一种单细胞测序级别的棉花花药细胞核提取方法技术

本发明专利技术提供了一种单细胞测序级别的棉花花药细胞核提取方法，属于植物分子育种技术领域。一种单细胞测序级别的棉花花药细胞核提取方法，将棉花花药切碎至观察不到完整花药形态时进行冰浴裂解，从裂解物中收集细胞核进行染色，分选细胞核。本发明专利技术提供的棉花花药细胞核提取方法提取得到的细胞核不仅纯净，而且完整性好，符合高质量单细胞测序的标准，为助力解析棉花花药组织不同类型细胞对高温的响应机制，加速棉花耐高温育种工作提供了基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物分子育种，具体涉及一种单细胞测序级别的棉花花药细胞核提取方法。

技术介绍

1、单细胞测序技术作为单细胞分辨率下破译细胞和分子景观的有力工具，可以帮助科研人员解决组织细胞间的异质性难题，并保留每个细胞独特性信息[1]。而开展单细胞实验的前提是需要获取组织健康优质的单细胞。植物由于细胞壁等因素的限制，让获取优质的植物细胞成为一个难题。许多结构相对简单的植物组织，会采取分离原生质体的方法，获得单细胞。而近来许多研究发现，植物原生质体的分离过程中，常会使细胞处于逆境条件下，使得许多基因表达失调，而且许多结构较为复杂的植物组织往往无法分离出纯净的原生质体[2]。因此，提取优质的细胞核成为了许多植物组织开展单细胞实验的首选。而目前国内外没有有效的方法可以快速提取优质棉花花药的细胞核。

2、参考文献

3、1.lei y,tang r,xu j,wang w,zhang b,liu j,yu x,shi s.(2021)applications of single-cell sequencing in cancer researc本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种单细胞测序级别的棉花花药细胞核提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述单细胞测序级别的棉花花药细胞核提取方法，其特征在于，所述棉花花药切碎时，采用锋利刀片手动切碎。

3.根据权利要求1所述单细胞测序级别的棉花花药细胞核提取方法，其特征在于，在所述切碎或冰浴裂解时，以NIB缓冲液为溶剂；

4.根据权利要求1所述单细胞测序级别的棉花花药细胞核提取方法，其特征在于，所述收集细胞核的方法为将所述裂解物进行滤膜过滤，滤液离心，收集沉淀悬浮于1×PBS中。

5.根据权利要求4所述单细胞测序级别的棉花花药细胞核提取方法，其特征...

【技术特征摘要】

1.一种单细胞测序级别的棉花花药细胞核提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述单细胞测序级别的棉花花药细胞核提取方法，其特征在于，所述棉花花药切碎时，采用锋利刀片手动切碎。

3.根据权利要求1所述单细胞测序级别的棉花花药细胞核提取方法，其特征在于，在所述切碎或冰浴裂解时，以nib缓冲液为溶剂；

4.根据权利要求1所述单细胞测序级别的棉花花药细胞核提取方法，其特征在于，所述收集细胞核的方法为将所述裂解物进行滤膜过滤，滤液离心，收集沉淀悬浮于1×pbs中。

5.根据权利要求4所述单细胞测序级别的棉花花药细胞核提取方法，其特征在于，所述滤膜的孔径为20μm；

6.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：闵玲，李焱龙，孔杰，马欢欢，朱龙付，张献龙，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：