一种基于无血清悬浮扩增的高效回收腺病毒的方法技术

技术编号：40376131 阅读：6 留言：0更新日期：2024-02-20 22:16

本发明专利技术涉及基因治疗技术领域，尤其涉及一种基于无血清悬浮扩增的高效回收腺病毒的方法，包括：步骤S1、悬浮扩增腺病毒，破碎处理得到细胞悬液；步骤S2、纯化处理得到腺病毒悬液，并对纯化完成后的腺病毒悬液进行取样检测；步骤S3、中控模块根据统计的所述腺病毒颗粒数判定对腺病毒的回收效率是否符合预设标准，并在判定腺病毒的回收效率不符合预设标准时根据测得的腺病毒滴度针对腺病毒的回收效率是否符合预设标准进行二次判定，或，根据测得的腺病毒颗粒数将所述高压细胞破碎机的压力调节至对应值，本发明专利技术在保证分析腺病毒的回收过程的准确度的同时，提高了腺病毒的回收效率。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因治疗，尤其涉及一种基于无血清悬浮扩增的高效回收腺病毒的方法。

技术介绍

1、腺病毒转基因效率高，体外实验通常接近100%的转导效率;可转导不同类型的人组织细胞，不受靶细胞是否为分裂细胞所限;容易制得高滴度病毒载体，在细胞培养物中重组病毒滴度可达(10e+11)iu/ml;进入细胞内并不整合到宿主细胞基因组，仅瞬间表达，安全性高。因而，腺病毒在基因治疗临床试验方面有了越来越多的应用，成为继逆转录病毒载体之后广泛应用且最具前景的病毒载体。

2、中国专利申请号：cn201810359474.3公开了一种禽腺病毒精纯化的方法，该专利技术公开了一种禽腺病毒精纯化的方法，包括步骤如下：1.取在细胞瓶中培养的鸡胚细胞，进行病毒接种，并加入dmem培养基，将细胞瓶置于37℃转瓶培养箱中继续培养，接毒后，收获瓶内所有的病毒细胞培养液，经离心后收集上清液；2.使用超滤膜包对步骤1所获得的上清液进行10-40倍浓缩；3.通过g200分子筛层析填料对步骤2所得液体进行分子筛层析；4.使用超滤膜包对步骤3回收的病毒液进行3-10倍浓缩；5.使用阴离子交换层柱对步骤4所得病毒液进行层析纯化；6.使用超滤膜包对步骤5回收的病毒液进行4-10倍浓缩，得到纯化后的禽腺病毒。该专利技术的纯化方法可在保持病毒具有良好活性的前提下对病毒液中的杂蛋白进行高效纯化，方便病毒的后续生物学应用。由此可见，所述禽腺病毒精纯化的方法存在以下问题：未对腺病毒的培养过程进行分析，导致腺病毒的回收效率低。

技术实现思路</p>

1、为此，本专利技术提供一种基于无血清悬浮扩增的高效回收腺病毒的方法，用以克服现有技术中未对腺病毒的培养过程进行分析，导致腺病毒的回收效率低的问题。

2、为实现上述目的，本专利技术提供一种基于无血清悬浮扩增的高效回收腺病毒的方法，包括：

3、步骤s1、中控模块采用预设数量的细胞在预设时间点进行感染以悬浮扩增腺病毒，并使用高压细胞破碎机对所述悬浮细胞液进行破碎处理得到细胞悬液；

4、步骤s2、所述中控模块对所述细胞悬液进行纯化处理得到腺病毒悬液，并对纯化完成后的腺病毒悬液进行检测，检测内容包括腺病毒悬液的腺病毒总颗粒数、样本腺病毒悬液中病毒颗粒数、腺病毒纯度以及腺病毒滴度；

5、步骤s3、所述中控模块根据统计的所述腺病毒颗粒数判定针对腺病毒的回收效率是否符合预设标准，并在判定腺病毒的回收效率不符合预设标准时根据测得的腺病毒滴度针对腺病毒的回收效率是否符合预设标准进行二次判定，或，根据测得的腺病毒颗粒数将所述高压细胞破碎机的压力调节至对应值。

