一种寡核苷酸反相离子对液相色谱分析方法技术

本发明专利技术公开了一种寡核苷酸反相离子对液相色谱分析方法，包括配制样品溶液：称取样品置于容量瓶中，溶解后定容，得到样品溶液；配制流动相A，流动相B与流动相C，经微孔膜过滤，超声脱气后，采用高效液相色谱仪对样品溶液进行检测，检测寡核苷酸纯度；采用面积归一化法进行纯度结果计算。本发明专利技术采用寡核苷酸反相离子对液相色谱分析方法色谱条件范围宽，适用于各类序列和不同长度的寡核苷酸纯度检测，可与质谱对接联用，快速分析样品纯度和分子量，梯度范围宽，可以此为基础，微调梯度，达到各类寡核苷酸最佳分离效果，达到对寡核苷酸质量进行有效控制的目的。效控制的目的。效控制的目的。

【技术实现步骤摘要】
一种寡核苷酸反相离子对液相色谱分析方法


[0001]本专利技术属于分析领域，具体涉及一种寡核苷酸反相离子对液相色谱分析方法。

技术介绍

[0002]寡核苷酸药物是指含有10～30个碱基的RNA或DNA分子及其类似物，可以在基因水平上干扰致病蛋白质的产生，从而达到治疗疾病的目的，因此也是近年来药物研发领域中的热点之一。合成寡核苷酸在作为治疗剂治疗各种疾病(例如癌症和病毒性疾病)方面的重要性日益突显。寡核苷酸类药物包括反义寡核苷酸、小干扰RNA(siRNA)和适配体。反义寡核苷酸和siRNA均通过阻止mRNA翻译从而阻止蛋白质合成。适配体通过形成适配体
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蛋白质复合物，从而抑制蛋白质的生物学功能。
[0003]寡核苷酸药物的分子量较大，通常为6000～8000，在水中几乎以阴离子形式存在，会形成一个负电荷聚集的分子体。根据这样的结构特征，常用的分析方法有反相离子对色谱、亲水色谱、阴离子交换色谱和毛细管电泳等。其中，反相离子对色谱具有分离度高、结果稳定、操作简便、易与MS检测器对接及可同时分离N
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1杂质等本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种寡核苷酸反相离子对液相色谱分析方法，其特征在于，所述寡核苷酸反相离子对液相色谱分析方法包括：1)配制样品溶液：称取样品置于容量瓶中，溶解后定容，得到样品溶液；2)配制流动相A，流动相B与流动相C，经微孔膜过滤，超声脱气后，采用高效液相色谱仪对样品溶液进行检测，检测寡核苷酸纯度；3)采用面积归一化法进行纯度结果计算。2.根据权利要求1所述的一种寡核苷酸反相离子对液相色谱分析方法，其特征在于，步骤1)中，所述样品溶液的浓度为0.8
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1.0mg/mL，溶解样品所用的容积为纯化水。3.根据权利要求1所述的一种寡核苷酸反相离子对液相色谱分析方法，其特征在于，步骤2)中，高效液相色谱仪为Agilent1290超高效液相色谱仪，配紫外检测器和全波长检测。4.根据权利要求1所述的一种寡核苷酸反相离子对液相色谱分析方法，其特征在于，步骤2)中，色谱柱为Thermo Scientific
TM
Dionex
TM
DNAPac
TM
RP，色谱柱规格为长度100mm，内径3.0mm，填料粒径为4.0μm。5.根据权利要求1所述的一种寡核苷酸反相离子对液相色谱分析方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯丽强，刘婷，李泽亚，安婷婷，
申请(专利权)人：杭州诺泰诺和生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：