【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学与核酸化学领域。更具体地说，本专利技术涉及一种基于中空玻璃微球的便携式rna检测系统与方法。
技术介绍
1、核糖核酸(rna)是存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。研究发现，感染病毒后，人体血液内可以检测出病毒rna含量，hiv核酸检测就是以血液中hiv病毒rna含量指示hiv疾病水平。近年来，随着rna研究的不断深入，人们发现rna中的部分种类与疾病的发生息息相关，其中的pirna、snorna、lncrnas、circrna和exrnas被认为是生物标志物，在肿瘤疾病的早期诊断和预后发挥着重要的作用，因此对于rna的检测是至关重要的。目前被认为检测rna的金标准方法主要有基因测序和实时荧光定量pcr(qrt-pcr)，但是这两种方法存在着样本大、假阳性、实验条件要求高与实验实施过程中容易发生污染且难以消除的缺点，对于医疗检测条件较差的偏远地区实现对rna的检测并不友好。
技术实现思路
1、本专利技术的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
2、本专利技术的一个目的是提供一种基于中空玻璃微球的便携式rna检测系统，其具有操作简便、快携、高效等特点，能满足医疗条件较差的地区对肿瘤疾病早期检测的需求，也可满足在户外或是现场实现对rna的检测。
3、为了实现本专利技术的这些目的和其它优点，提供了一种基于中空玻璃微球的便携式rna检测系统，其包括：
4、用于与叠氮修饰的探针相结合的表面修饰二苯基
5、用于与目标rna结合的探针；
6、用于将探针信号放大的放大器；
7、用于将探针信号显色的核酸染料；
8、用于可视化检测探针荧光信号的便携式检测装置。
9、优选的是，所述表面修饰二苯基环辛炔的中空玻璃微球的制备包括以下步骤：
10、1)将中空玻璃微球(gb)与聚乙烯亚胺或3-氨丙基三甲氧基硅烷溶液混合，离心，除去下层溶液，利用超纯水洗涤，重复1-5次，真空干燥，得到表面修饰氨基的中空玻璃微球；
11、2)将步骤1)得到的表面修饰氨基的中空玻璃微球与二苯并环辛烯-活性酯混合，离心，除去下层溶液，利用超纯水洗涤，重复1-5次，真空干燥，得到表面修饰二苯基环辛炔的中空玻璃微球。
12、优选的是，中空玻璃微球经过刻蚀处理，处理方法为往中空玻璃微球中加入氢氧化钠溶液，在加热条件下混合，离心除去下层溶液，利用超纯水洗涤，重复1-5次，真空干燥，即完成刻蚀处理。
13、优选的是，所述探针具有以下序列：tctttccgcattttcccgtatgcgctttgtattattttcaacatcagtctgataagcta/3n3/。
14、优选的是，所述放大器包括第一放大器和第二放大器；
15、所述第一放大器包括dsn酶、dsn缓冲液、dsn终止液；
16、所述第二放大器包括与探针具有互补结合能力的长链以及与长链具有互补结合能力的短链；
17、短链具有以下序列：ttgagagtatttgagagtattt。
18、优选的是，长链的制备方法为：将datp、dttp、dctp、mgso4、clean g、hairpin，pbs、bst聚合酶混合均匀，在35-40℃下孵育10-20min，加入长链引物，在35-40℃下孵育1-5小时，80-100℃作用25分钟，终止反应，得到长链；
19、clean g具有以下序列：ccccgaaagtggcctcgggccttttggcccgaggccactttcg；
20、hairpin具有以下序列：aaatactctcgggccttttggcccgagagtatttgagagtatt/3invdt/；
21、长链引物具有以下序列：taatacaaagcgcatacgggaaaatgcggaaagagcgaggacttaatactctc。
22、优选的是，核酸染料为gelred、sybrtmgold或sybr green。
23、优选的是，所述便携式检测装置包括：
24、检测箱，其为长方体型结构，所述检测箱由4块板体可拆卸的拼接构成，顶部板体上设置有定位槽，所述定位槽中设置有贯穿检测箱顶部板体的滤光孔，所述滤光孔处设置有滤光片；
25、紫外灯，其设置在所述检测箱内，所述紫外灯的电源线接头为usb接头，电源线上设置有电源开关；
26、样品孔，其用于盛放待检测样品；
27、检测时，所述样品孔放置在检测箱内。
28、优选的是，样品孔的制备方法为：将sylgardtm184 silicone elastomer base、sylgardtm184 silicone elastomer curing混合，搅拌均匀，置于真空干燥箱中抽真空至溶液呈透明状态，将其倒入模具中并放入烘箱中烘干成型，取出，得到样品孔。
29、一种基于中空玻璃微球的便携式rna检测系统的检测方法，包括以下步骤：
30、步骤一、提取样品中的总rna，将总rna、探针、dsn酶和dsn缓冲液混合均匀，孵育，加入dsn终止液结束反应，得到反应物；
31、步骤二、将表面修饰二苯基环辛炔的中空玻璃微球、bsa溶液、pbs溶液装入离心管中，加入步骤一的反应物，得到试验混合物；将表面修饰二苯基环辛炔的中空玻璃微球、探针、bsa溶液、pbs溶液装入离心管中，得到对照混合物；试验混合物、对照混合物于涡旋混匀器中反应，结束后离心，除去下清溶液，pbs洗涤1-3次；
