【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种用于辅助判断前列腺癌恶性程度的检测方法及试剂。
技术介绍
1、前列腺癌是男性最常见的恶性肿瘤之一，在全球男性肿瘤发病率排在第三位，在全球所有肿瘤发病率排在第七位，约10%的男性肿瘤患者是前列腺癌。一个患者的前列腺内可能包含多种不同恶性程度的癌灶，判断一个患者前列腺癌整体的恶性程度，临床上最常用的是格里森评分(gleason评分：1分至10分的评分体系)，如果评分大于7分，患者即可被认定为高危前列腺癌，如果评分为6甚至更低，患者不需要进一步进行医疗干预。越来越多的证据表明，前列腺癌是一种致病因素复杂的肿瘤，大多数患者的前列腺癌都属于低危且非致命性，临床上定义为惰性。如何有效地鉴别前列腺癌高危患者，同时避免前列腺炎、前列腺增生和低危程度前列腺癌患者的穿刺活检日渐成为前列腺癌早期鉴别诊断的重要研究方向。
2、由于前列腺癌本身的特性，gleason评分依赖于前列腺穿刺病理，在前列腺癌诊疗过程中，该方法有相当的局限性。由于前列腺癌的异质性以及前列腺穿刺位置的不同，导致gleason评分不能完全反映患者前列腺癌恶性程度，临床上寄希望于更多的液体活检方法来辅助gleason评分。外泌体rna检测为前列腺癌风险评估提供了一种新的可能。外泌体是直径在40-150nm的囊泡，由细胞内形成并释放到细胞外环境，在人体内的循环系统中存在大量的外泌体。越来越多的研究表明，外泌体可以选择性富集rna，美国的exosomedx公司开发了检测尿液外泌体核酸检测的试剂盒，通过检测尿液外泌体中pca3和erg基因的表达量，
技术实现思路
1、本专利技术的第一个目的在于提供一种用于辅助判断前列腺癌恶性程度的血清外泌体核酸标志物的检测方法，以解决上述
技术介绍
对前列腺癌的检测手段较为复杂与繁琐的问题。
2、本专利技术的第二个目的在于提供一种用于辅助判断前列腺癌恶性程度的试剂。
3、为实现上述目的，本专利技术第一方面提供一种用于辅助判断前列腺癌恶性程度的血清外泌体核酸标志物的检测方法，包括如下步骤：
4、采用商用试剂盒提取血清外泌体的核酸并合成cdna；
5、对每个样本检测使用2个反应孔（a、b），构建不同的反应体系；
6、设置荧光pcr程序检测linc02203的表达量（ct值）。
7、优选的，所述设置荧光pcr程序检测lnc02203的表达量（ct值），包括：
8、将血清外泌体linc02203的拷贝数作为预测前列腺癌危险度的标志物。
9、其中，所述血清外泌体中linc02203表达量在高危前列腺癌中随着gleason评分增加而升高，并且在高gleason评分（≥7）患者中的表达量显著高于gleason评分为6的患者。
10、优选的，所述的linc02203其标准品序列为：ggcctatcatcttcttgggagctgcagctatttctcttattactatttttgtttttttacattgctattgtcctgggaaacctcttgatagtggtaacagtgcaagcccatgctcatctgctccaatctcctatgtattattttttaggtcatctctctttcattgacctatgcctaagctgtgttactctgccaaagat。
11、优选的，所有序列均是从5’端到3’端的顺序。
12、优选的，上述的检测方法用于诊断受试者前列腺癌的早期筛查以及受试者前列腺癌的恶性程度评估。
13、本专利技术第二方面提供了一种用于辅助判断前列腺癌恶性程度的试剂，所述试剂包括检测如上述的血清外泌体核酸标志物的检测试剂；
14、所述检测试剂包括外泌体提取试剂、cdna合成试剂、上下游引物、探针、以及荧光pcr反应液。
15、优选的，所述上下游引物、探针的序列为：
16、上游引物linc02203-f：ctattgtcctgggaaacctcttga
17、下游引物linc02203-r：cccctaacatctttggcagagtaa
18、探针linc02203-p：cagtgcaagcccatgctcatct
19、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：通过将血清外泌体linc02203的拷贝数作为预测前列腺癌危险度的标志物，并以其作为前列腺癌恶性程度诊断的依据，具有稳定、无创、实时、可重复的特点，避免了前列腺炎、前列腺增生和低危程度前列腺癌患者的穿刺活检，解决现有技术对前列腺癌的检测手段较为复杂与繁琐的问题。
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1.一种用于辅助判断前列腺癌恶性程度的血清外泌体核酸标志物的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的用于辅助判断前列腺癌恶性程度的血清外泌体核酸标志物的检测方法，其特征在于，所述设置荧光PCR程序检测linc02203的表达量（CT值），包括：
3.根据权利要求1所述的用于辅助判断前列腺癌恶性程度的血清外泌体核酸标志物的检测方法，其特征在于，所述的Linc02203其标准品序列为：GGCCTATCATCTTCTTGGGAGCTGCAGCTATTTCTCTTATTACTATTTTTGTTTTTTTACATTGCTATTGTCCTGGGAAACCTCTTGATAGTGGTAACAGTGCAAGCCCATGCTCATCTGCTCCAATCTCCTATGTATTATTTTTTAGGTCATCTCTCTTTCATTGACCTATGCCTAAGCTGTGTTACTCTGCCAAAGAT。
4.根据权利要求3 所述的用于辅助判断前列腺癌恶性程度的血清外泌体核酸标志物的检测方法，其特征在于，所有序列均是从5’端到3’端的顺序。
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