【技术实现步骤摘要】
本申请涉及多肽二聚化结构检测，具体而言，涉及一种快速检测多肽二聚化和多肽二级结构的方法。
技术介绍
1、多肽二级结构的研究是理解蛋白质功能和生物活性的重要基础。目前能够直接表征多肽二聚化的方法非常少而且多为间接方法，其中有fret(荧光共振能量转移)，此方法需要将多肽修饰上荧光分子，操作复杂，而且需要用到昂贵的仪器，多肽二聚化的程度需要通过fret效率换算，特别是对于不能被修饰上荧光的分子不适用。另外一种方法是cd(圆二色谱)，此方法同样用到昂贵的仪器，而且前提是多肽二聚化后二级结构必须有明显的改变，无法实时监测外界环境对多肽二聚化的影响，同时cd检测的样品用量特别多，不适用于前期化合物和条件筛选。
技术实现思路
1、本申请的目的在于提供一种快速检测多肽二聚化和多肽二级结构的方法，此方法具有用时短且经济简便的优点，适用于多肽二级结构及二聚化的前期检测。
2、本申请解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
3、本申请实施例提供一种快速检测多肽二聚化和多肽二级结构的方法，其包括以下步骤：
4、s1、配制凝胶，上述凝胶中不含有染色剂；
5、s2、待测多肽样品加样；
6、s3、电泳，电泳条件为：电压5-15v/cm，温度6-8℃；
7、s4、分析结果：当条带显示为条带明晰且无拖带现象时，多肽结构为线性或者环状；以线性或者环状多肽的条带作为对照组，当待测多肽样品和对照组条带位移一致时，说明待测样品中多肽结构与对照组一致
8、多肽所带电荷的正负在电泳的作用下会分别向电极负极和正极迁移，而迁移的速率跟多肽的带电量，分子量大小，以及空间结构相关，这三种因素决定了电泳结束时多肽在凝胶上迁移的距离，即条带位置，线性和环状的多肽均具有特定的电性，因此由于正负电泳作用力能够在凝胶上呈现清晰的条带，而二聚化的条带在本申请研究人员多次观察分析后，发现部分样品会呈现一条清晰的条带，部分样品呈现拖带，条带不清晰的现象，这可能是跟其结合力弱，或者二聚化后呈现电中性所导致的。经过多次试验验证发现，部分二聚化样品呈现为一条清晰的条带，而另一部分二聚化样品呈现为不清晰和拖带的现象，试验结果可重复，根据这一特点将其应用于检测多肽二聚化或二级结构将节省更多的时间和经费，再者，由于此步骤操作简便，简单培训试验人员后即可操作，一次试验最少花费时间可以在1-2h内拿到结果，所用试验材料均可从市场上购买，且价格相比现有技术中用到的精密仪器更为便宜，更重要的是，此方法可以直观表征多肽的二聚化状态以及多肽二级结构的改变，不需要对多肽进行额外的修饰，还可实时检测光照等外界环境对多肽二聚化的影响，十分适用于多肽二级结构及二聚化的前期检测。
9、相对于现有技术，本申请的实施例至少具有如下优点或有益效果：
10、本申请提供的一种快速检测多肽的二聚化和多肽二级结构具有快速有效的特点，相比现有技术中琼脂糖凝胶电泳仅用于分析和纯化dna，我们将其用于小分子多肽的表征上，并对配方做了筛选和优化，整个表征流程快速便宜，经济高效，能够用于快速有效的判断多肽的二聚化或二级结构，电泳缓冲液的准备，能维持非变性条件，不能破环二聚体多肽间的相互作用，用于后续的实验研究，能够为试验人员节省时间和精力。
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1.一种快速检测多肽二聚化和多肽二级结构的方法，其特征在于，其包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的快速检测多肽二聚化和多肽二级结构的方法，其特征在于，所述凝胶为琼脂糖凝胶。
3.根据权利要求2所述的快速检测多肽二聚化和多肽二级结构的方法，其特征在于，所述琼脂糖凝胶的质量分数为1.5％-2％。
4.根据权利要求1-3任一项所述的快速检测多肽二聚化和多肽二级结构的方法，其特征在于，所述S1中配制凝胶的具体步骤为：称取凝胶粉加入到CN-PAGE缓冲液中搅拌混匀后，在微波炉内加热至凝胶粉溶解并且无气泡后得到凝胶溶液，将溶解状态的凝胶溶液倒入胶板中，向胶板中间的胶槽中插入梳子，待凝胶溶液冷却形成胶体即制得凝胶。
5.根据权利要求4所述的快速检测多肽二聚化和多肽二级结构的方法，其特征在于，所述S2中加样的具体步骤为：
6.根据权利要求1所述的快速检测多肽二聚化和多肽二级结构的方法，其特征在于，所述S4中分析结果时，采用的方法是将电泳后的凝胶放在紫外灯下观察样品分离情况。
7.根据权利要求1所述的快速检测多肽二聚化和多
8.根据权利要求7所述的快速检测多肽二聚化和多肽二级结构的方法，其特征在于，所述染色过程为：取凝胶放入染色液中，确保染色液覆盖凝胶，置于摇床上摇动，染色至凝胶颜色和染色液的颜色接近，染色液中几乎看不清凝胶时，停止染色，随后倾去染色液，用脱色液冲洗凝胶，以脱色液覆盖凝胶，缓慢摇动2-4h，倾去脱色液，再加入新的脱色液进行脱色，直至获得清晰的染色的条带和干净的背景即可。
9.根据权利要求7或8所述的快速检测多肽二聚化和多肽二级结构的方法，其特征在于，所述染色液为考马斯亮蓝染色液。
...【技术特征摘要】
1.一种快速检测多肽二聚化和多肽二级结构的方法，其特征在于，其包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的快速检测多肽二聚化和多肽二级结构的方法，其特征在于，所述凝胶为琼脂糖凝胶。
3.根据权利要求2所述的快速检测多肽二聚化和多肽二级结构的方法，其特征在于，所述琼脂糖凝胶的质量分数为1.5％-2％。
4.根据权利要求1-3任一项所述的快速检测多肽二聚化和多肽二级结构的方法，其特征在于，所述s1中配制凝胶的具体步骤为：称取凝胶粉加入到cn-page缓冲液中搅拌混匀后，在微波炉内加热至凝胶粉溶解并且无气泡后得到凝胶溶液，将溶解状态的凝胶溶液倒入胶板中，向胶板中间的胶槽中插入梳子，待凝胶溶液冷却形成胶体即制得凝胶。
5.根据权利要求4所述的快速检测多肽二聚化和多肽二级结构的方法，其特征在于，所述s2中加样的具体步骤为：
6.根据权利要求1所述的快速检测...
【专利技术属性】
技术研发人员：张余，侯丽强，
申请(专利权)人：杭州诺泰诺和生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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