【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及天然植物提取物领域，特别涉及一种土坛树树皮提取物的制备方法及分离的杜松烷型倍半萜类化合物与应用。
技术介绍
1、土坛树(alangium salviifolium)，又名割舍罗，是八角枫科(alangiaceae)八角枫属(alangium)植物。在我国，主要分布于广东、广西南部沿海地区及海南省。主治祛风活血，解毒催吐，消炎止痛。黎族民间用土坛树的根皮作呕吐剂和解毒剂，对麻风病、皮肤病、痔疮、痢疾、蛇咬伤和湿疹具有一定疗效；土坛树的果实呈鲜红色，味道甜美，可直接食用，可用于泌尿和结石等治疗。
2、国内外对于土坛树的化学成分研究较少，其化学成分主要包括生物碱、三萜、倍半萜、黄酮(苷)等，且都具有较好的生物活性。nobuo yagi(isolation and biologicalactivity of a novel cadinane-type sesquiterpenoid from the essential oil ofalangium salviifolium,j.oleo sci.2014,63(12):1223-1229.)一文中报道了土坛树中倍半萜的抗氧化作用phanruethai pailee(bioactive cardinane sesquiterpenes fromthe stems of alangium salviifolium,chem-asian j,2015,10:910-914.)一文中报道了土坛树中倍半萜的抗肿瘤作用。但目前从土坛树中发现的具有抗肿瘤作用的倍半萜类化合物
技术实现思路
1、鉴于此，本专利技术提出一种土坛树树皮提取物的制备方法及分离的杜松烷型倍半萜类化合物与应用，解决上述问题。
2、本专利技术的技术方案是这样实现的：
3、一种土坛树树皮提取物的制备方法，包括以下步骤：
4、(1)将干燥的土坛树树皮粉碎制得土坛树树皮粉末，土坛树树皮粉末用乙酸乙酯浸提，合并浸提液，减压浓缩得到土坛树树皮乙酸乙酯提取部位浸膏；
5、(2)将步骤(1)得到的土坛树树皮乙酸乙酯提取部位浸膏采用石油醚-乙酸乙酯溶剂体系经过硅胶柱层析，制得土坛树树皮粗提物1；
6、(3)将土坛树树皮粗提物1采用ods柱层析分离，洗脱剂为甲醇-水溶剂，按照5∶95～100∶0(v/v)的梯度进行洗脱，根据极性大小共得12个组分，即fr.1-fr.12，合并fr.1-fr.18得到土坛树树皮提取物。
7、进一步的，所述的土坛树树皮提取物的制备方法，还包括以下步骤：
8、s1：将fr.4经高效液相色谱分析，发现其在240nm，280nm,340nm有强的吸收峰，符号高度氧化杜松烷型倍半萜类化合物的特征，使用正相硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚-丙酮＝10:1～1:0的混合溶剂，洗脱3～6个柱体积，收集流分，根据极性大小得到9个组分，即fr.4a-fr.4i；
9、s2：将fr.4e经高效液相色谱分离制备，得到杜松烷型倍半萜类化合物a1；
10、s3：将fr.2经高效液相色谱分离制备，得到杜松烷型倍半萜类化合物a2和化合物a5；
11、s4：fr.4a经凝胶柱纯化，用甲醇洗脱得到杜松烷型倍半萜类化合物a3；
12、s5：fr.4c经凝胶柱纯化，用甲醇洗脱，再经重结晶得到杜松烷型倍半萜类化合物4。
13、进一步的，所述的土坛树树皮提取物的制备方法，步骤(1)中，所述土坛树树皮粉末和乙酸乙酯的质量比为6-8kg：1l，浸提次数为2-4次，浸提时间为1-3h/次，在35～40℃下超声浸提。
14、进一步的，所述的土坛树树皮提取物的制备方法，步骤(2)中，采用石油醚-乙酸乙酯溶剂体系，按照100∶0～0∶100(v/v)的梯度进行洗脱，每2000ml收集流分，浓缩石油醚-乙酸乙酯溶剂体系为70∶30(v/v)的组分，制得土坛树树皮粗提物1。
15、进一步的，所述的土坛树树皮提取物的制备方法，步骤(3)中，土坛树树皮粗提物1进行ods柱层析分离，洗脱剂为meoh-h2o溶剂，按照5：95～100：0(v/v)的梯度进行洗脱，每500ml收集流分，浓缩各流分，通过tlc检测，合并相同组分后得到12个组分fr.1-fr.12。
16、进一步的，所述的土坛树树皮提取物的制备方法，步骤s2中，所述高效液相色谱分离的色谱条件为：色谱柱为waters c18，流速为2-3ml/min，流动相为体积比为70:30的mecn:h2o。
17、进一步的，所述的土坛树树皮提取物的制备方法，步骤s3中，所述高效液相色谱分离的色谱条件为：色谱柱为waters c18，流速为2-3ml/min，流动相为体积比为58:42的mecn:h2o。
18、进一步的，杜松烷型倍半萜类化合物a1-a5的结构式如式a1-a5所示：
19、
20、进一步的，所述土坛树树皮提取物在制备抗炎、抗肿瘤、糖尿病药物中的应用。
21、进一步的，所述土坛树树皮提取物制备的抗肿瘤的药物为抑制人慢性髓系白血病细胞、人胃癌、人肝癌细胞和人肺癌细胞。
