【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一些基于荧光定量pcr技术定量检测菌根真菌与菌根辅助细菌互作中解有机磷相关基因表达量的引物及检测方法。
技术介绍
1、真菌-细菌相互作用是陆地生态系统微生物群落当中的一个重要组成部分，该领域正在不断发展当中。菌根辅助细菌(mycorrhizal helper bacteria，mhb)对菌根真菌的促生作用方式大致可以分为两个方面：菌根辅助细菌通过促进真菌孢子的萌发从而促进真菌生长繁殖；另一方面，菌根辅助细菌可以促进菌根真菌的定殖，影响菌丝的侵染过程从而促进菌根的形成。菌根辅助细菌的存在也可以改善根际土壤微环境，同时增强菌根真菌对胁迫环境的适应性；而菌根真菌的存在同样也对根际土壤微环境中细菌的类群产生了某种定向选择，某些菌根真菌与一些细菌的存在密切相关，菌根真菌产生的分泌物可促进一定种类细菌的增值。研究表明菌丝可作为菌根辅助细菌的桥梁和媒介，分泌特定的代谢产物趋化有益细菌的聚集，改变植物根际菌群的多样性，使其更加有利于菌根的合成。此外，菌根真菌菌丝可以分泌球囊霉素、有机酸之类的化学物质，使菌根周围理化特性发生变化，也会对菌根辅助细菌的生长和群落组成有一定的影响，正向调控细菌的生长繁殖，通过菌根真菌-菌根辅助细菌间的相互作用触发各种反应机制，间接改善植物对养分的吸收利用。
2、自然界中磷以磷酸盐形式存在，而多数植物无法直接利用有机磷及大部分无机磷，所以大部分植物需要微生物转化后的有效磷以供生长。在已有报道中，研究丛枝菌根真菌与菌根辅助细菌互作对解磷效应影响的居多，目前已知在解磷效能方面菌根辅助
3、菌根真菌与菌根辅助细菌互作对解有机磷相关基因表达量的影响是探索其解磷机制的重要手段。实时荧光定量pcr技术是指在pcr反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个pcr进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定性及定量分析的方法。荧光定量pcr技术灵敏，准确，可以实时定量检测基因表达量，是当前基因定量检测的最有效技术手段。
4、杜鹃花类菌根真菌与菌根辅助细菌互作中，对解有机磷相关基因表达量的定量检测技术缺乏，制约了其相关研究的深入，限制了杜鹃花类菌根真菌应用研究的进一步发展。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了解决杜鹃花类菌根真菌与菌根辅助细菌互作中，针对想要分析解有机磷相关基因的表达而目前没有有效的定量检测技术的问题，提供一种基于实时荧光定量pcr技术定量检测解有机磷相关基因表达量的引物及检测方法。
2、本专利技术的检测杜鹃花类菌根真菌与菌根辅助细菌互作中解有机磷相关基因表达量引物，所述的引物为细菌解磷相关基因引物，以及真菌解磷相关基因引物；
3、所述的细菌解磷相关基因引物为酸性磷酸酶基因papr 2引物、酸性磷酸酶基因papr 3引物、酸性磷酸酶基因papr 4引物、碱性磷酸酶基因balk引物；
4、所述的真菌解磷相关基因引物为酸性磷酸酶基因acid 4引物、酸性磷酸酶基因acid 6引物、碱性磷酸酶基因falk引物、磷转运基因pt 8引物、磷转运基因pt 11引物、磷转运基因pho 4引物和poly p合成酶基因vtc4p引物；
5、所述的酸性磷酸酶基因papr 2引物的核苷酸序列如下：
6、正向引物：tacttggaggcatggtga；
7、反向引物：gaaacggaatacgcttga；
8、所述的酸性磷酸酶基因papr 3引物的核苷酸序列如下：
9、正向引物：cacgccgcaaattcttca；
10、反向引物：ccagcacgcagcctaaaa；
11、所述的酸性磷酸酶基因papr 4引物的核苷酸序列如下：
12、正向引物：cgaaggcagactggcgaaat；
13、反向引物：ttgctccaagtgctactcctaaaa；
