【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物体外发酵，尤其涉及一种发酵菌剂、替抗饲料添加剂及其制备方法和应用。
技术介绍
1、鼠伤寒沙门氏菌(salmonella typhimurium)属于泛嗜性沙门菌，是一种重要的人畜共患病原菌，也是医院较常见的致病菌，可引起各种家禽及人类交叉感染 。
2、临床上治疗鼠伤寒沙门氏菌感染中抗菌药物是重要措施，但目前抗菌药物滥用导致鼠伤寒沙门氏菌感染对大多数药物已具有较为严重的耐药性。最近河南省内发现147株临床鼠伤寒沙门氏菌对氨苄西林、四环素、磺胺异恶唑的耐药率均在89.8％以上，其他如环丙沙星为29.3％、头孢噻呋为17.0％、头孢曲松为16.3％、阿奇霉素为10.2％、头孢西丁为6.1％。此外，动物食用抗生素后，肠道菌群迅速发生变化，某些有益菌被杀害，部分有害菌趁机繁殖，导致动物肠道菌群失衡。而抗生素最终以肉类、奶制品或者以动物粪便污染过的水源等形式，进入人体内，有可能影响人体健康。因此，寻找一种有效的替抗方案迫在眉睫。
3、肠道常见益生菌具有平衡肠道菌群的功效，同时可以释放酸性代谢产物(酪酸、醋酸、乳酸、丁酸和氢气等)，抑制致病菌生长、促进营养吸收、提高免疫力。益生菌抑制作用主要有几个方面：第一，可以分泌乳酸、乙酸、乙醇、细菌素、苯乳酸等抗菌代谢产物；第二，抗菌代谢产物形成酸性微环境，调节肠道菌群；第三，益生菌在肠道竞争性结合位点，抑制病原菌的黏附和定植；第四，可以直接破坏病原菌细胞膜和细胞内结构。
4、因此，开发新型益生菌发酵菌剂，并利用现代微生物体外发酵技术研发替抗生物添
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种发酵菌剂、饲料添加剂及其制备方法和应用，能够替代传统抗生素，对鼠伤寒杆菌具有抑制作用，提升饲养禽畜的肠道免疫力。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
3、一种发酵菌剂，由酪酸梭菌kccm35433、植物乳杆菌kccm1132p、干酪乳杆菌kccm10729p、乳脂乳球菌kccm13024p、鼠李糖乳杆菌kctc13008、罗伊乳杆菌kccm40717按0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2比例制成。
4、优选的是，所述发酵菌剂的制备方法包括以下步骤：挑取各微生物菌落，用无菌生理盐水冲洗2-4次，再用生理盐水调节到0.5麦氏，稀释8～10倍，按体积比0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2混合。
5、本专利技术还提供了一种替抗饲料添加剂，在发酵培养基中添加米糠，利用所述的发酵菌剂发酵制成。
6、本专利技术还提供了所述的饲料添加剂的制备方法，包括以下步骤：将所述的发酵菌剂进行活化培养；活化后的发酵菌剂加入到增殖培养基中，并添加米糠进行增殖培养；发酵完成后离心，取上层液，稀释成活菌浓度为5～6×109cfu·ml-1的菌体悬液，冷冻干燥制成替抗饲料添加剂。
7、优选的是，所述活化培养、增殖培养的培养基为胰蛋白胨大豆肉汤培养基。
8、优选的是，所述活化培养温度为34～38℃，有氧条件下培养18～24h；所述增殖培养温度为35～37℃，有氧条件下培养40～48h。
9、优选的是，所述米糠添加量为15％。
10、优选的是，所述离心为3～5℃环境下8000～10000rpm离心10～15min。
11、优选的是，所述冷冻干燥的冻结温度为-38℃～-42℃，预冻时间2～2.5h，冻结速度-1℃～-2℃/min，冷冻干燥时间10～15h。
12、本专利技术还提供了所述替抗饲料添加剂在制备禽畜饲料中的应用，按质量分数10％添加到禽畜饲料中。
13、相对于现有技术，本专利技术具有如下有益效果：
14、本专利技术提供了一种发酵菌剂，酪酸梭菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、乳脂乳球菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊乳杆菌组成的益生菌，属于食品益生菌，具有饲用安全性。
15、本专利技术还提供了一种替抗饲料添加剂，米糠是具有丰富植物化学素、维生素等营养物质的传统饲料，利用发酵菌剂发酵后，具有：(1)改变米糠不溶性纤维素及活性成分需要肠道菌分解才能被吸收的缺陷，这可以增加米糠营养物质吸收，在提高健康效果方面具有优势；(2)米糠发酵后的发酵液含有的营养物质，更适宜满足益生菌在肠道内生长和繁殖，这更能促进益生菌功效；(3)米糠发酵过程，能生成抗菌物质，这会对体内致病菌产生抑制作用。