32、步骤三、往步骤二的产物中加入pbs、长链和短链，于涡旋混匀器中反应，反应结束后离心，除去下清溶液，ssc溶液洗涤1-3次；
33、步骤四、步骤三的产物中加入核酸染料，于涡旋混匀器避光反应，反应结束，离心，除去下清溶液，pbs洗涤1-3次，加入pbs，摇匀，取10-50μl滴于样品孔中，静止60-120s；
34、步骤五、将步骤四的样品孔置于检测箱中，将手持终端放入定位槽中，电源线与电源连接，打开电源开关，即可实现对样品可视化检测，并可利用手持终端对样品孔进行拍照以及进行荧光强度分析。
35、本专利技术至少包括以下有益效果：
36、第一、本专利技术的检测方法相比于实时荧光定量pcr不需要精密的pcr仪器，具有操作简便、检测灵敏度高、高效便捷等特点。
37、第二、本专利技术通过dsn酶对探针信号进行一级放大，通过长链和短链对探针信号进行二级放大，通过将修饰的中空玻璃微球在样品孔中聚集对探针信号进行三级放大，利用本专利技术便携式检测装置即可通过肉眼对探针荧光信号的强弱进行判断，可实现对检测结果的初步筛查，满足医疗条件较差的地区对肿瘤疾病早期检测的需求，也可以在户外或是现场实现对rna的检测，为rna相关疾病、肿瘤疾病的早期诊断分析提供分子本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.基于中空玻璃微球的便携式RNA检测系统，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的基于中空玻璃微球的便携式RNA检测系统，其特征在于，所述表面修饰二苯基环辛炔的中空玻璃微球的制备包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的基于中空玻璃微球的便携式RNA检测系统，其特征在于，中空玻璃微球经过刻蚀处理，具体方法为往中空玻璃微球中加入氢氧化钠溶液，在加热条件下混合，离心除去下层溶液，利用超纯水洗涤，重复1-5次，然后真空干燥完成刻蚀处理。
4.根据权利要求1所述的基于中空玻璃微球的便携式RNA检测系统，其特征在于，所述探针具有以下序列：tctttccgcattttcccgtatgcgctttgtattattttcaacatcagtctgataagcta/3N3/。
5.根据权利要求1所述的基于中空玻璃微球的便携式RNA检测系统，其特征在于，所述放大器包括第一放大器和第二放大器；
6.根据权利要求5所述的基于中空玻璃微球的便携式RNA检测系统，其特征在于，长链的制备方法为：将dATP、dTTP、dCTP、MgSO4、Clean
7.根据权利要求1所述的基于中空玻璃微球的便携式RNA检测系统，其特征在于，核酸染料为GelRed、SYBRTMGold或SYBR Green。
8.根据权利要求1所述的基于中空玻璃微球的便携式RNA检测系统，其特征在于，所述便携式检测装置包括：
9.根据权利要求8所述的基于中空玻璃微球的便携式RNA检测系统，其特征在于，样品孔的制备方法为：将SYLGARDTM184 Silicone Elastomer Base、SYLGARDTM184 SiliconeElastomer Curing，搅拌混合均匀，置于真空干燥箱中抽真空至溶液呈透明状态，将其倒入模具中并放入烘箱中烘干成型，取出，得到样品孔。
10.如权利要求1-9任一项所述基于中空玻璃微球的便携式RNA检测系统的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.基于中空玻璃微球的便携式rna检测系统，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的基于中空玻璃微球的便携式rna检测系统，其特征在于，所述表面修饰二苯基环辛炔的中空玻璃微球的制备包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的基于中空玻璃微球的便携式rna检测系统，其特征在于，中空玻璃微球经过刻蚀处理，具体方法为往中空玻璃微球中加入氢氧化钠溶液，在加热条件下混合，离心除去下层溶液，利用超纯水洗涤，重复1-5次，然后真空干燥完成刻蚀处理。
4.根据权利要求1所述的基于中空玻璃微球的便携式rna检测系统，其特征在于，所述探针具有以下序列：tctttccgcattttcccgtatgcgctttgtattattttcaacatcagtctgataagcta/3n3/。
5.根据权利要求1所述的基于中空玻璃微球的便携式rna检测系统，其特征在于，所述放大器包括第一放大器和第二放大器；
6.根据权利要求5所述的基于中空玻璃微球的便携式rna检测系统，其特征在于，长链的制备方法为：将datp、dttp、dctp、...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨帆，唐毓腾，向远航，邓晓然，覃小洁，李新春，
申请(专利权)人：广西医科大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。