基于图像分析的肿瘤类器官模型高通量药物筛选方法技术

本发明专利技术涉及药物筛选技术领域，且公开了基于图像分析的肿瘤类器官模型高通量药物筛选方法，通过以下步骤实现：S1：染色测量活细胞数法；S2：双染法评价药物诱导细胞凋亡；S3：分析药物诱导凋亡作用模式；S4：统计每个细胞的荧光强度。本发明专利技术中，通过染色测量活细胞数法、双染法评价药物诱导细胞凋亡、分析药物诱导凋亡作用模式以及统计每个细胞的荧光强度，根据不同荧光染料标记及测量细胞内多细胞参数变化的抗肿瘤药物筛选和评价方法可使用单个细胞的形态、结构等多方面的信息来表征细胞的生理或病理特性，因此能够快速区分出具有所需生物学效应的化合物和非特异性作用的化合物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药物筛选，尤其涉及基于图像分析的肿瘤类器官模型高通量药物筛选方法。

技术介绍

1、高通量筛选技术是指以分子水平和细胞水平的实验方法为基础，以微板形式作为实验工具载体，以自动化操作系统执行试验过程，以灵敏快速的检测仪器采集实验结果数据，以计算机对实验数据进行分析处理，同一时间对数以千万样品检测，并以相应的数据库支持整体系运转的技术体系。药物筛选是新药研发的关键步骤，创新药物的发现需要采用适当的药物作用靶点对大量化合物样品进行筛选，在临床前实验阶段，需要对药物的安全性和有效性进行分析、检测，在一过程中涉及数以千计的样本，考量包括药物浓度、递送方式、生物微环境、细胞种类等条件因素。目前，临床抗肿瘤最有效的联合疗法，则需要筛选万甚至十万量级的药物组合方案，肿瘤细胞对于药物或化合物的敏感性通常通过细胞毒试验得到。细胞毒试验有很多方法，较为常见的是通过染色手段将细胞的活性信息转化为光学信号，经检测光学信号推导出活细胞的数量，从而判断用药物产生的细胞毒性。

2、目前，mtt、srb法是最普遍、最常用的细胞毒实验方法，已有很多研究者采用该方法进行本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.基于图像分析的肿瘤类器官模型高通量药物筛选方法，其特征在于：通过以下步骤实现：

2.根据权利要求1所述的基于图像分析的肿瘤类器官模型高通量药物筛选方法，其特征在于：所述染色测量活细胞数法通过细胞样品用PBS清洗2次，取样品置于戊二醛中固定,吸走戊二醛,加入PBS清洗3次,用PBS配10mg/ml的BSA溶液,每个样品加1ml,加入PBS清洗3次，用PBS配一抗溶液(actin),按体积比actin:PBS＝1:50稀释,每个样品加50μl，吸走actin,加入PBS清洗3次,每个样品加50μl，于37℃下孵育30min以上吸走IgG,每个样品加50μl，于37℃下孵育30...

【技术特征摘要】

1.基于图像分析的肿瘤类器官模型高通量药物筛选方法，其特征在于：通过以下步骤实现：

2.根据权利要求1所述的基于图像分析的肿瘤类器官模型高通量药物筛选方法，其特征在于：所述染色测量活细胞数法通过细胞样品用pbs清洗2次，取样品置于戊二醛中固定,吸走戊二醛,加入pbs清洗3次,用pbs配10mg/ml的bsa溶液,每个样品加1ml,加入pbs清洗3次，用pbs配一抗溶液(actin),按体积比actin:pbs＝1:50稀释,每个样品加50μl，吸走actin,加入pbs清洗3次,每个样品加50μl，于37℃下孵育30min以上吸走igg,每个样品加50μl，于37℃下孵育30min以上吸走fitc-igg,加入pbs清洗3次,每次5min用荧光显微镜拍照。

3.根据权利要求1所述的基于图像分析的肿瘤类器官模型高通量药物筛选方法，其特征在于：所述双染法评价药物诱导细胞凋亡通过用绿色荧光探针yf488标记的annexin v和碘化丙啶(propidium iodide,pi)，pi可以由488,532或546nm的激光激发，呈现红色荧光；取对数生长期细胞接种于6孔板或6cm培养皿；将收集的培养基和细胞混匀,4℃ 300g离心5min,弃上清；用预冷的pbs洗涤细胞2次,每次4℃ 300g离心5min，弃上清；用预冷的pbs洗涤细胞2次,每次4℃ 300g离心5min，加入1x binding buffer,将细胞调节成相同浓度(一般为1x106/ml)，取1-2x105个细胞悬液于流式管中,加入适量标记了荧光染料的annexin v和适量pi,轻轻混匀，室温避光孵育15-20min，加入300μlpbs重悬细胞。

4.根据权利要求3所述的基于图像分析的肿瘤类器官模型高通量药物筛选方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨文婷，
申请(专利权)人：扬州扬城医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：