22、进一步的，所述杜松烷型倍半萜类化合物a1和化合物a2在制备抑制人慢性髓系白血病细胞、人胃癌、人肝癌细胞和人肺癌细胞药物中的应用。
23、进一步的，所述杜松烷型倍半萜类化合物a3在制备治疗和/或预防抗炎药物中的应用。
24、进一步的，所述杜松烷型倍半萜类化合物a4和化合物a5在制备治疗糖尿病药物中的应用。
25、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
26、本专利技术以土坛树树皮为原料，以乙酸乙酯为提取溶剂制得土坛树树皮乙酸乙酯提取部位，土坛树树皮乙酸乙酯提取部位通过石油醚-乙酸乙酯溶剂、甲醇-水溶剂洗脱经硅胶、ods分级制得土坛树提取物，土坛树树皮提取物具有抗炎、抗肿瘤、治疗糖尿病的功效。
27、本专利技术从土坛树树皮提取物中分离出两个新的高度氧化的杜松烷型倍半萜类化合物a1和化合物a2，经过试验验证，新化合物a1和化合物a2具有抑制人慢性髓系白血病细胞、人胃癌、人肝癌细胞和人肺癌细胞的功效。
28、本专利技术从土坛树树皮提取物分离出杜松烷型倍半萜类化合物a3、化合物a4、和化合物a5，经过试验验证，化合物a3具有抗炎功效，化合物a4和化合物a5抑制α-葡萄糖苷酶活性的功效，发现了杜松烷型倍半萜类化合物a3-a5新的应用价值。
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1.一种土坛树树皮提取物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的土坛树树皮提取物的制备方法，其特征在于，还包括以下步骤：
3.如权利要求1所述的土坛树树皮提取物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述土坛树树皮粉末和乙酸乙酯的料液比为1kg∶1-1.2L，浸提次数为2-4次，浸提时间为1-3h/次，在35～40℃下超声浸提，步骤(2)中，采用石油醚-乙酸乙酯溶剂体系，按照100∶0～0∶100(V/V)的梯度进行洗脱，每2000mL收集流分，浓缩石油醚-乙酸乙酯溶剂体系为70∶30(V/V)的组分，制得土坛树树皮粗提物1，步骤(3)中，土坛树树皮粗提物1采用ODS柱层析分离，洗脱剂为MeOH-H2O溶剂，按照5∶95～100∶0(V/V)的梯度进行洗脱，每500mL收集流分，浓缩各流分，根据极性大小共得12个组分，即Fr.1-Fr.12。
4.如权利要求2所述的土坛树树皮提取物的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述高效液相色谱分离的色谱条件为：色谱柱为Waters C18，流速为2-3mL/min，流动相为体积比为70
5.权利要求2所述杜松烷型倍半萜类化合物，其特征在于，所述杜松烷型倍半萜类化合物A1-A5的结构式如式A1-A5所示：
6.权利要求1所述土坛树树皮提取物在制备抗炎、抗肿瘤、糖尿病药物中的应用。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述抗肿瘤的药物包括抑制人慢性髓系白血病细胞、人胃癌、人肝癌细胞和人肺癌细胞。
8.权利要求5所述杜松烷型倍半萜类化合物A1和化合物A2在制备抑制人慢性髓系白血病细胞、人胃癌、人肝癌细胞和人肺癌细胞活性的药物中的应用。
9.权利要求5所述杜松烷型倍半萜类化合物A3在制备治疗和/或预防抗炎药物中的应用。
10.权利要求5所述杜松烷型倍半萜类化合物A4和化合物A5在制备治疗糖尿病药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种土坛树树皮提取物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的土坛树树皮提取物的制备方法，其特征在于，还包括以下步骤：
3.如权利要求1所述的土坛树树皮提取物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述土坛树树皮粉末和乙酸乙酯的料液比为1kg∶1-1.2l，浸提次数为2-4次，浸提时间为1-3h/次，在35～40℃下超声浸提，步骤(2)中，采用石油醚-乙酸乙酯溶剂体系，按照100∶0～0∶100(v/v)的梯度进行洗脱，每2000ml收集流分，浓缩石油醚-乙酸乙酯溶剂体系为70∶30(v/v)的组分，制得土坛树树皮粗提物1，步骤(3)中，土坛树树皮粗提物1采用ods柱层析分离，洗脱剂为meoh-h2o溶剂，按照5∶95～100∶0(v/v)的梯度进行洗脱，每500ml收集流分，浓缩各流分，根据极性大小共得12个组分，即fr.1-fr.12。
4.如权利要求2所述的土坛树树皮提取物的制备方法，其特征在于，步骤s2中，所述高效液相色谱分离的色谱条件为：色谱柱为water...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈光英，魏艳梅，余章昕，李小宝，
申请(专利权)人：海南师范大学，
类型：发明
国别省市：
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