曲霉菌属、新型隐球菌、耶氏肺孢子多重检测的引物和探针的组合、试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术提供一种曲霉菌属、新型隐球菌、耶氏肺孢子多重检测的引物和探针的组合、试剂盒及应用，以曲霉菌属（包括烟曲霉、黄曲霉、土曲霉、黑曲霉等）、新型隐球菌、耶氏肺孢子为检测靶标，设计引物和探针，制备多重定量PCR真菌检测试剂盒，适合多种检测样本，灵敏度高、特异性好，而且荧光信号强，为临床针对真菌感染的检测提供可靠的诊断保障。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及真菌检测，尤其涉及曲霉菌属（包括烟曲霉、黄曲霉、土曲霉、黑曲霉等）、新型隐球菌、耶氏肺孢子的引物探针组合及检测试剂盒及其应用。

技术介绍

1、侵袭性真菌病(invasive fungal disease, ifd)，又称侵袭性真菌感染，是指真菌侵入人体组织、血液，并在其中生长繁殖导致组织损害、器官功能障碍和炎症反应的病理改变及病理生理过程。曲霉菌属霉菌、新型隐球菌、耶氏肺孢子属于侵袭性真菌病的病原菌。

2、曲霉菌病是感染曲霉菌引起的一种真菌病，可累及皮肤、黏膜、眼、鼻、支气管、肺、胃肠道、神经系统、骨骼等多器官系统，严重者导致败血症，病例呈世界性分布。病原体曲霉菌属丝状真菌（aspergillus spp.），是一种常见的条件致病性真菌，广泛分布于自然界，其感染者并不少见。曲霉菌易于感染开放的空腔如肺部疾病（如支气管扩张、肿瘤以及结核）导致的肺空洞、鼻窦或外耳道（耳真菌病）。这些部位的感染主要引起局部侵袭性破坏性病变，尽管也可引起系统性感染，尤其在有中性粒细胞减少、使用皮质类固醇的免疫缺陷患者中。常见于临床曲霉菌病的病原体包括，烟本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.曲霉菌属、新型隐球菌、耶氏肺孢子多重定量PCR检测的引物和探针的组合，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的引物和探针的组合，其特征在于：所述探针的5’端标记有荧光报告基团，探针的3’端标记有荧光淬灭基团；其中所述荧光报告基团选自FAM、VIC、HEX、CY5、CY3、JOE和ROX中的任一种；所述荧光淬灭基团选自BHQ1、BHQ2、BHQ3和TAMRA中的任一种。

3.根据权利要求2所述的引物和探针的组合，其特征在于：SEQ ID No.3所示核苷酸序列5’端标记荧光基团ROX，3’端标记猝灭基团BHQ2；SEQ ID No.6所示核苷酸序列的探针的5...

【技术特征摘要】

1.曲霉菌属、新型隐球菌、耶氏肺孢子多重定量pcr检测的引物和探针的组合，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的引物和探针的组合，其特征在于：所述探针的5’端标记有荧光报告基团，探针的3’端标记有荧光淬灭基团；其中所述荧光报告基团选自fam、vic、hex、cy5、cy3、joe和rox中的任一种；所述荧光淬灭基团选自bhq1、bhq2、bhq3和tamra中的任一种。

3.根据权利要求2所述的引物和探针的组合，其特征在于：seq id no.3所示核苷酸序列5’端标记荧光基团rox，3’端标记猝灭基团bhq2；seq id no.6所示核苷酸序列的探针的5’端标记荧光基团fam；3’端标记猝灭基团bhq2；seq id no.9所示核苷酸序列的探针的5’端标记荧光基团cy5，3’端标记猝灭基团bhq3。

4.曲霉菌属、新型隐球菌、耶氏肺孢子多重定量pcr检测的试剂盒, 其包括权利要求1-3任一项所述的引物和探针的组合。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述引物18s-f1、引物18s-r5、引物cap10-f3、引物cap10-r2、引物dhfr-f3、引物dhfr-r5的终浓度独立地分别为 0.1-0.5μm；探针18s-p1-rox、探针cap10-p1-fam、探针dhfr-p1-cy5的终浓度独立地分别为 0.05-0.25μm。

6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括扩增反应液混合物，所述扩增反应液混合物包括pcr缓冲液、dntp溶液、taqdna聚合酶、udg酶。

7.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈海琴，李婷婷，陈冬冬，李翔，
申请(专利权)人：江苏美克医学技术有限公司，
类型：发明
国别省市：