6、进一步地，所述中控模块根据测得的腺病毒颗粒数与上一级样品的病毒颗粒数的比值判定腺病毒的回收效率是否符合预设标准，以及，在判定腺病毒的回收效率不符合预设标准时根据测得的所述腺病毒滴度针对腺病毒的回收效率是否符合预设标准进行二次判定，

7、或，根据测得的所述腺病毒颗粒数与上一级样品的病毒颗粒数的比值将所述高压细胞破碎机的压力调节至对应值。

8、进一步地，所述中控模块在二次判定所述腺病毒的回收效率符合预设标准时对下一批次腺病毒的回收效率进行判定，

9、或，在二次判定所述腺病毒的回收效率不符合预设标准时根据测得的腺病毒颗粒数与上一级样品的病毒颗粒数的比值将所述高压细胞破碎机的压力调节至对应值。

10、进一步地，所述中控模块基于测得的腺病毒颗粒数与上一级样品的病毒颗粒数的比值设有若干针对所述高压细胞破碎机的压力调节方式，且各压力调节方式针对高压细胞破碎机的压力的调节幅度均不相同。

11、进一步地，所述中控模块在完成对所述高压细胞破碎机的压力的调节时重新对所述腺病毒悬液进行破碎处理，并进行纯化处理，中控模块在纯化处理完成后重新统计腺病毒颗粒数，并根据统计的腺病毒颗粒数与原腺病毒悬液中腺病毒颗粒总数的差值判定针对细胞悬液的下一步操作为对细胞悬液进行裂解处理，

12、或，根据对所述高压细胞破碎机的调节次数将高压细胞破碎机的压力修正至对应值，

13、以及，在判定针对所述腺病毒的扩增处理不符合预设标准时根据腺病毒的纯度将感染时间点修正至对应值。

14、进一步地，所述中控模块在判定根据对所述高压细胞破碎机的调节次数将高压细胞破碎机的压力修正至对应值时判定选用修正系数β将所述高压细胞破碎机的压力修正至对应值，

15、或，判定对所述细胞悬液进行裂解处理。

16、进一步地，所述中控模块在完成对所述高压细胞破碎机的待调节压力值的确定时根据所述高压细胞破碎机的压力阈值判定高压细胞破碎机的压力为待调节压力值，

17、或，根据检测的腺病毒颗粒数与腺病毒悬液中腺病毒颗粒总数的比值判定是否使用裂解的方式对腺病毒进行回收。

18、进一步地，所述中控模块根据测得的腺病毒颗粒数与腺病毒悬液中腺病毒颗粒总数的比值判定使用裂解的方式对腺病毒进行回收，或，判定所述腺病毒所处环境不符合标准。

19、进一步地，所述中控模块基于所述腺病毒的纯度设有若干针对感染时间的修正方式，且各修正方式针对感染时间的修正幅度均不相同。

20、进一步地，所述中控模块根据测得的所述腺病毒滴度判定针对下一批次细胞悬液高压破碎过程中是否降低所述高压细胞破碎机的压力，以及，在判定所述腺病毒的存活率不合格时选用第三压力调节系数α3将所述高压细胞破碎机的压力调节至对应值。

21、与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于，本专利技术中所述中控模块根据统计的所述腺病毒的数量判定针对腺病毒的回收效率是否符合预设标准，提高了针对腺病毒回收的控制精度，并在判定腺病毒的回收效率不符合预设标准时根据测得的腺病毒滴度针对腺病毒的回收效率是否符合预设标准进行二次判定，或，根据测得的腺病毒数将所述高压细胞破碎机的压力调节至对应值，提高了分析腺病毒的回收过程的准确度，在保证分析腺病毒的回收过程的准确度的同时，提高了腺病毒的回收效率。

22、进一步地，本专利技术中所述中控模块根据一级比值判定针对腺病毒的回收效率是否符合预设标准，并在判定所述腺病毒的回收效率不符合预设标准时根据测得的腺病毒滴度针对腺病毒的回收效率是否符合预设标准进行二次判定，或，根据所述一级比值将所述高压细胞破碎机的压力调节至对应值，提高了对腺病毒的回收过程的控制精度，提高了分析腺病毒的回收过程的准确度，在保证分析腺病毒的回收过程的准确度的同时，进一步提高了腺病毒的回收效率。

