【技术实现步骤摘要】
本申请涉及分子生物学领域，具体涉及一种检测希氏乳杆菌的引物对、试剂盒及方法。
技术介绍
1、希氏乳杆菌(lactobacillus hilgardii)是gras（generally recognized assafe 公认的安全级）菌株，同时希氏乳杆菌作为一株公认的能够促进植物生长的安全菌株被广泛应用于各种经济作物种植中，能够有效防治土传病害并促进植物生长，现广泛应用于保健品、食品、饲料等领域。
2、目前关于希氏乳杆菌的文献报道主要围绕其代谢产物和功能应用，未有特异性的快速检测技术。由于没有快速检测方法，因此目前希氏乳杆菌的检测和鉴定仍依赖于国标乳酸菌培养法（gb4789.35）、生理生化试验、16s rdna测序比对等方法。国标培养需48小时才能形成可见菌落，且菌落鉴定仍需结合其它生理生化试验，操作复杂，耗时长；16s rdna测序比对方法需经过扩增、纯化、测序、比对过程，至少需3天时间，且16s rdna的序列比对难以准确区别近源菌种。
技术实现思路
1、基于此，本申请一实施方式有必要提供一种灵敏度高、特异性强的检测希氏乳杆菌的引物对，使用该引物对可实现希氏乳杆菌的准确、快速检测。
2、具体技术方案包括：
3、一种检测希氏乳杆菌的引物对，所述引物对包括具有seq id no：7所示序列的上游引物和具有seq id no：8所示序列的下游引物。
4、一种检测希氏乳杆菌的试剂盒，所述试剂盒包括所述的引物对。
5、在其中一
6、在其中一个实施例中，所述pcr扩增试剂包括dna聚合酶、dntps、mg2+、pcr染料和缓冲液中的一种或多种。
7、在其中一个实施例中，所述阴性对照品包括无菌去离子水，所述阳性对照品包括希氏乳杆菌的dna。
8、所述的引物对在制备希氏乳杆菌的检测试剂中的应用。
9、一种检测希氏乳杆菌的方法，所述方法包括如下步骤：
10、提取待测样本中的核酸；
11、使用所述的引物对或所述的试剂盒对所述核酸进行检测；
12、根据所得检测结果，判断待测样本中是否含有希氏乳杆菌。
13、在其中一个实施例中，检测的方法包括荧光定量pcr。
14、在其中一个实施例中，荧光定量pcr的反应体系包括pcr扩增试剂、上游引物、下游引物、待测样本中的核酸和无酶水。
15、在其中一个实施例中，荧光定量pcr的反应程序包括90 ℃~95 ℃预变性2 min~3min；90 ℃~95 ℃ 变性8 s~10 s，60 ℃~65 ℃退火25 s~30 s，循环30~40次。
16、相对于传统技术，本申请具备如下有益效果：
17、本申请提供一种灵敏高、特异性好及稳定性的引物对和试剂盒，可用于快速、准确地检测希氏乳杆菌。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种检测希氏乳杆菌的引物对，其特征在于，所述引物对包括具有SEQ ID NO：7所示序列的上游引物和具有SEQ ID NO：8所示序列的下游引物。
2.一种检测希氏乳杆菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物对。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR扩增试剂、DNA提取纯化试剂、阴性对照品和阳性对照品中的一种或者多种。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR扩增试剂包括DNA聚合酶、dNTPs、Mg2+、PCR染料和缓冲液中的一种或多种。
5.根据权利要求3或4所述的试剂盒，其特征在于，所述阴性对照品包括无菌去离子水，所述阳性对照品包括希氏乳杆菌的DNA。
6.权利要求1中所述的引物对在制备希氏乳杆菌的检测试剂中的应用。
7.一种检测希氏乳杆菌的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，检测的方法包括荧光定量PCR。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，荧光定量PCR的反
10.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于，荧光定量PCR的反应程序包括90 ℃ ~95 ℃预变性2 min~3 min；90 ℃ ~95 ℃ 变性8 s~10 s，60 ℃~65 ℃退火25 s~30 s，循环30~40次。
...【技术特征摘要】
1.一种检测希氏乳杆菌的引物对，其特征在于，所述引物对包括具有seq id no：7所示序列的上游引物和具有seq id no：8所示序列的下游引物。
2.一种检测希氏乳杆菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物对。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括pcr扩增试剂、dna提取纯化试剂、阴性对照品和阳性对照品中的一种或者多种。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述pcr扩增试剂包括dna聚合酶、dntps、mg2+、pcr染料和缓冲液中的一种或多种。
5.根据权利要求3或4所述的试剂盒，其特征在于，所述阴性对照品包括无菌去离子水，所述阳性对照品包...
【专利技术属性】
技术研发人员：钱澄倩，纪耀勇，李贤信，黄艳蒙，
申请(专利权)人：天眼天津高新科技有限公司佛山分公司，
类型：发明
国别省市：
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