要求9所述的方法，进一步包含制造肠神经前体细胞的工序，所述工序包含：
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述神经嵴细胞为迷走神经嵴细胞。
16.根据权利要求15所述的方法，其中
17.根据权利要求9所述的方法，其中所述生物体是非人哺乳动物。
...【技术特征摘要】
1.一种制造肠道类器官的方法，包括对肠神经前体细胞和后肠细胞进行共培养的工序。
2.根据权利要求1所述的方法，还包含制造肠神经前体细胞的工序，所述工序包含：
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述视黄酸的衍生物选自以下组成的组：视黄醇，视黄醛，维a酸，异维a酸，阿利维a酸，阿维a酯，阿曲丁，他沙罗汀，贝沙罗汀和阿达帕林。
4.根据权利要求2所述的方法，其中所述培养基还包含gdnf。
5.根据权利要求2所述的方法，其中所述培养基还包含基质胶。
6.根据权利要求1所述的方法，还包含制造肠神经前体细胞的工序，
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述神经嵴细胞为迷走神经嵴细胞。
8.根据权利要求7所述的方法，其中
9.一种制造人造肠的方法，包含以下...
【专利技术属性】
技术研发人员：池谷真，上谷弥生，上谷大介，山下辉芳，武和巳，
申请(专利权)人：国立大学法人京都大学，
类型：发明
国别省市：
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