23、进一步地，本专利技术中所述中控模块根据测得的所述腺病毒的浓度确定对腺病毒的回收效率是否符合预设标准进行二次判定，并在判定所述腺病毒的回收效率不符合预设标准时根据所述一级比值将所述高压细胞破碎机的压力调节至对应值，提高了分析腺病毒的回收过程的准确度，在保证分析腺病毒的回收过程的准确度的同时，进一步提高了腺病毒的回收效率。

24、进一步地，本专利技术中所述中控模块根据一级差值选用对应的压力调节系数对所述高压细胞破碎机的压本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于无血清悬浮扩增的高效回收腺病毒的方法，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的基于无血清悬浮扩增的高效回收腺病毒的方法，其特征在于，所述中控模块根据测得的腺病毒颗粒数与上一级样品的病毒颗粒数的比值判定腺病毒的回收效率是否符合预设标准，以及，在判定腺病毒的回收效率不符合预设标准时根据测得的所述腺病毒滴度针对腺病毒的回收效率是否符合预设标准进行二次判定，

3.根据权利要求2所述的基于无血清悬浮扩增的高效回收腺病毒的方法，其特征在于，所述中控模块在二次判定所述腺病毒的回收效率符合预设标准时对下一批次腺病毒悬液的腺病毒的回收效率进行判定，

4.根据权利要求3所述的基于无血清悬浮扩增的高效回收腺病毒的方法，其特征在于，所述中控模块基于测得的腺病毒颗粒数与上一级样品的病毒颗粒数的比值设有若干针对所述高压细胞破碎机的压力调节方式，且各压力调节方式针对高压细胞破碎机的压力的调节幅度均不相同。

5.根据权利要求4所述的基于无血清悬浮扩增的高效回收腺病毒的方法，其特征在于，所述中控模块在完成对所述高压细胞破碎机的压力的调节时重新对所述腺

6.根据权利要求5所述的基于无血清悬浮扩增的高效回收腺病毒的方法，其特征在于，所述中控模块在判定根据对所述高压细胞破碎机的调节次数将高压细胞破碎机的压力修正至对应值时判定选用修正系数β将所述高压细胞破碎机的压力修正至对应值，

7.根据权利要求6所述的基于无血清悬浮扩增的高效回收腺病毒的方法，其特征在于，所述中控模块在完成对所述高压细胞破碎机的待调节压力值的确定时根据所述高压细胞破碎机的压力阈值判定高压细胞破碎机的压力为待调节压力值，

8.根据权利要求7所述的基于无血清悬浮扩增的高效回收腺病毒的方法，其特征在于，所述中控模块根据测得的腺病毒颗粒数与腺病毒悬液中腺病毒颗粒总数的比值判定使用裂解的方式对腺病毒进行回收，或，判定所述腺病毒所处环境不符合标准。

9.根据权利要求5所述的基于无血清悬浮扩增的高效回收腺病毒的方法，其特征在于，所述中控模块基于所述腺病毒的纯度设有若干针对感染时间的修正方式，且各修正方式针对感染时间的修正幅度均不相同。

10.根据权利要求9所述的基于无血清悬浮扩增的高效回收腺病毒的方法，其特征在于，所述中控模块根据测得的所述腺病毒滴度判定针对下一批次细胞悬液高压破碎过程中是否降低所述高压细胞破碎机的压力，以及，在判定所述腺病毒的存活率不合格时选用第三压力调节系数α3将所述高压细胞破碎机的压力调节至对应值。

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【技术特征摘要】

1.一种基于无血清悬浮扩增的高效回收腺病毒的方法，其特征在于，包括：

5.根据权利要求4所述的基于无血清悬浮扩增的高效回收腺病毒的方法，其特征在于，所述中控模块在完成对所述高压细胞破碎机的压力的调节时重新对所述腺病毒悬液进行破碎处理，并进行纯化处理，中控模块在纯化处理完成后重新统计腺病毒颗粒数，并根据统计的腺病毒颗粒数与原腺病毒悬液中腺病毒颗粒总数的差值判定针对细胞悬液的下一步操作为对细胞悬液进行裂解处理，

【专利技术属性】
技术研发人员：陈彦平，余哲琪，胡春凌，张蕊，黄兰芳，徐迪华，
申请(专利权)人：深圳源兴基因技术有限公司，
类型：发明
国别省市：

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