14、所述的碱性磷酸酶基因balk引物的核苷酸序列如下：
15、正向引物：ttcacaacaggcggtcat；
16、反向引物：tttactgggaaacgcacc；
17、所述的酸性磷酸酶基因acid 4引物的核苷酸序列如下：
18、正向引物：ttcagtcctttcctcgtcg；
19、反向引物：aggtgtaatagggattggtgtag；
20、所述的酸性磷酸酶基因acid 6引物的核苷酸序列如下：
21、正向引物：agcagtcaacaactccctct；
22、反向引物：cttctcactcttcaatccgtct；
23、所述的碱性磷酸酶基因falk引物的核苷酸序列如下：
24、正向引物：ggtgctacggcattctc；
25、反向引物：atcaagtcttcctcggttc；
26、所述的磷转运基因pt 8引物的核苷酸序列如下：
27、正向引物：tcgggcttggtataggg；
28、反向引物：ttagtcgtgctgttcaggttt；
29、所述的磷转运基因pt 11引物的核苷酸序列如下：
30、正向引物：tcttgtgggtgaggtatttg；
31、反向引物：ctgacgcagaagttgacg；
32、所述的磷转运基因pho 4引物的核苷酸序列如下：
33、正向引物：catctcgggtggctttg；
34、反向引物：cacgcaggcttcttgttt；
35、所述的poly p合成酶基因vtc4p引物的核苷酸序列如下：
36、正向引物：gatctcatctgtcctcccg；
37、反向引物：cccatgaactccgctaca。
38、本专利技术的引物在制备检测杜鹃花类菌根真菌与菌根辅助细菌互作中解有机磷相关基因表达量的试剂盒中的应用。
39、本专利技术的一种实时荧光定量pcr检测的试剂盒，所述的荧光定量pcr检测的试剂盒含有上述所述的引物。
40、本专利技术的一种实时荧光定量pcr检测杜鹃花类菌根真菌与菌根辅助细菌互作中解有机磷相关基因表达量的方法，所述的方法如下：
41、(1)提取细菌rna和菌根真菌菌丝rna；
42、(2)将提取的细菌rna和菌根真菌菌丝rna反转录成cdna；
43、(3)以反转录得到的cdna为模板，用上述所述的引物进行实时荧光定量pcr反应，检测靶标基因的表达水平。
44、进一步地，所述的实时荧光定量pcr反应体系为：
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【技术保护点】
1.检测杜鹃花类菌根真菌与菌根辅助细菌互作中解有机磷相关基因表达量引物，其特征在于所述的引物为细菌解磷相关基因引物，以及真菌解磷相关基因引物；
2.如权利要求1所述的引物在制备检测杜鹃花类菌根真菌与菌根辅助细菌互作中解有机磷相关基因表达量的试剂或试剂盒中的应用。
3.一种实时荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于所述的荧光定量PCR检测的试剂盒含有权利要求1所述的引物。
4.一种实时荧光定量PCR检测杜鹃花类菌根真菌与菌根辅助细菌互作中解有机磷相关基因表达量的方法，其特征在于所述的方法如下：
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述的实时荧光定量PCR反应体系为：
【技术特征摘要】
1.检测杜鹃花类菌根真菌与菌根辅助细菌互作中解有机磷相关基因表达量引物，其特征在于所述的引物为细菌解磷相关基因引物，以及真菌解磷相关基因引物；
2.如权利要求1所述的引物在制备检测杜鹃花类菌根真菌与菌根辅助细菌互作中解有机磷相关基因表达量的试剂或试剂盒中的应用。
3.一种实时荧光定量pc...
【专利技术属性】
技术研发人员：姜静，李丽丽，杨洪一，郭普悦，卓泳杉，
申请(专利权)人：东北林业大学，
类型：发明
国别省市：
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