16、本专利技术的替抗饲料添加剂能够有效替换禽畜饲料中抗生素的应用，且与抗生素(四环素)比较，替抗饲料添加剂更具有抗致病菌效果，能调节致病菌损伤的肠道菌群的平衡，促进闭锁小带蛋白(zo-1)、紧密连接蛋白(claudin1)表达，更有效保护肠粘膜屏障，改善肠道健康；更具有抗炎效果，更能降低体内炎症因子如肿瘤坏死因子(tnf-α)，核因子(nf-κb)，血红素加氧酶(ho-1)，白细胞介素(il-8)；还能增加禽畜增重率，促进禽畜肠道营养吸收。
17、本专利技术酪酸梭菌kccm35433、植物乳杆菌kccm1132p、干酪乳杆菌kccm10729p、乳脂乳球菌kccm13024p、鼠李糖乳杆菌kctc13008、罗伊乳杆菌kccm40717均通过韩国莱帕坚(株)公司(www.raphagen.com)代理购买，如图4所示。
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1.一种发酵菌剂，其特征在于，由酪酸梭菌KCCM35433、植物乳杆菌KCCM1132P、干酪乳杆菌KCCM10729P、乳脂乳球菌KCCM13024P、鼠李糖乳杆菌KCTC13008、罗伊乳杆菌KCCM40717按0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2比例制成。
2.根据权利要求1所述的发酵菌剂，其特征在于，制备方法包括以下步骤：挑取各微生物菌落，用无菌生理盐水冲洗2～4次，再用生理盐水调节到0.5麦氏，稀释8～10倍，按体积比0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2混合。
3.一种替抗饲料添加剂，其特征在于，在发酵培养基中添加米糠，利用权利要求1所述的发酵菌剂发酵制成。
4.权利要求3所述的替抗饲料添加剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求1所述的发酵菌剂进行活化培养；活化后的发酵菌剂加入到增殖培养基中，并添加米糠进行增殖培养；发酵完成后离心，取上层液，稀释成活菌浓度为5～6×109CFU·mL-1的菌体悬液，冷冻干燥制
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述活化培养、增殖培养的培养基为胰蛋白胨大豆肉汤培养基。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述活化培养温度为34～38℃，有氧条件下培养18～24h；所述增殖培养温度为35～37℃，有氧条件下培养40～48h。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述米糠添加量为15％。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述离心为3～5℃环境下8000～10000rpm离心10～15min。
9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述冷冻干燥的冻结温度为-38℃～-42℃，预冻时间2～2.5h，冻结速度-1℃～-2℃/min，冷冻干燥时间10～15h。
10.权利要求3所述的替抗饲料添加剂在制备禽畜饲料中的应用，按质量分数10％添加到禽畜饲料中。
...【技术特征摘要】
1.一种发酵菌剂，其特征在于，由酪酸梭菌kccm35433、植物乳杆菌kccm1132p、干酪乳杆菌kccm10729p、乳脂乳球菌kccm13024p、鼠李糖乳杆菌kctc13008、罗伊乳杆菌kccm40717按0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2比例制成。
2.根据权利要求1所述的发酵菌剂，其特征在于，制备方法包括以下步骤：挑取各微生物菌落，用无菌生理盐水冲洗2～4次，再用生理盐水调节到0.5麦氏，稀释8～10倍，按体积比0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2混合。
3.一种替抗饲料添加剂，其特征在于，在发酵培养基中添加米糠，利用权利要求1所述的发酵菌剂发酵制成。
4.权利要求3所述的替抗饲料添加剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求1所述的发酵菌剂进行活化培养；活化后的发酵菌剂加入到增殖培养基中，并添加米糠进行增殖培养；发酵完成...
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